简介：摘要目的观察长链非编码RNA Crnde通过调节Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对小鼠成骨细胞增殖的影响。方法培养MC3T3-E1成骨细胞，随后诱导分化3周，实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Crnde表达，应用CRISPR-Cas9方法构建Crnde基因敲除小鼠模型，同时以野生型小鼠作为对照，分为Crnde基因敲除小鼠组(n＝25)和野生型小鼠组(n＝25)，小鼠处死前12 h腹腔注射BrdU进行染色观察成骨细胞增殖，检测血清1型前胶原N末端(P1NP)和Ⅰ型胶原羧基端交联肽(CTX-Ⅰ)表达，蛋白质印迹法(Western blot)检测骨组织Wnt和β-catenin蛋白表达，原位缺口末端标记法(TUNEL)染色检测细胞凋亡情况，分别运用Osteomeasure系统和MicroCT分析进行骨组织形态计量分析，双荧光素酶报告基因验证Crnde与Wnt蛋白的靶向调节关系。组间比较采用t检验。结果成骨细胞分化过程Crnde表达情况为在诱导的3周时间内，随着时间延长，Crnde表达明显增加，在第3周表达最高(P>0.05)；Wnt和β-catenin在Crnde-/-小鼠和正常小鼠中表达情况中，蛋白质印迹法(Western blot)结果显示，Crnde-/-组中Wnt和β-catenin蛋白表达低于WT小鼠组(P<0.05)；BrdU免疫荧光染色结果显示，正常对照组小鼠胫骨存在大量BrdU阳性细胞，而Crnde-/-小鼠细胞显著减少；TUNEL染色显示正常对照组小鼠与Crnde-/-小鼠小鼠凋亡成骨细胞数量差异无统计学意义(P>0.05)；μCT和Osteomeasure系统结果显示，椎骨的组织形态分析BV/TV，WT组[(19.43±1.53)%]，Crnde-/-组[(20.14±1.56)%]，Crnde-/-鼠的小梁和皮质骨均显示出低骨量表型，Crnde-/-小鼠的骨形成参数均与野生型小鼠差异有统计学意义(P<0.05)；Crnde-/-小鼠血清P1NP和CTX-I分别为(15.62±1.23) μg/L和(12.36±1.12) μg/L，WT小鼠血清P1NP和CTX-I分别为(22.81±1.56) μg/L和16.21±1.21) μg/L，Crnde-/-小鼠组均比WT小鼠组明显下降(P<0.05)；双荧光素酶报告基因检测结果显示Crnde模拟物显著降低了野生型组荧光素酶活性(P<0.05)，而对突变组荧光素酶活性基本无影响(P>0.05)。结论Crnde通过Wnt/β-catenin信号传导调节骨形成。

简介：摘要目的探究姜黄素(CMM)通过Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对脊髓损伤(SCI)小鼠的神经保护作用。方法采用改良Allen’s击打法制备SCI小鼠模型，采用随机数字表将小鼠分为CMM组和生理盐水处理组(Veh组)。术后3 d，小鼠麻醉处死，干湿称重法检测脊髓含水量，氟替啶(HEt)染色检测活性氧(ROS)的积累，酶联免疫吸附试验(ELISA试剂盒)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-1β的表达，BMS评分评价小鼠的运动功能，原味缺口末端标记法(TUNEL)试剂盒检测损伤部位附近区域的细胞凋亡数量，并通过检测Frizzled，β-catenin以及GSK-3β的蛋白表达探究其作用机制。组间比较采用t检验和单因素方差分析。结果(1)CMM组小鼠脊髓含水量[(79.01±1.12)%]低于Veh组[(81.32±2.10)%]，差异有统计学意义(n＝6，t＝4.316，P<0.05)。(2)CMM组的荧光强度(1 329.83±149.82)明显低于Veh组(1 855.67±131.90)，差异有统计学意义(n＝6，t＝7.200，P<0.05)。(3)CMM组致炎因子IL-1β的表达量(736.17±59.37)低于Veh组(1 117.17±50.14)，TNF-α的表达量(795.83±49.07)低于Veh组(1 079.67±58.41)，差异有统计学意义(n＝6，t＝5.340、6.981，P<0.05)。(4)SCI后第7、14、21、28天，CMM组BMS评分(2.50±0.31、3.75±0.45、4.00±0.50、4.50±0.21)高于Veh组(1.00±0.29、2.00±0.26、2.50±0.20、2.75±0.21)，差异有统计学意义(n＝6，F＝6.743，P<0.05)。(5)CMM组细胞凋亡数量[(76.25±10.32)个]明显低于Veh组[(90.32±11.25)个]，差异有统计学意义(n＝6，t＝6.901，P<0.05)。(6)对比Veh组，CMM组的Frizzled(1.24±0.46比1.01±0.02，n＝6，t＝5.329，P<0.05)，β-catenin的蛋白表达量均上调(1.57±0.32比0.99±0.11，n＝6，t＝4.892，P<0.05)，GSK-3β的蛋白表达量下调(0.72±0.31比0.98±0.06，n＝6，t＝6.210，P<0.05)。结论CMM通过Wnt/β-catenin信号通路对SCI小鼠发挥神经保护作用。

