简介：目的探讨姜黄素诱导雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞凋亡过程中caspase途径的作用。方法应用CCK8法检测不同浓度（10、20、30、40、50、60μmol/L）姜黄素作用LNCaP细胞12、24、48h后的细胞生长抑制情况。应用AnnexinV/PI双染法检测不同浓度（10、20、40μmol/L）姜黄素作用LNCaP细胞24h后的细胞凋亡情况。应用Westernblot检测姜黄素作用LNCaP细胞24h后Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3、CytochromeC凋亡相关蛋白的变化。结果姜黄素对LNCaP细胞的生长有明显的抑制作用,且呈时间-剂量依赖性;流式细胞术结果显示姜黄素能诱导LNCaP细胞凋亡,10、20、40μmol/L姜黄素作用LNCaP细胞24、48h后细胞凋亡率分别为（6.01±0.95）%、（15.46±1.13）%、（26.13±1.56）%和（11.19±1.74）%、（25.80±2.47）%、（38.72±2.89）%,且呈时间-剂量依赖性（P〈0.05）;同时姜黄素能够降低LNCaP细胞中Bcl-2的表达,上调Bax、CytochromeC、Cleavedcaspase-3的表达。结论姜黄素能抑制LNCaP细胞的生长,其作用可能是通过线粒体途径诱导其凋亡。

简介：

简介：雄激素受体(AR)和它的coregulators在前列腺癌症的carcinogenesis有重要角色。p53是重要的瘤suppressor基因，并且基本p53回答的缺席可以预先安排到癌症。Transgelin，作为一个联系ARA54的AR禁止者知道，能在LNCaP房间压制AR功能。除了这些效果，我们试图阐明LNCaP和它的内在的机制上的蛋白质的proapoptotic效果，特别在transgelin和p53之间的相互作用。数的房间，流动cytometric分析和把试金标记的终端deoxynucleotidyltransferase-dUTP刻痕结束被使用测量transgelin的proapoptotic效果。用与transgelinp53染色的p53和两倍immunofluorescence的西方的弄污，我们在增加p53的细胞质的translocation和p53表示的upregulation显示出transgelin结果的那transfection。我们也在vivo发现了在transgelin和p53之间的一个相互作用由哺乳动物二混血儿并且coimmunoprecipitation试金。联系线粒体的apoptosis小径的激活与transgelin在transfection以后在LNCaP房间被观察。这些结果除了它AR小径上的已知的镇压效果的LNCaP房间上的transgelin的调停p53的联系线粒体的apoptotic效果是指示的。

简介：摘要目的探讨双氢青蒿素(DHA)通过氯离子通道抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖的作用及其机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测DHA抑制LNCaP细胞增殖，并确定其半抑制浓度(IC50值)：分别配制的浓度梯度为0.625、1.250、2.500、5.000、10.000、20.000、40.000、80.000、160.000 μmol/L DHA溶液，并按实验设计加入含有LNCaP细胞的96孔板中，在酶联免疫检测仪490 nm处测量各孔的吸光度(A)值；全细胞膜片钳：检测DHA激活LNCaP细胞氯电流以及氯通道抑制剂4，4’-二异硫氰酸基-2，2’-二苯乙烯磺酸二钠(DIDS)和5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)抑制LNCaP细胞氯离子电流。依次用0、±40 mV、±80 mV电脉冲刺激细胞，每个刺激间隔时间为200 ms，每个周期间隔为4 s。开始刺激后的10 ms收集和测量电流。通过将电流归一化到膜电容来确定电流密度。组间比较使用独立样本t检验。结果DHA能够抑制LNCaP细胞增殖，其抑制效果具有时间依赖性，DHA抑制LNCaP细胞增殖的IC50值随时间延长逐渐降低。在用DHA处理LNCaP细胞24、48、72 h后，其IC50值分别为(51.34±1.49)、(24.98±2.07)、(22.79±1.38) μmol/L[n＝3，t＝17.901(24 h比48 h)，t＝24.349(24 h比72 h)，P<0.01]。此外，DHA也能激活LNCaP细胞氯通道产生氯电流，在80 mV电压钳制下，LNCaP细胞的电流密度增加至(48.30±7.52) pA/pF，被激活的电流可被氯通道抑制剂抑制至(6.35±2.47) pA/pF(DIDS)和(9.25±2.09) pA/pF(NPPB)[n＝3，t＝9.180(DHA比DIDS)，t＝8.666(DHA比NPPB)，P<0.01]。结论DHA能够抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖，其抑制效果具有时间依赖性；DHA也能够激活LNCaP细胞氯离子通道产生氯离子电流，且激活的氯电流能够被氯通道抑制剂所抑制。

