简介:摘要目的探讨低氧对人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)及其细胞外囊泡(EVs)生成的影响,初步阐述其调控机制。方法分离培养原代hUCMSCs,将其分为常氧组和低氧组,分别在常氧(21%O2)和低氧(5%O2)培养箱中培养,用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,提取hUCMSCs生成的EVs,利用透射电子显微镜(TEM)和纳米颗粒示踪分析(NTA)进行鉴定,蛋白质印迹法(Western blot)检测EVs膜标志蛋白CD9和CD63表达,转录组高通量测序分析低氧对hUCMSCs表达谱的影响,Western blot分析细胞内缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)和磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(p-Akt)、以及磷酸化40×103大小的富含脯氨酸的Akt底物(p-PRAS40)的表达水平。两组间采用t检验进行统计分析。结果低氧处理hUCMSCs 24 h后,CCK-8结果显示低氧组吸光度值(2.151±0.116)高于常氧组(1.929±0.145),差异有统计学意义(t=2.659,P<0.05);NTA检测结果显示低氧组EVs颗粒浓度[(13.714±1.704)×109/ml]高于常氧组[(1.271±0.573)×109/ml],差异有统计学意义(t=18.310,P<0.05);低氧组EVs蛋白浓度(2.743±1.013)高于常氧组(0.403±0.303),差异有统计学意义(t=3.831,P<0.05);Western blot结果显示低氧组EVs的CD9、CD63表达水平(4.092±1.711、1 162.225±573.901)高于常氧组(1±0,t=3.005、3.505,P<0.05)。转录组高通量测序分析显示有1 429个基因存在显著表达差异,且主要富集于细胞因子相关通路。Western blot结果显示低氧组HIF-1α、Akt、p-Akt、p-Akt/Akt,以及p-PRAS40的表达水平(2.593±0.556、1.395±0.044、2.586±0.130、1.953±0.104、2.131±0.572)均高于常氧组(1±0),差异有统计学意义(t=3.098、4.246、4.059、3.149、2.799,P<0.05)。结论低氧可通过激活HIF-1α和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt信号通路促进hUCMSCs增殖和EVs生成。
简介:背景:脂肪间充质干细胞在跟腱组织工程再生领域越来越受到重视,研究其诱导分化的有利环境(氧体积分数)尤为必要。目的:将脂肪间充质干细胞与跟腱细胞在不同氧体积分数条件下间接共培养,比较氧体积分数对脂肪间充质干细胞向跟腱细胞分化能力的影响。方法:无菌条件下获取SD大鼠跟腱细胞。SD大鼠脂肪间充质干细胞直接购买,经培养传至第1代后,与跟腱细胞一起在常氧(体积分数20%)和低氧(体积分数2%)条件下经Transwel间接共培养体系共培养。在培养7,14和21d,实时荧光定量PCR检测跟腱细胞的特异指标胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ,Tenomodulin,Thrombospondin-4,Scleraxis基因相对表达量,免疫荧光染色法检测胶原蛋白Ⅰ和Thrombospondin-4蛋白表达量。结果与结论:脂肪间充质干细胞与跟腱细胞经间接共培养后,低氧组检测到的跟腱细胞的相关特异指标在基因和蛋白水平上表达水平均高于常氧组。提示氧体积分数可显著影响脂肪间充质干细胞向跟腱细胞分化的潜能,低氧是脂肪间充质干细胞向跟腱细胞分化的有利条件之一。
简介:摘要:乙炔气的生产方式中,电石与定量的雾化水充分接触发生反,当发生器检修完转入备用状态时,需要对乙炔发生器内充入一定压力的氮气。本设计涉及乙炔发生器技术领域,尤其涉及一种乙炔发生器充氮及立轴密封装置。
简介:摘要目的探讨不同流速快充式经鼻湿化高流量通气(transnasal humidified rapid-insufflation ventilatory exchange,Thrive)对无痛胃镜检查患者缺氧不良事件的影响。方法选择2020年4—7月在南京市第一医院行无痛胃镜检查的患者作为研究对象,采用随机数字表法将患者随机分配至Thrive流速30 L/min组(n=52)、50 L/min组(n=55)和70 L/min组(n=54)3组。主要观察3组患者胃镜检查过程中不同程度缺氧事件,包括亚临床呼吸抑制、缺氧和严重缺氧的发生率及其他不良事件发生率。结果70 L/min组患者的缺氧不良事件总发生率为0(0/54),明显低于30 L/min组(21.3%,11/52)和50 L/min组(12.7%,7/55)(χ2=12.75,P<0.001;P=0.007)。30 L/min组和50 L/min组亚临床呼吸抑制[13.5%(7/52)比5.5%(3/55),χ2=1.19,P=0.194]和缺氧[7.7%(4/52)比7.3%(4/55),P=0.610]的发生率差异无统计学意义。3组患者均未发生严重缺氧。30 L/min组和50 L/min组出现低氧血症的患者通过托下颌开放气道后,氧合均得到改善(SpO2>95%)。此外3组患者除低氧血症外的其他不良事件发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论30 L/min、50 L/min、70 L/min流速的Thrive可预防患者无痛胃镜检查时严重缺氧事件的发生,并且70 L/min的流速可进一步降低患者亚临床呼吸抑制发生率。