简介:摘要目的分析高糖诱导的BV2小胶质细胞基因表达水平和信号通路改变,初步探讨转胶蛋白-2 (TAGLN2)调控细胞炎症反应和代谢进程的机制。方法基础研究。BV2细胞分为甘露醇(Man)组、葡萄糖(Glu)组、过表达对照(Con)Glu组、过表达TAGLN2 Glu组、沉默Con Glu (shCon Glu)组、沉默TAGLN2 Glu (shTAGLN2 Glu)组。Man组细胞置于含25 mmol/L Man、25 mmol/L Glu的改良Eagle培养基(DMEM培养基)中培养;Glu组、Con Glu组、TAGLN2 Glu组、shCon Glu组、shTAGLN2 Glu组细胞置于含50 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基中培养。培养24 h后,采用高通量测序技术对各组细胞进行转录组测序,筛选显著差异表达基因(DEG)。DEG筛选标准为|log2(差异表达倍数)|≥1且P≤0.05。对筛选得到的DEG进行基因注释(GO)功能富集分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)的信号通路富集分析和蛋白-蛋白互作网络分析。采用实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测DEG mRNA相对表达量。组间数据比较采用独立样本t检验。结果与Man组比较,Glu组共筛选出517个DEG,其中上调、下调基因分别为277、240个。KEGG通路分析结果显示,上调的DEG显著富集在核因子(NF)-κB和Jak-信号转导和转录激活因子(STAT)信号通路等免疫系统进程;下调的DEG显著富集在糖胺多聚糖的降解和甘油酯等代谢进程。与Con Glu组比较,TAGLN2 Glu组共筛选出480个DEG,其中上调、下调基因分别为147、333个。上调的DEG显著富集在脂肪酸、甘油脂和丙酮酸等代谢进程;下调的DEG显著富集在NF-κB、Jak-STAT和肿瘤坏死因子(TNF)信号通路等免疫系统进程。与shCon Glu组比较,shTAGLN2 Glu组共筛选出582个DEG,其中上调、下调基因分别为423、159个。上调的DEG显著富集在TNF、趋化因子信号通路等免疫系统进程;下调的DEG基因主要富集在模式识别受体信号通路。RT-PCR检测结果显示,与Con Glu组比较,TAGLN2 Glu组细胞中Card11 (t= 13.530)、Icos (t=3.482)、Chst3 (t=6.949)、Kynu (t=5.399 )、白细胞介素(IL)-1β (t=2.960)、TNF-α(t=5.800)、IL-6 (t=3.130)、干扰素-γ (t=7.690)、IL-17 (t=6.530)mRNA相对表达量显著下降,差异有统计学意义(P<0.05 )。结论TAGLN2可能通过NF-κB和Jak-STAT信号通路抑制高糖诱导的小胶质细胞炎症反应;Card11、Icos、Chst3、Kynu在TAGLN2抗炎过程中可能发挥了重要作用。
简介:摘要目的探究转胶蛋白(transgelin, TAGLN)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)发生发展中的作用及其可能的信号通路。方法收集100例PTC组织及对应100例癌旁正常甲状腺组织,分别采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术、Western印迹法和免疫组化分析PTC组织和癌旁正常甲状腺组织中TAGLN的表达水平。分别使用质粒和shRNA慢病毒载体过表达和敲减PTC细胞中的TAGLN,通过细胞增殖实验(cell counting kit-8, CCK-8)、细胞侵袭和迁移实验(Transwell)检测TAGLN对PTC细胞增殖、侵袭和迁移的影响。应用Western印迹法检测TAGLN对丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)/细胞外信号调节激酶(extracellular-signal regulating kinase, ERK)信号通路的影响。结果RT-qPCR结果显示,PTC组织中的TAGLN mRNA表达与癌旁正常甲状腺组织无差异(P>0.05);Western印迹结果显示,TAGLN蛋白在PTC组织中表达水平明显低于癌旁正常甲状腺组织(P<0.01);免疫组化结果显示,在PTC组织中TAGLN的表达水平明显低于癌旁正常甲状腺组织。上调TAGLN的表达抑制PTC细胞的增殖、侵袭和迁移(P<0.01),而下调TAGLN的表达促进PTC细胞的增殖、侵袭和迁移(P<0.01)。在PTC细胞中,过表达TAGLN可降低磷酸化ERK的表达(P<0.05),而沉默TAGLN可增加磷酸化ERK的表达(P<0.01)。结论TAGLN在PTC中表达显著降低且与PTC的发生发展相关,其作用机制可能与MAPK/ERK信号通路有关。