简介：目的探讨在高转移性的LNCaP—LN3（LN3）细胞中下调Bcl－2后发生凋亡的具体机制。方法LNCaP、LNCaP—Pr05（PrO5）与LN3细胞置于含5％活性炭处理的血清（CSS）或R1881与比卡鲁胺的培养基培养并测定生长曲线。测定雄激素受体（AR）与Bcl－2的表达水平。

简介：摘要目的观察荷载白细胞介素(IL)-24的溶瘤腺病毒ZD55-IL-24联合放射对激素依赖性前列腺癌LNcap细胞株增殖和凋亡的影响，并探讨其机制。方法将LNcap细胞(购自上海中国科学院细胞库)分为4组进行干预，分别为，(1)磷酸盐缓液组(PBS)；(2)放射治疗组(10 GY)；(3)病毒组[ZD55-IL-24；10感染复数(MOI)]；(4)联合组(ZD55-IL-24＋RT；5 MOI＋5GY)。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测连续96 h各组LNcap细胞增殖能力的变化。Hoechst-33258、原位缺口末端标记法(TUNEL)凋亡检测试剂盒检测处理48 h后各组LNcap细胞的凋亡。蛋白质印迹法(Western blot)实验检测处理48 h后各组内IL-24和凋亡相关蛋白的表达。多组间采用方差分析(One way-ANOVA)，组间比较采用t检验。结果(1)CCK-8显示，放疗组、ZD55-IL-24和联合组与PBS组比较，均可抑制细胞增殖。PBS组、放疗组、ZD55-IL-24和联合组在处理96 h后在450 nm处的吸光度(A)值分别为3.84±0.47(t＝20.730，P<0.01)、1.85±0.08(t＝15.600，P<0.01)、1.33±0.19(t＝6.270，P<0.01)、0.78±0.10。(2)Hoechst-33258染色结果显示，各治疗组较PBS组均存在显著细胞凋亡现象。PBS组、放疗组、ZD55-IL-24和联合组细胞凋亡率分别为(9.20±1.02)%(t＝26.430，P<0.01)、(28.88±3.65)%(t＝6.092，P<0.01)、(35.45±1.80)%(t＝4.505，P<0.01)、(41.95±2.26)%。(3)TUNEL染色结果显示，各治疗组较PBS组均存在显著的细胞凋亡现象。PBS组、放疗组、ZD55-IL-24和联合组细胞凋亡率分别为(7.95±2.07)%(t＝15.400，P<0.01)、(26.38±2.61)%(t＝5.960，P<0.01)、(32.95±3.94)%(t＝2.600，P<0.01)、(39.45±3.53)%。(4)Western blot结果显示，各治疗组内半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-8、Caspase-3的表达水平均高于PBS组，联合组内Caspase-8/Caspase-3表达增高更为明显。以PBS组表达量为参照，Caspase-8和Caspase-3在PBS组、放疗组、ZD55-IL-24和联合组内的相对表达量分别为1.00±0.07、1.00±0.08(t＝23.030、13.910，P<0.01、0.01)、1.61±0.12、1.52±0.11(t＝13.330、8.430，P<0.01、0.01)、2.13±0.15、1.93±0.04(t＝7.390、5.710，P<0.01、0.01)、2.99±0.13、2.52±0.17(与联合组比较)。结论放疗和ZD55-IL-24均可以抑制LNcap细胞增殖并促进细胞凋亡，联合治疗较单一治疗拥有更好的增殖抑制及促进凋亡效果，其机制可能与Caspase-8/Caspase-3介导的内源性凋亡相关。

