摘要
目的建立人颗粒溶素（granulysin.GNLY）mRNA荧光定量的检测方法，构建克隆载体pMD18-T-GNLY作为定量模板，在ABI7900HT型实时荧光定量PCR检测仪上通过荧光强度达到一定阈值时的循环数来定量起始模板，来建立实时荧光定量RT-PCR方法，并检测了40名正常健康献血者外周血中GNLY的表达。结果本方法的动态检测范围为10^3～10^9拷贝／μgRNA（r^2≥0.996），内参18srRNA的动态检测范围为10^3～10^8拷贝/μgRNA（r^2≥0.996）；低值的批内、批间的重复性分别为10.33％和17.32％，高值的批内、批间的重复性分别为6．41％和8．46％；而40名正常健康人外周血的PBMCs中均有GNLYmRNA的表达，范围为3.12×10^6～4．32×10^7拷贝／μgRNA，均值为（2．0±1．3）×10^7拷贝／μgRNA。结论成功建立了人GNLY基因表达含量的荧光定量检测方法，检测结果可用绝对拷贝数表示，定量准确可靠。GNLYmRNA荧光定量测定方法的建立为研究GNLYmRNA表达水平与感染性疾病免疫机制的关系奠定了基础。
出版日期
2006年01月11日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
