简介：摘要：疫情时期，学前教育的教学质量受在线学习资源的利用效果影响。结合目前学前教育在线资源的应用情况发现，新冠疫情时期学前教育能够通过互联网渠道获取大量的学习资源，但在实际教学期间仍然存在学习资源内容供给不足、交互性较弱、规范性偏低等问题。本文的分析正是基于这一视角，通过对疫情时期学前教育在线学习资源重要性进行分析后，结合在线学习资源应用情况，阐述学习资源应用的发展问题及启示。

简介：摘要瘢痕疙瘩是皮肤创伤病理性愈合的结果，具有侵袭性且复发率高。由于瘢痕疙瘩形成的病理机制尚未阐明，缺乏特异的诊断标志物及安全、精准和有效的分子治疗靶点，本文从疾病预测和临床诊断两个方面总结瘢痕疙瘩的诊断及预测标志物，重点阐述参与瘢痕疙瘩纤维化和炎症调控相关的信号通路，对通路中潜在的治疗靶点及其药物进行综述，并提出新的研究策略和方向。

简介：摘要目的探讨TCOF1 mRNA表达下降对人胚胎干细胞系H9来源神经嵴细胞(H9-NCC)凋亡的影响，并阐明对TCOF1表达发挥转录后调控作用的微RNA(miRNA)以及致畸因子视黄酸(RA)调控TCOF1表达的作用和机制。方法将人胚胎干细胞系H9诱导为H9-NCC，通过免疫荧光染色、流式细胞分析检测神经嵴细胞(NCCs)表面标志物P75、HNK-1、AP2，通过实时定量PCR(RT-qPCR)检测NCCs标志物基因SOX9、ZIC1、AP2、P75、PAX3和SOX10表达情况。采用针对TCOF1基因的慢病毒RNA干扰载体(sh-TCOF1)在H9-NCC中敲减TCOF1，并设阴性对照组(sh-Scramble), 观察细胞凋亡状况。通过生物信息学分析，预测可能与TCOF1 mRNA结合的miRNA为miR-654-5p，利用该miRNA的模拟物，并设阴性对照，采用RT-qPCR方法观察对TCOF1 mRNA水平的影响。用0.1 μmol/L终浓度的RA处理H9-NCC，观察对TCOF1 mRNA表达的影响。预测TCOF1上游转录因子(HOXA3)并通过RNA干扰技术敲减该转录因子，采用RT-qPCR方法检测TCOF1 mRNA表达水平，探讨RA调控TCOF1 mRNA表达的机制。结果(1)H9-NCC细胞系诱导成功，免疫荧光染色、流式细胞分析及RT-qPCR检测显示诱导产生的H9-NCC表达NCCs特异性标志物。(2)与阴性对照组相比，sh-TCOF1可以敲减H9-NCC中TCOF1的表达水平(P<0.001)，敲减TCOF1后可增加细胞晚期凋亡水平(P＝0.029)，上调caspase3表达(P<0.001)。(3)与阴性对照组相比，miR-654-5p模拟物可降低H9-NCC中TCOF1 mRNA水平(P＝0.019)。(4)与阴性对照组相比，RA处理H9-NCC后TCOF1 mRNA表达上调(P＝0.041)；敲减HOXA3可抑制RA对H9-NCC中TCOF1 mRNA的上调能力(P＝0.008)。结论TCOF1表达降低诱导H9-NCC凋亡；miR-654-5p通过转录后调控下调TCOF1 mRNA表达；RA通过HOXA3促进TCOF1表达。

简介：摘要目的观察肝细胞生长因子(HGF)对人毛囊生长的影响，并探讨其促进毛发生长的作用机制。方法毛囊来源于中国医学科学院整形外科医院4例除皱术后患者废弃的正常头皮组织，分离单根毛囊进行体外器官培养。以常规培养为对照组，培养液中添加浓度为10 ng/ml的HGF作为实验组，显微镜下测量不同培养天数毛囊的生长长度；通过观察培养毛囊毛球部毛基质与毛乳头的形态，评价HGF对毛囊生长周期的影响。分离培养人毛囊上皮细胞，应用流式细胞术对其表面标志进行鉴定；以常规培养的毛囊上皮细胞为对照组，以培养基添加10 ng/ml的HGF处理48 h后的毛囊上皮细胞为实验组，收集细胞提取RNA，转录组测序分析HGF对毛囊上皮细胞基因表达的影响，应用real-time PCR对测序分析结果进行验证。