简介：摘要目的观察氟他胺(FLU)对人前列腺癌细胞LNCaP细胞株线粒体呼吸链酶学变化的影响，探讨FLU引起LNCaP细胞株线粒体呼吸链酶学变化的作用机制。方法获得雄激素依赖性细胞(LNCaP)细胞株，进行细胞培养，获得稳定生长及传代的细胞株。不同浓度的雄激素受体阻滞剂FLU作用于培养的LNCaP细胞株；不同时间点提取干预措施下的LNCaP细胞株线粒体；检测并比较不同时间点、不同浓度药物作用下LNCaP细胞株线粒体呼吸链酶学的变化和差异。结果FLU作用于LNCaP细胞株后，形态学活力逐渐减弱，提取三种剂量组FLU作用于LNCaP细胞株后，在不同时间点提取线粒体，实测数据及统计线图均显示：其蛋白的含量增加显著(P<0.05)，但琥珀酸脱氢酶(SDH)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)、细胞色素C氧化酶(COX)的含量显著下降(P<0.05)，各个指标在不同的时间点上下降的程度有所差异。结论FLU可引起LNCaP细胞株线粒体内蛋白的表达量下降，抑制LNCaP的增殖。

简介：有限治疗选择为好攻击的前列腺癌症是可得到的。Gossypol被报导了在癌症的许多类型举办一项有势力anticancer活动。它能增加癌症房间的敏感到alkylating代理人，减少multidrug抵抗和减少转移。它是否能在癌症房间导致autophagy，还没是坚定的。这里，我们在vitro在人的前列腺癌症房间线PC3和LNCaP上调查了apogossypolone(ApoG2)和(?)-gossypol的antiproliferative活动。到ApoG2的PC-3和LNCaP房间的暴露导致了autophagy的几个特定的特征特征，包括在酸的小囊的细胞器的细胞质和形成的膜的液泡的外观。联系autophagy的LC3-II和beclin-1的表示在治疗以后在两根房间线增加了。有3-methyladenine的autophagy的抑制支持了两种房间类型的apoptosis。一起拿，这些数据证明autophagy的那正式就职能在人的前列腺癌症房间对apoptosis代表防卫机制。

简介：Smoothened(SMO)是表明小径的刺猬的一个重要成员。我们为RNA干扰构造了特定的recombinantlentiviral向量，指向SMO基因(NM_005631)观察它在人的雄激素敏感的前列腺癌症房间线的SMO表示，房间增长和房间周期上的效果，LNCaP，并且在雄激素无关的前列腺癌症房间线，PC3。四个siRNA序列被设计并且插入了到lentiviral向量pGCSIL-GFP构造四recombinant向量。有最高的介入效率的向量是有在293T房间包装向量(pHelper1.0和pHelper2.0)为分别地感染LNCaP和PC3房间线由liposome装配lentivirus粒子的co-transfected。SMOmRNA，肿瘤房间增长和房间周期的表示水平被量的实时聚合酶链反应(qRT-PCR)测量，3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide(MTT)试金和流动cytometry分别地。顺序结果证明recombinantlentiviral向量成功地被构造。pGCSIL-GFP-723有最高的介入效率，在co-transfection，LNCaP和PC3房间与排队以后的命名Lv-SIL-SMO723被感染。与控制组相比，显著地显示出的结果减少了(P<0.05)LNCaP和PC3，S阶段房间的更低的吝啬的百分比和G2/M的更高吝啬的百分比的SMOmRNA表情分阶段执行房间，以及显然减缓增长(P<0.01)在感染的组的LNCaP。然而，PC3的增长没被改变(P>0.05)。在结论，recombinantlentivirus粒子能压制SMO表示，在LNCaP和PC3房间线调整房间周期并且显著地禁止LNCaP房间然而并非PC3房间的增长。

