简介:摘要目的探讨HOXA-AS2对动脉粥样硬化(AS)模型细胞生物学功能以及炎症因子的影响及分子机制。方法本实验共分为4个实验;实验1:用100 μg/mL的ox-LDL处理EA.hy926细胞作为ox-LDL组,正常培养的细胞作为对照组;实验2:将pcDNA3.1、pcDNA3.1-HOXA-AS2转染至EA.hy926细胞中再用100 μg/mL的ox-LDL处理,记为ox-LDL+pcDNA3.1组、ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2组;实验3:将pcDNA3.1、pcDNA3.1-HOXA-AS2、si-NC、si-HOXA-AS2分别转染至EA.hy926细胞中,记为pcDNA3.1组、pcDNA3.1-HOXA-AS2组、si-NC组、si-HOXA-AS2组;实验4:将pcDNA3.1-HOXA-AS2与miR-NC、miR-17分别共转染至EA.hy926细胞中再用100 μg/mL的ox-LDL处理,记为ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-NC组、ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-17组。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测HOXA-AS2和miR-17的表达水平;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A (P21)、cleaved caspase 3蛋白表达;MTT检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测白细胞介素-1 (IL-1)、白细胞介素-6 (IL-6)水平;荧光素酶报告实验检测HOXA-AS2和miR-17的靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果与对照组比较,ox-LDL组EA.hy926细胞中HOXA-AS2表达水平(0.23±0.02比1.02±0.10),细胞增殖率[(47.83±5.01)﹪比(100.06±10.20)﹪]均降低,细胞凋亡率[(26.81±2.47)﹪比(8.23±0.80)﹪]、P21 (0.82±0.08比0.20±0.02)、cleaved caspase 3 (0.67±0.06比0.14±0.01)、IL-1[(792.34±59.37)ng/L比(326.14±34.59) ng/ L]和IL-6表达水平[(53.67±4.65)ng/L比(19.25±2.11)ng/L]均升高,差异具有统计学意义(P均< 0.05)。与ox-LDL+pcDNA3.1组比较,ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2组EA.hy926细胞中HOXA-AS2表达水平(0.87±0.09比0.22±0.02)、细胞增殖率[(89.94±8.34)﹪比(48.21±4.86)﹪]均升高,细胞凋亡率[(12.33±1.18)﹪比(26.83±2.48)﹪]、P21 (0.33±0.03比0.81±0.08)、cleaved caspase 3 (0.24±0.02比0.69±0.06)、IL-1[ (446.25±46.84)ng/L比(802.21±60.18)ng/L]和IL-6表达水平[(25.64±2.65)ng/L比(55.21±5.10)ng/L]均降低,差异具有统计学意义(P均< 0.001)。与ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-NC组比较,ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-17组EA.hy926细胞中miR-17表达水平(2.14±0.21比1.05±0.10)、细胞凋亡率[(23.31±2.33)﹪比(13.75±1.44)﹪]、IL-1水平[(684.26±62.38)ng/L比(451.21±43.58)ng/L]、IL-6水平[(41.29±4.37)ng/L比(26.11±2.39)ng/L]均升高,细胞增殖率[(53.67±5.46)﹪比(90.21±9.16)﹪]降低,差异具有统计学意义(P均< 0.001)。HOXA-AS2与miR-17存在结合位点,荧光素酶报告实验显示,与miR-NC组比较,miR-17组中转染WT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性降低(0.33±0.03比1.01±0.10,P < 0.05),而转染MUT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性差异无统计学意义(P > 0.05);与anti-miR-NC组比较,anti-miR-17组中转染WT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性升高(2.29±0.21比1.00±0.10,P < 0.05),而转染MUT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性差异无统计学意义(P > 0.05)。结论过表达HOXA-AS2促进细胞增殖,抑制ox-LDL引起的细胞凋亡和炎症因子的释放,其机制可能与miR-17有关。
简介:摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) GSTM3TV2对肝癌细胞增殖、侵袭和转移的影响,并探讨其与微小RNA(miR)-597的相互作用。方法选取郑州大学附属南阳市中心医院、南阳市宛城区第一人民医院和郑州大学第一附属医院2016年5月到2018年5月收集的126例肝癌和癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析癌旁和肝癌组织中GSTM3TV2和miR-597表达水平;在肝癌细胞系HepG2建立lncRNA对照组和GSTM3TV2 KD组细胞系,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell和体内异体移植瘤实验检测GSTM3TV2的体内外功能;采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析GSTM3TV2与miR-597的关系;将miRNA抑制剂转染HepG2细胞,分析其作用机制。计量数据比较采用t检验。结果肝癌组织中GSTM3TV2表达水平(2.96±0.34)明显高于癌旁组织(2.96±0.34),差异有统计学意义(t=4.819,P<0.05)。lncRNA对照组细胞48 h吸光度(A)值(2.17±0.22)明显高于GSTM3TV2 KD组(1.09±0.20),差异有统计学意义(t=3.429,P<0.05)。lncRNA对照组细胞侵袭数量[(154.82±13.83)个]明显高于GSTM3TV2 KD组[(87.29±10.43)个],差异有统计学意义(t=5.018,P<0.05)。lncRNA对照组细胞体内成瘤体积[(1 048.45±251.30) mm3]明显大于GSTM3TV2 KD组[(759.49±142.09) mm3],差异有统计学意义(t=4.719,P<0.05)。lncRNA对照组细胞体内肿瘤重量[(1.09±0.21) g]明显高于GSTM3TV2 KD组[(0.61±0.15) g],差异有统计学意义(t=3.185,P<0.05)。lncRNA对照组细胞淋巴结转移数量[(15.29±3.39)个]明显多于GSTM3TV2 KD组[(8.22±2.09)个],差异有统计学意义(t=3.103,P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶活性结果显示miR-597是GSTM3TV2的靶基因。lncRNA对照组细胞miR-597表达水平(1.09±0.21)明显低于GSTM3TV2 KD组(2.80±0.26),差异有统计学意义(t=3.529,P<0.05)。结论lncRNA GSTM3TV2通过调节miR-597促进肝癌细胞增殖、侵袭和转移等恶性细胞生物学行为。
简介:【摘要】目的:探讨在产后盆底康复中采用电刺激生物反馈和盆底康复训练的效果。方法:抽取 2018年 3月 ~2019年 3月在我院进行分娩的 68例产妇为研究对象,对所有产妇随机分为观察组和对照组各 34例,对照组单用产后盆底康复训练,观察组在对照组基础上加用电刺激生物反馈,对比两组盆底肌力情况及生活质量。结果:治疗后,观察组 I级患者 1例, II级患者 6例, III级患者 5例, IV级患者 9例, V级患者 13例;显著优于对照组,差异存在统计学意义, P<0.05。观察组心理功能、躯体功能、社会功能评分分别为( 73.5±4.5)分,( 62.8±7.5)分,( 71.4±7.7)分;显著高于对照组,差异显著, P<0.05。结论:电刺激生物反馈治疗与盆底康复训练能够促进盆底功能恢复,值得临床应用。