简介：摘要目的探讨棕色脂肪源性神经调节蛋白4（NRG4）对糖尿病肾病（DN）小鼠炎症的保护作用。方法采用高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素建立DN小鼠模型，造模成功后将野生型（WT）和NRG4基因敲除（KO）小鼠分为WT-DN+绿色荧光蛋白（D-WT-GFP）组、KO-DN+绿色荧光蛋白（D-KO-GFP）组、KO-DN+NRG4（D-KO-NRG4）组，D-WT-GFP组和D-KO-GFP组在小鼠肩胛间区棕色脂肪一次性注射腺相关病毒绿色荧光蛋白，D-KO-NRG4组注射腺相关病毒转录NRG4。另设普通饲料喂养WT小鼠作为对照组（WT-CON）。每组6只。8周实验结束后，检测各组小鼠糖化血红蛋白（HbA1c）、血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、游离脂肪酸（FFA）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、尿白蛋白/肌酐比值（UACR）、血清白细胞介素（IL）-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等指标。采用过碘酸希夫染色和电镜观察足细胞损伤情况及肾组织病理改变。采用免疫组织化学法检测肾组织F4/80表达。采用实时荧光定量聚合酶链反应分析各组小鼠肾组织IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达量。采用Western blotting法检测D-KO-GFP组与D-KO-NRG4组小鼠各组织NRG4蛋白表达水平。采用单因素方差分析比较组间差异。采用Pearson相关分析法分析血清NRG4水平与血清炎症因子、UACR、肾组织F4/80表达的相关性。结果与D-WT-GFP组相比，D-KO-GFP组小鼠UACR明显升高（P<0.01），肾小球面积增大，系膜基质增生和足细胞损伤，血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著升高且肾组织中IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达也升高（P<0.01），同时肾组织F4/80表达增加（P<0.01）。此外，与D-WT-GFP组相比，D-KO-GFP组小鼠HbA1c、TG、TC、FFA、LDL-C水平升高且体重增加（P<0.01）。而与D-KO-GFP组相比，D-KO-NRG4组小鼠UACR水平降低（P<0.01），肾脏炎症指标F4/80表达降低（P<0.01），HbA1c、TG、TC、FFA、LDL-C水平下降且体重降低（P<0.01）。Pearson相关分析结果显示，血清NRG4与IL-1β、IL-6、TNF-α、UACR、肾组织F4/80表达呈负相关（r=-0.548、-0.637、-0.553、-0.503、-0.554，均P<0.05）。Western blotting结果显示，D-KO-NRG4组小鼠棕色脂肪中NRG4蛋白表达水平较高，而肝脏、肾脏、骨骼肌和白色脂肪中NRG4的表达水平较低（P<0.05）。结论棕色脂肪源性NRG4可以降低DN小鼠抑制肾脏炎症反应，降低蛋白尿，减轻DN肾脏损伤。

简介：摘要目的探讨髓源性生长因子（MYDGF）对肥胖小鼠白色脂肪棕色化的影响。方法高脂饲料喂养雄性C57BL/6J野生型（WT）小鼠和MYDGF基因敲除（KO）小鼠12周，根据使用腺相关病毒（AAV）-MYDGF或AAV-绿色荧光蛋白（GFP）干预，将WT和KO小鼠分为WT-GFP组、WT-MYDGF组、KO-GFP组和KO-MYDGF组，普通饲料喂养的WT小鼠作为对照组。收集各组小鼠的体重、日间和夜间产热量，解剖分离各组小鼠两侧附睾白色脂肪组织（eWAT）、腹股沟白色脂肪组织（iWAT）和肩胛棕色脂肪组织（iBAT）并称重，HE染色观察脂肪细胞形态，免疫组化和实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测皮下脂肪棕色化相关基因［解偶联蛋白1（UCP1）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α（PGC-1α）、PR结构域蛋白16（PRDM16）］的表达，免疫荧光检测皮下脂肪血管数量。根据噻唑蓝（MTT）实验结果，选择使用100 ng/ml重组MYDGF（rMYDGF）干预24 h的3T3-L1细胞作为实验（rMYDGF）组，未进行rMYDGF干预的细胞培养24 h作为对照（Vehicle）组，采用RT-PCR和Western blot法检测两组细胞UCP1、PPARγ、PGC-1α、PRDM16的mRNA和蛋白的表达水平。采用独立样本t检验比较组间差异。结果共纳入30只小鼠，对照组、WT-GFP组、WT-MYDGF组、KO-GFP组和KO-MYDGF组各6只。干预12周后，与WT-GFP组和KO-GFP组相比，WT-MYDGF组与KO-MYDGF组小鼠体重均降低，日间和夜间产热能力均提高，UCP1、PPARγ、PGC-1α、PRDM16的mRNA表达水平和血管数量均增高（P<0.05），小鼠eWAT和iWAT的体积和细胞均减小；与WT-GFP组相比，WT-MYDGF组的eWAT和iWAT重量均减小（P<0.05）；与KO-GFP组相比，KO-MYDGF组的eWAT重量减小（P<0.05）。体外培养3T3-L1脂肪细胞并使用重组MYDGF干预的结果显示，与Vehicle组相比，rMYDGF干预组的棕色化相关基因UCP1、PPARγ、PGC-1α、PRDM16的mRNA和蛋白的表达水平均增高（P<0.05）。结论MYDGF可促进肥胖小鼠白色脂肪棕色化。