简介：

简介：摘要目的观察差异显示编码3(DD3)启动子调控的携带精子相关抗原9(SPAG9)基因短发夹RNA(shRNA)的新型溶瘤腺病毒(DD3-ZD55-SPAG9)对激素依赖性前列腺癌LNcap细胞系裸鼠移植瘤的治疗作用。方法构建裸鼠前列腺癌LNCaP细胞皮下移植瘤模型，当肿瘤体积为100 mm3随机分成3组，空白对照组(PBS组)、对照病毒组(ZD55-SPAG9组)、病毒组(DD3-ZD55-SPAG9组)。测量肿瘤体积，绘制肿瘤时间-体积生长曲线。苏木精-伊红(HE)染色观察肿瘤细胞的生长。原位缺口末端标记法(TUNEL)检测肿瘤组织内细胞凋亡。免疫组织化学检测肿瘤组织中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和Caspase-8蛋白的表达。采用方差分析(One way-ANOVA)，组间比较采用SNK法。结果成功构建裸鼠LNcap细胞移植瘤模型。DD3-ZD55-SPAG9组、ZD55-SPAG9组和PBS组移植瘤终体积分别为(1 104.04±110.39)、(1 003.20±150.89)和(2 321.36±173.87) mm3。DD3-ZD55-SPAG9组和ZD55-SPAG9组肿瘤体积均小于PBS组，差异有统计学意义(F＝203.997，P<0.05)，但DD3-ZD55-SPAG9组、ZD55-SPAG9组之间差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色结果显示，DD3-ZD55-SPAG9组和ZD55-SPAG9组的肿瘤组织中均可见较多的死细胞，细胞裂解成碎片，细胞核固缩碎裂，其正常的组织结构消失，两者差异无统计学意义(P>0.05)。TUNEL结果显示，DD3-ZD55-SPAG9组和ZD55-SPAG9组的肿瘤组织切片荧光下均可见较多红色信号，提示细胞凋亡，凋亡信号强度明显高于PBS组，差异有统计学意义(F＝80.932，P<0.05)，两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学法检测肿瘤组织中Caspase-3和Caspase-8蛋白表达的结果显示，DD3-ZD55-SPAG9组和ZD55-SPAG9组与PBS组比较，Caspase-3和Caspase-8蛋白表达量增多，差异有统计学意义(F＝73.848、61.514，P<0.05)，两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论DD3-ZD55-SPAG9可以有效抑制前列腺癌LNCaP细胞皮下移植瘤的生长，与对照病毒ZD55-SPAG9比较差异无统计学意义，其机制包括抑制肿瘤细胞生长、诱导凋亡。

简介：摘要目的探讨miR-6893-5p对前列腺癌LNCaP细胞增殖和迁移的影响及其作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测miR-6893-5p在前列腺癌细胞系（DU-145、PC-3、C4-2B、LNCaP）及正常前列腺上皮细胞（RWPE-1）中的表达。选择miR-6893-5p表达最低的细胞系，分别感染携带无意义序列的重组慢病毒（NC组）和携带miR-6893-5p序列的重组慢病毒（miR-6893-5p组）。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法和划痕实验观察两组细胞的增殖和迁移情况。采用生物信息学预测和双荧光素酶检测系统验证miR-6893-5p的靶基因。RT-qPCR和Western blot分别检测靶基因的表达。结果miR-6893-5p在前列腺癌细胞系中的表达明显低于RWPE-1细胞（P＜0.05），LNCaP细胞中miR-6893-5p的表达最低（P＜0.01）。与NC组相比，miR-6893-5p上调可明显抑制LNCaP细胞的增殖能力和迁移能力（均P＜0.05）。双荧光素酶检测证实miR-6893-5p可与S100钙结合蛋白A16（S100 calcium binding protein A16，S100A16）靶向结合（P＜0.01）。NC组和miR-6893-5p组LNCaP细胞中S100A16 mRNA相对表达量分别为（1.01±0.07）和（0.22±0.06），与NC组相比，miR-6893-5p能够抑制LNCaP细胞中S100A16的表达（P＜0.01）。结论miR-6893-5p对前列腺癌LNCaP细胞增殖和迁移具有明显的抑制作用，其作用机制可能与负向调控S100A16基因表达有关。

简介：【摘要】目的：探讨siRNA 沉默HnRNP L基因对RWPE-1细胞、Lncap细胞、PC3细胞生物学行为的影响。方法：通过合成了靶向HnRNP L的特异性siRNA，并通过了Western Blot在蛋白水平上进行检测，并筛选出干扰效率最高的3号序列来干扰RWPE-1细胞、Lncap细胞、PC3 细胞中HnRNP L的表达，观察其对三种不同细胞生长、凋亡、体外侵袭能力及迁移能力的差异。结果：沉默HNRNPL后，CCK-8实验提示三种细胞的增值都明显降低，划痕实验结果提示：沉默HNRNPL后，RWPE-1细胞和PC3细胞的迁移力明显减弱。Transwell检测结果提示：沉默HNRNPL后，RWPE-1细胞、Lncap细胞和PC3细胞的侵袭能力明显减弱。结论：HnRNPL对前列腺癌的多种生物学行为有明显的影响，参与了前列腺癌的发生、发展的恶性进程，促进了前列腺癌的生长、侵袭和转移。

