探讨缺血性脑卒中患者 HCY和亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性分析

探讨缺血性脑卒中患者 HCY和亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性分析

叶扬 1 王先化 2 温靖玄 1 吕晋洪 1

1新疆昌吉州人民医院检验科， 831100； 2新疆昌吉州疾病预防控制中心质控科， 831100

摘要 目的：探讨缺血性脑卒中患者血浆同型半胱氨酸(HCY)水平和亚甲基四氢叶酸还原酶基因MTHFR多态性的关系。方法：缺血性脑卒中患者181例纳入卒中组，健康人126例纳入对照组。检测两组HCY、叶酸、VitB12水平、MTHFR基因多态性及一般情况，并分析不同基因型的脑卒中患者血浆HCY、叶酸、VitB12水平。结果：卒中组的HCY水平均显著高于对照组(P<0.05)，而VitB12、叶酸水平均显著低于对照组(P<0.05)。卒中组MTHFR基因TT纯合子率及T等位基因频率均显著高于对照组(P<0.05)。结论：HCY是人体甲硫氨酸循环的中间产物，高HCY是脑血管病的独立危险因素。HCY的代谢需要MTHFR、叶酸的共同参与。MTHFR是HCY代谢过程中的关键酶。

关键词：同型半胱氨酸；MTHFR基因；缺血性脑卒中；基因多态性

高同型半胱氨酸血症已被公认为动静脉血栓形成的独立危险因素之一。血浆同型半胱氨酸(HCY)水平升高的主要原因有营养因素和遗传性因素，前者由于HCY代谢中的辅酶如叶酸、维生素B12摄人不足，后者是因为HCY代谢相关酶基因突变所导致的代谢功能缺陷^[1]，其中5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)的基因多态性与人体HCY的增高相关。本研究通过对缺血性脑卒中患者血浆HCY、叶酸、VitB12浓度及MTHFR基因677位点多态性分析，为利用个体遗传特征进行缺血性脑卒中的预防和早期治疗奠定基础。

l资料与方法

1.1一般资料

选择2017年1月至2018年12月在昌吉州人民医院神经内科住院的急性缺血性脑卒中患者181例为卒中组。所有患者均符合中国急性缺血性脑卒中诊治指南诊断标准，并经颅脑CT和(或)MRI检查确诊。选择同期健康体检者126例为对照组，均无脑梗死或其他脑血管病变，心电图正常。

1.2主要试剂和仪器

BR-526-24全自动杂交仪、BE-2.0生物芯片识读仪、ADVIA Centaur XP全自动免疫仪、T100 PCR仪。全血基因组DNA提取试剂盒、MTHFR基因检测DNA微阵列芯片法试剂盒购于上海百傲科技有限公司。HCY测定试剂盒、VitB12测定试剂盒、叶酸检测试剂盒购于德国西门子公司。

1.3方法

1.3.1 血浆HCY、VitB12、叶酸浓度测定受试者肘静脉采血2mL(EDTA抗凝)，离心分离血浆，一20℃保存。按照HCY、VitB12、叶酸测定试剂盒说明书，采用化学发光免疫竞争法分别测试受试者血浆样本中HCY、VitB12、叶酸浓度。

1.3.2 MTHFR基因分型检测 受试者经肘静脉采集外周血2mL (EDTA抗凝)，按照全血DNA提取试剂盒说明书进行DNA提取和纯化。按照MTHFR基因检测DNA微阵列芯片法试剂盒说明书，使用生物素标记的MTHFR基因特异性荧光引物对已纯化的DNA标本进行PCR扩增。采用全自动杂交仪对PCR产物进行杂交及显色，随后用生物芯片识读仪及基因芯片图像分析软件(Baio Array Doctor V2.0)判读MTHFR 677位点的等位基因，并定义为野生型(C/C)、杂合突变型(C/T)、纯合突变型(T/T)。

1.4 统计学处理

采用SPSS 21.0统计软件进行数据分析。采用Hardy-Weinberg平衡定律计算各等位基因频率分布数据的可靠性。

2结果

2.1 两组基本情况比较

卒中组的收缩压水平及HCY水平均显著高于对照组(P<0.05)，而VitB12、叶酸水平均显著低于对照组(P<0.05)。两组年龄、性别、吸烟、饮酒、高血压患病率、舒张压、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白(LDL)及高密度脂蛋白(HDL)差异均无统计学意义。

2.2 两组MTHFR基因分布频率比较

本研究卒中组MTHFR等位基因分布的频率符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)，故认为群体基因遗传平衡，数据来自同一孟德尔群体。卒中组MTHFR基因TT纯合子率及T等位基因频率均显著高于对照组(P<0.05)，而C/C野生型频率及C等位基因频率均显著低于对照组(P<0.05)。

2.3 MTHFR基因多态性与血浆HCY、VitB12、叶酸水平的关系

本研究中卒中组MTHFR基因C/T杂合突变型及T/T纯合突变型HCY水平均显著性高于对照组，T/T纯合突变型叶酸水平显著性低于对照组(P<0.05)。卒中组内T/T纯合突变型HCY水平显著高于C/C野生型(P=0.011)及C/T杂合突变型(P=0.018)，叶酸水平显著低于C/C型(P=-0.001)和C/T型(P=0.011)。对照组内T/T纯合突变型HCY水平显著高于C/C野生型(P=-0.048)及C/T杂合突变型(P=0.044)，维生素B12水平显著低于C/C型(P=0.014)，叶酸水平显著低于C/C型(P=0.001)。

3讨论

HCY是人体甲硫氨酸循环的中间产物，高HCY是脑血管病的独立危险因素^[2]。HCY的代谢需要MTHFR、叶酸的共同参与。MTHFR是HCY代谢过程中的关键酶，此过程还需要辅酶VitB12的参与。因此，MTHFR活力下降及叶酸、VitB12缺乏均是导致HCY升高的重要原因。本研究中，卒中组和对照组T/T型血浆HCY水平均显著高于本组C/C型和C/T型，说明T/T组MTHFR的酶活性最低，T/T突变是血栓性疾病的重要遗传性风险因素。临床医生在条件允许的前提下，可以同时检测患者MTHFR C677T基因多态性及HCY水平，以结合遗传特征早期采取预防或治疗措施，实行个体化用药方案。

参考文献

[1]中华医学会神经病学分会，中华医学会神经病学分会脑血管病学组．中国急性缺血性脑卒中诊治指南[J]．中华神经科杂志，2015,48:246-257．

[2]韩瑞玲，李艳．武汉地区缺血性脑卒中患者MTHFR基因多态性分布分析[J]．神经损伤与功能重建，2016,11:200-202．