各项定量数据以均值±标准差表示，2组间比较应用独立样本t检验，P<0.05为差异具有统计学意义。结果随着体外培养时间的延长，毛囊生长趋于停止；毛囊体外培养7、10、14 d时，对照组毛囊生长长度(单位0.1 mm)分别为12.210±4.191、13.710±3.518、14.000±4.057，实验组HGF促进毛发生长，生长长度分别为16.700±5.143、18.800±4.917、23.000±7.196，差异具有统计学意义(t＝2.353，P<0.05；t＝2.962，P<0.01；t＝3.910，P<0.01)；分离培养的毛囊上皮细胞呈典型的铺路石样形态，表达上皮细胞表面标志分子CD49f；转录组测序结果显示，毛囊上皮细胞高表达上皮细胞标志基因KRT14、KRT5、KRT6A、CDH1、SOX9、CD49f，FPKM值分别为6 012±2 141、4 072±1 369、3 896±1 991、95.06±21.48、101.30±38.52、162.00±47.83；不表达或极低表达间质细胞标志基因THY1、DPP4、CDH2 (N-cadherin)、ACTA2、PDGFRA、COL1A1、COL3A1，FPKM值分别为0.740±0.825、0.632±0.765、0.000±0.034、1.674±1.235、0.000±0.014、2.526±3.531、0.000±0.015；与对照组相比，实验组经HGF处理后毛囊上皮细胞中改变的基因显著富集于细胞周期及细胞分裂相关生物学过程，相关基因的表达下调；Real-Time PCR验证显示CENPA、CDC20、UBE2C、CDK1、AURKB、NDC80分别降为对照组的0.689±0.053 (t＝10.170, P<0.001)、0.676±0.121 (t＝4.652, P<0.01)、0.761±0.148 (t＝2.785, P<0.05)、0.599±0.153 (t＝4.530, P<0.05)、0.706±0.113 (t＝4.507, P<0.05)、0.579±0.092 (t＝7.931, P<0.01)倍，差异具有统计学意义。结论HGF促进毛囊体外器官培养的生长并延长其生长时间；但在细胞水平上抑制毛囊上皮细胞增殖相关基因表达。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA (lncRNA)-抗分化非编码RNA(DANCR)对人脂肪来源间充质干细胞(hASCs)成脂、成骨分化能力的影响。方法收集中国医学科学院整形外科医院的3例女性患者腹部脂肪抽吸术后废弃的脂肪组织(年龄25～35岁)，分离培养hASCs。构建DANCR敲减与过表达质粒，利用慢病毒感染的方式在hASCs中敲减或过表达DANCR，将实验分为5组：敲减DANCR的实验组(shDANCR1、shDANCR2)、敲减对照组(shScrmble)、过表达DANCR的实验组(pCDH-DANCR)、过表达对照组(pCDH-GFP)，每组样本量为3例。RT-PCR检测上述5组细胞中DANCR的表达量。将上述5组慢病毒感染成功后的hASCs进行成脂或成骨诱导，成脂诱导7 d进行油红O染色鉴定成脂效果，成骨诱导14 d进行茜素红染色鉴定成骨效果，并应用RT-PCR检测成脂分化关键转录因子PPAR-γ、C/EBPα、FABP4、Adiponectin和脂类合成酶基因LPL、GPDH、FASN、ACC1和HSL，以及成骨分化关键转录因子RUNX2、OCN、OPN、BMP2及ALP的表达。实验数据均采用均值±标准差表示，2组间数据采用t检验(Student’s t-test)进行比较，P < 0.05为差异具有统计学意义。