简介：摘要目的探讨雄激素受体（AR）对从前列腺癌LNCaP细胞中分选出的CK5+CK8+细胞的作用及其调控机制。方法采用流式细胞术从LNCaP细胞中分选CK5+CK8+细胞，使用慢病毒载体携带AR基因转入CK5+CK8+细胞。实验分为转入AR的AR CK5+CK8+组和转入空载体的V CK5+CK8+组，在1、10 nmol／L二氢睾酮（DHT）培养条件下，采用蛋白质印迹法检测AR、p-AKT和bcl-2蛋白的表达，应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法、细胞迁移实验和琼脂糖凝胶克隆形成实验检测AR对CK5+CK8+细胞生物学特性的影响。采用MTT法检测应用AKT信号通路活化抑制物LY 294002（LY）、γ-生育三烯酚（γ-TT）和（或）诱导AR表达的5-氮胞嘧啶（5-AZA）对CK5+CK8+细胞增殖的影响。结果AR基因转入CK5+CK8+细胞后，AR表达增强，p-AKT和bcl-2蛋白表达水平降低。在1、10 nmol／L DHT作用2、4、6 d后，AR CK5+CK8+组细胞较V CK5+CK8+组细胞增殖受抑制程度高，差异均有统计学意义（均P<0.05）。DHT 1、10 nmol／L作用3 d后，AR CK5+CK8+组细胞较V CK5+CK8+组细胞迁移能力下降[迁移细胞数：（54±9）个比（113±21）个，（13±3）个比（34±6）个]，差异均有统计学意义（t＝4.450，P<0.01；t＝5.157，P<0.01）。DHT 1、10 nmol／L作用3周后，AR CK5+CK8+组细胞较V CK5+CK8+组细胞成瘤能力弱[克隆数：（39±　7）个比（105±16）个，（41±6）个比（86±6）个]，差异有统计学意义（t＝6.631，P<0.01；t＝8.662，P<0.01）。5 nmol／L LY＋10 nmol／L 5-AZA、5 nmol／L LY＋5 nmol／L γ-TT、10 nmol／L 5-AZA＋5 nmol／Lγ-TT、2.5 nmol／L LY＋5 nmol／L 5-AZA＋2.5 nmol／L γ-TT联合1 nmol／L DHT或10 nmol／L DHT作用2、4、6 d均能抑制CK5+CK8+细胞增殖（均P<0.05）。结论AR可以抑制从LNCaP中分选出的CK5+CK8+细胞增殖，导致细胞迁移和成瘤能力下降；其可能通过抑制AKT-bcl-2信号通路的活化而发挥作用。

