简介：目的：从海参体壁组织中分离提取蛋白酶体,研究其酶学性质。方法：新鲜海参组织经匀浆、Tris-HCl缓冲液浸提后得到粗提物,再经（NH4）2SO4盐析、二乙氨乙基葡聚糖纤维素和丙烯葡聚糖凝胶S-300分离纯化后得到海参蛋白酶体。经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,其分子质量200ku。结果：海参蛋白酶体特异性最强的检测底物Boc-GAA-MCA,最适pH8.0,最适反应温度45℃。40℃时蛋白酶体活性稳定,在1h的孵育过程中呈现一定的热激活效应。在50~60℃,酶活力随孵育时间的延长迅速下降。K＋、Ca2＋、Mg2＋、Zn2＋均可明显抑制其活性。抗痛素、N-甲苯磺酰-L-赖氨酸氯甲基化酮、N-甲苯磺基-L-苯乙胺酰氯甲基酮及E-64均可显著抑制该蛋白酶体活性。结论：海参体壁蛋白酶体具有典型的蛋白酶体的复合型活性,其中胰蛋白酶样活性较强,之后是糜蛋白酶样活性,而肽基谷氨酰肽水解酶样活性最弱。

简介：氨基甲酸乙酯是发酵食品天然产生的1种2A级致癌物。建立以氨基甲酸乙酯脱氨酶为基础的生物清除方法,在食品安全方面具有重要意义。利用单因素比较方法,通过测定比酶活,对氨基甲酸乙酯脱氨酶的发酵条件和酶学性质进行研究。结果表明,氨基甲酸乙酯的最适发酵条件是：以15.0g/L麦芽糖为碳源,5.0g/LNH4Cl＋5.0g/L酵母膏为氮源,7.5g/L氨基甲酸乙酯,培养温度28℃,起始pH5.5。培养菌株枯草芽孢杆菌ZJ0930h后,氨基甲酸乙酯脱氨酶的比酶活达到最大值18.86U/mL。经盐析、离子交换和膜浓缩后,氨基甲酸乙酯脱氨酶的纯化倍数达到174,冷冻干燥的酶粉比活力为32186U/g。氨基甲酸乙酯脱氨酶的最适催化温度45℃,最适反应pH4.0。该酶具有一定的热稳定性,在酸性环境的催化活力和稳定性较好,适当浓度的Zn2＋和Mg2＋对酶活有显著促进作用。菌株ZJ09所产氨基甲酸乙酯脱氨酶具有良好的催化能力,易于发酵制备,是一种值得深入研究和开发的食品用酶,具有广泛的产业化应用前景。

简介：目的：探讨虫拟蜡菌固态培养产胞外漆酶及其对竹木质素的降解能力,比较蔗渣、玉米芯、木聚糖和葡萄糖4种碳源对虫拟蜡菌降解竹木质素的影响。方法与结果：培养温度28℃,基质含水率50%,铜离子浓度0.5mmol/L,接种量8%,培养9d,漆酶产量达到28.66U/g干曲,相应的木质素降解率为26.34%;不同的碳源影响木质素降解率和纤维素降解率,以4%的蔗渣为碳源添加到竹粉中,木质素选择性系数为18.1。结论：经固态发酵的竹粉,其木质素结构与原始状态相比明显地被破坏。

简介：目的：建立测定乌龙茶水浸提物中儿茶素的高效液相色谱（HPLC）方法，研究单宁酶对儿茶素成分的影响。方法：通过优化液相色谱的流动相组成。改善儿茶素的分离效果。缩短分析时间。利用液一质联用及全波长扫描鉴定鸟龙茶水浸提物中的儿茶素．用回收率及相对标准偏差评价方法的适用性。以儿茶素成分的变化为指标，分析单宁酶对乌龙茶水浸提物的影响。结果：选用symmetryC18（3．0mm×250mm，5μm）色谱柱，在流速0．5mL／min，柱温30℃，检测波长278nm，进样体积20μL的条件下，优化得到的流动相为0．5％乙酸（A）和甲醇（B），梯度洗脱条件办0min：88％A；5min：88％A；16min：81％A；28rain：76％A；32min：70％A；40min：88％A；45min：88％A；样品分析时间为45min。乌龙茶水浸提物中含有表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、表没食子儿茶素（EGC）、没食子酰儿茶素（EC）、没食子儿茶素没食子酸酯（GCG）、没食子儿茶素（GC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）等儿茶素以及没食子酸（GA）和咖啡因。用该方法检测乌龙茶中儿茶素组分，以上各种儿茶素的最低检出限在0．006～0．197μg／mL之间，定量检出限在0．019—0．656μg／mL之间．RSD在0．17％。1．57％之间．回收率96％～103％。经单宁酶作用后，乌龙茶水浸提物中酯型儿茶素（EGCG、GCG、ECG）被完全水解．同时GA和非酯型儿茶素（EGC、GC、EC）含量分别增加了2059．7％、66．4％、39．1％、54．3％。结论：本试验所建立的HPLC方法能高效分离鸟龙茶水浸提物中的儿茶素，具有灵敏度高，精密度和准确性好的优点。单宁酶可高效水解乌龙茶水浸提物中酯型儿茶素。