结果设计的2条shRNA敲减序列均可使hASCs中DANCR的表达显著减少，与对照组比较，DANCR表达量分别下降了86%和74%，差异具有统计学意义( t＝84.07、P <0.001，t＝75.52、P <0.001)。构建的DANCR过表达质粒可以有效增加hASCs中DANCR表达量，与对照组相比，增加了(15.067±1.986)倍，差异具有统计学意义(t＝12.24, P<0.001 )。成脂、成骨诱导实验显示，敲减DANCR会引起hASCs成脂诱导后脂滴数量显著多于对照组，2组敲减组与对照组相比，差异均具有统计学意义(t＝17.24、P <0.001，t＝ 30.68、P <0.001)，成脂分化关键转录因子PPAR-γ、C/EBPα、FABP4、Adiponectin以及脂类合成酶的关键基因LPL、GPDH、FASN、ACC1、HSL的表达都显著高于对照组；而过表达DANCR后会抑制脂滴的形成及上述基因的表达。同样在成骨诱导中，敲减DANCR后hASCs成骨诱导14 d钙结节形成量显著多于对照组，差异具有统计学意义(t＝15.25、P <0.001，t＝24.61，P <0.001)，成骨分化关键基因RUNX2、OCN、OPN、BMP2及ALP的表达也显著高于对照组，而过表达DANCR后成骨诱导14 d钙结节形成量较对照组显著减少(t＝40.81、P<0.001)，成骨分化关键转录因子表达水平也会降低。结论lncRNA-DANCR能够抑制hASCs的成脂、成骨分化，DANCR表达量的变化影响hASCs的成脂、成骨分化效果，可以作为调控hASCs成脂、成骨定向分化的潜在靶点。

简介：摘要目的明确多聚嘧啶序列结合蛋白(polypyrimidine tract binding protein, PTB)在正常人和骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)成骨分化中的作用及其机制。方法收集中国医学科学院整形外科医院收治的4例齿槽嵴裂患儿术后废弃骨髓血，原代分离培养人BMSCs并诱导分化为成骨细胞，RT-PCR和蛋白质印迹法检测PTB在诱导分化7 d和14 d的表达水平；应用shRNA技术对人BMSCs中PTB的表达进行敲减，茜素红染色和荧光定量PCR评价其对成骨分化的影响；体外分别应用浓度为10 ng/ml和40 ng/ml的肿瘤坏死因子α(TNF-α) 处理人BMSCs，荧光定量PCR和茜素红染色检测其对PTB表达及成骨分化能力的影响；流式细胞术检测人BMSCs经PTB敲减后细胞内活性氧(ROS)含量。10只6个月龄雌性SD大鼠采用随机数字表法随机分为卵巢切除骨质疏松模型组和假手术组，每组5只，荧光定量PCR检测其BMSCs中PTB的表达变化。各项定量数据以均值±标准差表示，2组间比较应用t检验，P<0.05为差异具有统计学意义。结果BMSCs成骨诱导分化7 d和14 d PTB表达显著升高，敲减PTB并成骨诱导14 d后，成骨标志基因RUNX2和ALP相对表达量显著下降，分别为对照组的0.74±0.15和0.29±0.18倍(t＝3.490、P＝0.039，t＝7.983、P＝0.004)，且茜素红染色阳性的矿化结节形成减少。10 ng/ml TNF-α(t＝3.528, P＝0.039)和40 ng/ml TNF-α(t＝4.306, P＝0.023)均下调BMSCs中PTB表达，并抑制成骨分化。敲减PTB后BMSCs细胞内ROS含量(720.7±129.7)较对照组(1 204.0±300.1) 下降，差异具有统计学意义(t＝4.872, P＝0.040)。相比于假手术组(0.001 66±0.000 18)，卵巢切除骨质疏松模型大鼠BMSCs中PTB的相对表达量(0.001 25±0.000 12)显著降低(t＝3.217, P＝0.032)。结论PTB的表达可促进BMSCs成骨分化，PTB敲减介导的ROS含量下调是其调控BMSCs成骨分化的一个重要机制。