简介：摘要目的观察荷载核基质结合区结合蛋白1(SATB1)短发卡RNA(shRNA)溶瘤腺病毒联合多西他赛(DTX)对激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞株裸鼠移植瘤的治疗作用。方法构建裸鼠前列腺癌LNCaP细胞皮下移植瘤模型(裸鼠购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司)，随机分成4组：空白对照组(PBS组)、化疗组(DTX组，20 mg/kg)、病毒治疗组(ZD55-SATB1组，1×108 pfu)、病毒联合化疗组(ZD55-SATB1＋DTX组，5×107 pfu＋10 mg/kg)。绘制肿瘤时间-体积生长曲线。苏木精-伊红(HE)染色观察肿瘤细胞的生长。免疫组织化学检测肿瘤组织中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和CD31蛋白的表达。脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测肿瘤组织细胞凋亡。采用方差分析(One way-ANOVA)，组间比较采用t检验。结果成功构建裸鼠LNCaP细胞移植瘤模型。病毒联合化疗组、病毒治疗组、化疗组和空白对照组移植瘤终体积分别为(616.23±101.56)、(938.59±102.98) mm3(t＝3.860，P<0.05)、(1 206.92±202.17) mm3(t＝4.522，P<0.05)和(2 254.05±188.99) mm3(t＝13.220，P<0.01)，差异均有统计学意义。HE染色结果显示，病毒联合化疗组、病毒治疗组和化疗组的肿瘤组织中均可见较多的死细胞，细胞裂解成碎片，细胞核固缩碎裂，其正常的组织结构消失，但联合组的肿瘤细胞坏死更明显。免疫组织化学法结果显示化疗组、病毒治疗组、病毒联合化疗组内Caspase-8、Caspase-3、bcl-2和CD31的相对蛋白表达量分别为2.11±0.41、1.67±0.21、0.65±0.06、0.78±0.05(t＝4.136、10.930、5.523、8.162，P<0.05)；2.39±0.33、2.61±0.51、0.56±0.06、0.68±0.04(t＝5.594、4.119、3.242、6.010，P<0.05)；3.42±0.37、3.61±0.23、0.44±0.02、0.50±0.04，联合组与单用药物或病毒组比较，Caspase-8、Caspase-3蛋白表达量增多，bcl-2蛋白表达量降低，差异有统计学意义。联合组移植瘤组织中CD31蛋白的表达量与单用药物或病毒组比较显著降低，说明联合组能有效促进促凋亡蛋白的表达，降低抑凋亡蛋白的表达，且在一定程度上抑制肿瘤组织血管的生成。TUNEL结果显示：化疗组、病毒治疗组、病毒联合化疗组的肿瘤组织切片荧光下均可见较多红色信号，提示细胞凋亡，各组凋亡率分别为(26.17±2.97)%(t＝9.557，P<0.01)、(35.68±3.46)%(t＝3.931，P<0.05)、(44.07±1.30)%，联合组内凋亡细胞更为明显，差异有统计学意义。结论溶瘤腺病毒和多西他赛均可抑制前列腺癌LNCaP细胞皮下移植瘤的生长，且联合效果优于单一用药，其可能的机制包括抑制肿瘤细胞生长、诱导凋亡、抑制血管生成。

简介：目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228对前列腺癌LNCaP细胞抑制作用的细胞信号机制。方法Westernblot分析细胞蛋白乙酰化水平、细胞信号通路蛋白及细胞周期相关蛋白的表达。结果FK228能够使细胞内蛋白乙酰化水平增高，乙酰化组蛋白H3积累，多种细胞信号通路的相关蛋白如雄激素受体、HER-2、Raf-1、Akt、CDK4等呈时间依赖性和剂量依赖性被清除。结论FK228能够同时阻断对细胞生长具有重要作用的多条细胞信号通路，从而对前列腺癌LNCaP细胞发挥抑制作用。

简介：摘要目的观察溶瘤腺病毒差异显示编码3(DD3)-ZD55-精子相关抗原9(SPAG9)在体外对激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞的治疗效果，并探讨作用机制。方法将LNCaP细胞分为4组进行干预，分别为磷酸盐缓液组(PBS)、病毒对照组[ZD55-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)，10 MOI]、病毒治疗组(ZD55-SPAG9，10 MOI)、DD3启动子调控组(DD3-ZD55-SPAG9，10 MOI)。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率；Transwell检测细胞迁移和侵袭能；蛋白质印迹法(Western blot)检测SPAG9、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和腺病毒早期区1A基因(E1A)的表达。多组之间采用方差分析，进一步组间比较采用SNK法。结果CCK-8结果，DD3-ZD55-SPAG9组、ZD55-SPAG9组和ZD55-EGFP组LNCaP细胞存活率均显著低于PBS组[(73.80 1.43)%、(73.66 2.19)%、(81.79 2.59)%比100%，F＝1038.210，P<0.01]，ZD55-SPAG9组与DD3-ZD55-SPAG9组细胞存活率降低更为显著，但两者之间存活率差异无统计学意义(P>0.05)。Transwell迁移结果，DD3-ZD55-SPAG9组、ZD55-SPAG9组和ZD55-EGFP组小室底膜细胞数明显低于PBS组[(52.57±5.57)、(48.67±4.04)、(69.67±6.02)比(109.06±9.54)，F＝384.466，P<0.05]，ZD55-SPAG9组与DD3-ZD55-SPAG9组细胞迁移能力降低更为显著，且两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。侵袭实验结果，DD3-ZD55-SPAG9组、ZD55-SPAG9组和ZD55-EGFP组穿透Matrigel胶，进入小室下层的细胞数目明显少于PBS组[(58.33±3.79)、(55.36±7.51)、(78.06±4.36)比(115.67±11.59)，F＝305.885，P<0.01]，提示细胞侵袭能力显著降低，ZD55-SPAG9组与DD3-ZD55-SPAG9组细胞侵袭能力降低更为显著。Western blot结果显示，与PBS组比较，DD3-ZD55-SPAG9组、ZD55-SPAG9组和ZD55-EGFP组内SPAG9蛋白表达下调[(0.32±0.07)、(0.47±0.09)、(0.66±0.05)比1，F＝594.522，P<0.01]，E-cadherin表达上调[(4.80±0.34)、(3.80±0.35)、(2.81±0.52)比1，F＝482.275，P<0.01]，Vimentin表达下调[(0.33±0.04)、(0.46±0.06)、(0.53±0.05)比1，F＝903.749，P<0.01]，MMP-2表达下调[(0.30±0.03)、(0.44±0.05)、(0.60±0.05)比1，F＝1 540.940，P<0.01]，上述变化在ZD55-SPAG9组与DD3-ZD55-SPAG9组内更为显著。WPMY-1细胞内E1A在DD3-ZD55-SPAG9组内的表达明显低于ZD55-SPAG9和ZD55-EGFP组。结论溶瘤腺病毒DD3-ZD55-SPAG9在体外可以有效降低LNCaP细胞的存活率，并抑制迁移和侵袭，并对正常细胞具有更高的安全性。