简介:摘要目的食管和胃壁局部涂抹蛋白生物胶和吻合口外局部减压的手工吻合方式与常规手工吻合方式在食管胃颈部手工吻合中的比较。方法同期进行食管癌手术颈部吻合230例,随机分为两组。入组病人均行食管胃部分切除食管胃颈部手工吻合术。病变位于食管胸中段100例,食管胸上段130例,研究组采用常规食管胃颈部全层吻合方式,左胸左颈部手术60例,右胸上腹部右颈部手术40例。吻合食管后壁和前壁时都涂抹生物蛋白胶,颈部手术区域行负压吸引。对照组采用常规手术吻合方式。通过观察两组病人术后发生颈部吻合口瘘的发生、发生后愈合时间、周围组织炎症程度、局部引流量、术后发生胸腔感染导致呼吸衰竭、以及术后吻合口狭窄的情况。结果研究组吻合口瘘发生率明显下降,发生吻合口瘘后经处理愈合时间缩短,周围组织炎症反应轻,未发生颈部吻合口瘘引起纵膈和胸腔感染的情况,术后吻合口狭窄未见明显增加。结论食管和胃壁局部涂抹生物蛋白胶和以及吻合口外局部减压在食管癌颈部手工吻合时能明显减少吻合口的发生。
简介:摘要目的探讨采用分离胶真空采血管直接进行冷冻对血样是否有影响.方法运用TRINDER法对分离胶真空采血管保存的血样进行冷冻前后游离血红蛋白的测定,并对检测结果进行比较和评价.结果冷冻2周后的分离胶保持完整,血浆游离血红蛋白的测定结果无统计学差异.结论分离胶真空采血管直接对血样进行冷冻保存,能减少工作量降低成本,冷冻两年后性状如何以及是否对核酸检测有影响,尚需验证.分离胶真空采血管使用前应作对比试验,以保证检验结果的可靠性和准确性.关键词分离胶真空采血管;游离血红蛋白;冷冻AbstractObjectiveToobservetheinfluenceonfreehemoglobin(Hb)detectionviaVacuumgeltubebeforeandafterfrozen.MethodsThirty-eightblooddonorssamplewereenrolledinthestudy.ThelevelsofplasmafreeHbweremeasuredbeforeandaftersamplefrozenrespectively.ResultsseparategelcontainsintactafterfrozenThelevelsofplasmafreeHbshownosignificancebeforandafterfrozen.Conclusionseparatevacuumgeltubecanbeappliedforbloodsamplepreservationdirectly,andcandecreasethecostworkload.Butwedonotknowtheeffectaftertwoyearsfrozen.ParalleledtestmustbedonebeforeusingseparatevacuumKegyelwtourdbsetoensureresultsaccuracyandlibability.separatevacuumgeltube;freehemoglobin;frozen中图分类号R446??9文献标识码A文章编号1008-6315(2015)12-1492-02
简介:目的观察转人乳铁蛋白(hLF)基因大米是否具有慢性毒性作用。方法初断乳的180只SD大鼠按性别、体重随机分为3组:转基因hLF基因大米组、亲本大米对照组和AIN-93对照组,分别饲喂相应饲料12个月。观察大鼠的体重、进食量、血常规、血生化情况,实验末期处死动物,称量脏器重量并对脏器进行病理学检查。结果转hLF基因大米组血常规(LYM%、GRN%)、血生化(ALT、AST、GLU)在个别时间点上与亲本对照组或AIN-93对照组存在显著差异(P〈0.05);其他观察指标与两个对照组均无显著差异。结论现有实验结果不能证实转hLF基因大米对大鼠有慢性毒性作用。