简介：摘要目的探索微小RNA(miRNA，miR)-345-5p对成骨细胞的调控机制。方法利用miRNA芯片寻找差异表达miRNA。pLVX-IRES-ZsGreen1质粒构建miR-345-5p过表达载体，建立过表达miR-345-5p大鼠成骨细胞、过表达变异miR-345-5p大鼠成骨细胞和空白对照组。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)及生长曲线实验对比3组细胞增殖能力，双荧光素酶报告基因实验验证miR-345-5p与Smad1基因相互作用。构建miR-345-5p+空质粒、对照RNA+空质粒、对照RNA+Smad1质粒和miR-345-5p+Smad1质粒组，在大鼠成骨细胞内验证miR-345-5p与Smad1基因的相互作用。采用Student-t检验和ANOVA分析。结果生信分析提示miR-345-5p在骨折中的高表达，Smad1为其调控分子。将miR-345-5p质粒导入大鼠成骨细胞，CCK-8提示miR-345-5p质粒较miR-345-5p变异体质粒(48 h：q＝7.453，P<0.01，72 h：q＝15.34，P<0.01)及空白质粒(48 h：q＝6.963，P<0.01，72 h：t＝12.68，P<0.01)成骨细胞的活性显著增强。生长曲线显示转入miR-345-5p质粒的成骨细胞48 h时细胞数量显著低于空白对照组(q＝3.814，P<0.05)，72 h时细胞数量显著低于miR-345-5p变异(q＝11.010，P<0.01)和对照组(q＝10.410，P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-345-5p可降低野生型Smad1-3’端非编码区(3’UTR)质粒组荧光素酶的活性，细胞实验证实miR-345-5p显著降低大鼠成骨细胞的活性和生长曲线，过表达Smad1后成骨细胞的活动和生长曲线得到恢复。结论miR-345-5p通过调控Smad1分子调控大鼠成骨细胞的增殖参与骨折的愈合。

简介：摘要目的探讨肌电图(EMG)检查是否可以预判C5神经根麻痹患者的功能恢复情况。方法收集郑州大学第一附属医院2016年1月至2020年5月接受颈后路单开门椎管扩大成形术的脊髓型颈椎病患者897例，术后发生C5神经根麻痹的患者51例，其中男41例，女10例，年龄(59.3±8.2)岁。记录术后C5神经根麻痹发生时间、受损后三角肌运动功能恢复情况、损伤后EMG的变化；结合患者的肌力恢复情况，将患者分为完全恢复组、部分恢复组和没有恢复组；并按损伤后不同的时间点(≤6周、6周至6个月及≥6个月)进行亚组分析。计量资料采用t检验；分类变量采用χ2检验或Fisher精确检验。结果共27例术后C5神经根麻痹患者接受了连续的EMG检查。在损伤≤6周的EMG检查中出现≥+2的纤颤的患者，其肌力将不太可能恢复，阳性预测值(PPV)为89.3%。损伤后6周至6个月间进行的EMG检查，与部分恢复组的患者比较，完全恢复组的患者检测到正尖波(55.6%和0%)的可能性更小(Fisher精确检验，P<0.05)，差异有统计学意义，募集相异常(88.9%和0.0%)的可能性更低(Fisher精确检验，P<0.05)，差异有统计学意义，且更少出现运动单位电位(MUAP)时限增宽(66.7%和0.0%，Fisher精确检验，P<0.05)，差异有统计学意义。损伤后6周至6个月在检查中的募集相检测为干扰相的患者有可能完全恢复的PPV为89.7%。结论EMG可早期识别并预判C5神经根麻痹后可能出现的完全、部分或没有恢复等情况，对于早期判定功能不可能恢复的C5麻痹至关重要。