简介：摘要目的观察荷载核基质结合区结合蛋白1(SATB1)短发卡RNA(shRNA)的溶瘤腺病毒(ZD55-SATB1)联合多西他赛(DTX)在体外对激素敏感前列腺癌LNcap细胞的影响，并探讨作用机制。方法将LNcap细胞(购自上海中国科学院细胞库)分为5组进行干预，分别为磷酸盐缓冲液组(PBS)、多西他赛化疗药物组(DTX为2 μg/L)、病毒对照组[ZD55-EGFP为10感染复数(MOI)]、病毒治疗组(ZD55-SATB1为10 MOI)、病毒联合化疗药物组(ZD55-SATB1＋DTX为5 MOI＋1 μg/L)。Transwell检测细胞迁移和侵袭能力变化；脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡；蛋白质印迹法(Western blot)检测SATB1、腺病毒早期区1A基因(E1A)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8与bcl-2的表达。采用t检验。结果Transwell迁移结果显示，ZD55-SATB1联合DTX组干预LNcap细胞24 h后的细胞穿膜数为(28.20±3.19)个，与ZD55-SATB1组[(39.60±4.98)个](t＝4.309，P<0.01)、ZD55-EGFP组[(52.60±6.02)个](t＝8.001，P<0.01)、DTX组[(65.50±5.12)个](t＝13.710，P<0.01)、PBS组为(106.60±5.18)个(t＝28.820，P<0.01)比较，病毒与化疗药物治疗组穿膜细胞数显著降低，细胞迁移能力显著降低，差异有统计学意义；Transwell侵袭实验结果：联合组穿透Matrigel胶进入小室下层的细胞数为(23.60±3.58)个，与ZD55-SATB1组[(32.40±5.08)个](t＝3.088，P<0.05)、ZD55-EGFP组[(39.60±2.70)个](t＝7.610，P<0.01)、DTX组[(44.60±4.62)个](t＝7.815，P<0.01)、PBS组为(98.20±4.32)个(t＝28.820，P<0.01)比较，细胞侵袭能力明显降低，差异有统计学意义。TUNEL结果显示，各治疗组细胞凋亡率均高于PBS对照组[(5.92±0.90)%]，但联合组[(34.48±4.25)%]与ZD55-SATB1组[(28.12±2.50)%](t＝2.582，P<0.05)、ZD55-EGFP组[(23.30±3.03)%](t＝4.752，P<0.01)、DTX组[(22.35±2.44)%](t＝4.956，P<0.01)比较，细胞凋亡更加明显，差异有统计学意义。Western blot结果显示，联合组内SATB1蛋白表达下调，E-cadherin表达上调，Vimentin和MMP-2表达下调，Caspase-8和Caspase-3表达上调，bcl-2表达下调更为显著。E1A基因在联合组内正常表达，说明联合使用DTX不影响腺病毒复制增殖。结论ZD55-SATB1联合DTX在体外可以有效抑制LNcap细胞的迁移和侵袭能力，并诱导肿瘤细胞凋亡，效果优于单独使用ZD55-SATB1或DTX，其机制可能是通过上调E-cadherin同时下调Vimentin和MMP-2的表达抑制迁移侵袭能力，抑制了上皮-间充质转化(EMT)进程，并通过上调Caspase-8和Caspase-3，下调bcl-2诱导肿瘤凋亡。

简介：摘要目的观察DD3启动子、E1B55KD缺失双调控并荷载核基质结合区结合蛋白1(SATB1)短发卡RNA(shRNA)的条件增殖腺病毒DD3-ZD55-SATB1联合多西他赛(Docetaxel，DTX)对激素敏感性前列腺癌LNcap细胞的杀伤效果并探讨作用机制。方法LNcap细胞来源于上海中科院细胞库。将LNcap细胞分为4组进行干预，分别为联合组(DD3-ZD55-SATB1+DTX，5 MOI+1 ng/ml)、病毒治疗组(DD3-ZD55-SATB1，10 MOI)、多西他赛组(DTX，2 ng/ml)、磷酸盐缓液组(PBS)。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖；Transwell检测细胞迁移和侵袭；Hoechst-33258检测细胞凋亡；蛋白质印迹法(Western blot)检测SATB1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、Caspase-3与Caspase-8的表达。采用单因素方差分析进行多组件比较。结果CCK-8结果，联合组吸光度值为1.95±0.12、DD3-ZD55-SATB1组为2.33±0.03(t＝5.43，P<0.01)、DTX组为2.68±0.09(t＝8.42，P<0.01)，PBS组为3.49±0.04(t＝21.71，P<0.01)，联合组的吸光度值显著低于单一治疗组。Transwell结果：联合组穿透小室膜的细胞数为49.25±6.24、DD3-ZD55-SATB1组为79.25±7.41(t＝6.19，P<0.05)、DTX组为80.75±4.57(t＝8.15，P<0.05)，PBS组为118.75±5.38(t＝16.88，P<0.01)，联合组小室底膜细胞数较单一治疗组明显减小。Hoechst-33258显示：联合组凋亡率分别为(55.54±5.43)%，DD3-ZD55-SATB1组为(41.23±3.28)%(t＝5.29，P<0.01)，DTX组为(35.15±2.47)%(t＝8.19，P<0.01)，PBS组为(9.62±2.69)%(t＝17.49，P<0.01)，联合组与病毒或化疗药物单一治疗组比较，细胞凋亡更加明显。Western blot结果，以PBS组内的蛋白表达为标准计算为1.00，联合组、DD3-ZD55-SATB1组和DTX组内，SATB1相对表达量分别为0.48±0.04、0.63±0.05和0.79±0.04，联合组内SATB1表达较单一治疗组下调更为显著，差异有统计学意义(t＝4.06、10.38，P<0.01)。E-cadherin、Vimentin和MMP-2蛋白在联合组、DD3-ZD55-SATB1组和DTX组内相对表达量分别为2.25±0.14、0.48±0.07、0.45±0.04，1.83±0.12、0.69±0.07、0.65±0.05和1.60±0.06、0.79±0.04、0.76±0.05。与PBS组比较，治疗组内E-cadherin表达上调，Vimentin和MMP-2的表达下调，联合组内E-cadherin的上调与Vimentin和MMP-2的下调更为显著，与单一治疗组比较，差异有统计学意义(t＝3.94、3.79、5.48，P<0.05；t＝7.43、6.99、8.88，P<0.01)。凋亡相关蛋白Caspase-8和Caspase-3的相对表达量分别为2.38±0.14、2.44±0.16，1.84±0.07、1.90±0.05和1.70±0.13、1.67±0.07。各治疗组内Caspase-8和Caspase-3的表达较PBS组明显上调。联合组内Caspase-3和Caspase-8的上调更为显著，与单一治疗组比较，差异有统计学意义(t＝5.89、5.75，P<0.01；t＝6.26、7.91，P<0.01)。结论DD3-ZD55-SATB1联合DTX在体外可有效抑制LNcap细胞的增殖、迁移和侵袭，并诱导肿瘤细胞凋亡，且优于单独使用DD3-ZD55-SATB1或DTX，其作用机制为抑制上皮-间充质转化进程和上调Caspase-8和Caspase-3诱导肿瘤凋亡有关。