简介：摘要目的观察白藜芦醇(RES)对脊髓损伤(SCI)小鼠炎性反应和抑郁情绪的影响。方法采用改良的Allen’s击打法制作SCI小鼠模型，采用随机数字表将小鼠分为假手术组、对照组和治疗组。术后3 d，干湿称重法检测小鼠损伤侧脊髓含水量，二氢乙锭(HEt)染色检测活性氧(ROS)的积累，酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。并通过核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)和SOD1蛋白表达探究其作用机制。术后28 d，我们通过悬尾试验、糖水偏好试验来评估白藜芦醇抗抑郁作用。组间比较采用t检验和单因素方差分析。结果治疗组损伤部位含水量(78.85±2.57)低于对照组(81.26±3.12)，差异有统计学意义(n＝5，t＝-2.464，P<0.05)。治疗组小鼠糖水偏嗜度[(62.17±3.83)%]高于对照组[(55.63±3.69)%]，差异有统计学意义(n＝8，t＝6.883，P<0.05)。SCI后28 d，治疗组小鼠不动时间[(205.80±5.03) s]低于对照组[(256.15±8.20) s]，差异有统计学意义(n＝8，t＝-14.573，P<0.05)。治疗组ROS的积累[(2 523.23±89.22)%]低于对照组[(3 219.50±101.60)%]，差异有统计学意义(n＝5，t＝-13.825，P<0.05)。治疗组SOD活力[(59.20±9.22) U/mg]高于对照组[(42.50±8.52) U/mg]，差异有统计学意义(n＝5，t＝3.547，P<0.05)。治疗组减少MDA含量[(6.23±1.52) nmol/mg]高于对照组[(4.92±1.60) nmol/mg]，差异有统计学意义，(n＝5，t＝2.361，P<0.05)。治疗组IL-1β[(45.32±11.23) ng/ml]低于对照组[(65.21±9.02) ng/ml]，治疗组TNF-α[(735.32±33.29) ng/ml]低于对照组[(821.22±29.80) ng/ml]，差异有统计学意义(n＝5，t＝-3.534，P<0.05；n＝5，t＝-3.944，P<0.05)。治疗组Nrf2(1.23±0.52)高于对照组(0.92±0.65)，差异有统计学意义(n＝5，t＝2.302，P<0.05)。治疗组HO-1和SOD1(1.23±0.32、2.02±0.26)高于对照组(0.89±0.22、0.92±0.31)，差异有统计学意义(n＝5，t＝3.306，P<0.05；n＝5，t＝8.731，P<0.05)。结论小鼠SCI后，白藜芦醇通过激活Nrf2通路对小鼠的抑郁情绪和炎性反应有明显改善作用。

简介：摘要目的对比弹性棒非融合术及融合术治疗单节段腰4/5椎间盘突出(LDH)的临床疗效、椎间隙高度及腰椎-骨盆矢状位参数等数据的变化，评估弹性棒系统在临床中长期应用的价值。方法郑州大学第一附属医院收治57例单节段腰4/5 LDH患者，分为融合组31例，非融合组26例，比较分析两组患者一般资料及手术前后Oswestry功能障碍指数(ODI)、疼痛视觉模拟量表(VAS)评分和日本矫形外科学会评分(JOA)和腰3/4、4/5、腰5/骶1节段椎间隙前缘及后缘高度、PI、PT、SS、LL等资料，组间比较采用两独立样本的t检验，组内比较采用配对t检验。结果两组ODI、JOA及VAS评分术前、术后3年及末次随访差异均无统计学意义(P>0.05)，两组患者术后临床效果均满意；B组腰4/5间隙前缘及后缘术后末次随访高度小于A组[(12.13±1.65) mm比(13.72±2.38) mm，t＝2.889，P<0.05；(7.03±1.19) mm比(8.03±1.69) mm，t＝2.556，P<0.05]；B组LL值末次随访小于A组[(41.50±4.72)°比(44.66±6.54)°，t＝2.049，P<0.05]。B组SS值术前、术后3年随访及术后末次随访均大于A组[(35.02±4.42)°比(31.59±5.38)°，t＝2.595，P<0.05；(34.92±4.59)°比(0.43±5.11)°，t＝3.501，P<0.05；(29.91±4.20)°比(32.37±4.59)°，t＝2.108，P<0.05]。结论两种术式治疗单节段腰4/5 LDH都能取得良好的长期临床效果，非融合术的手术时间较短，术中出血量较少；融合术能较好的维持责任节段椎间隙前缘高度；非融合术能更好的维持临近节段腰3/4后缘、腰5/骶1前缘椎间隙高度及SS值。