简介: 摘要:将水栀子通过五种不同的炮制方法进行栀子苷的含量对比,并比较五种炮制品的栀子苷含量。使在临床应用方面更加方便,其药用资源利用更加充分。方法 把水栀子通过炒黄、炒焦、制碳、姜制、甘草水制的方法进行炮制。采用HPLC测定,流动相为乙腈-水(15:85),测定水栀子炮制后栀子苷的含量差异。并进行对比。结果 在炮制工艺中,栀子苷的含量随加工温度和加工时间的延长而下降。且姜制和甘草水制的炮制品都有降低栀子苷造成的肝肾毒性。结论 由于水栀子与栀子化学成分分布相似,但含量差别较大。且水栀子栀子苷的含量较大。所以可以通过提取的方法来进行栀子苷的提取,以达到资源的利用。栀子苷中都含有肝肾毒性,可以通过炮制的方法来降低此毒性。
简介:摘要目的探讨节律基因隐花色素2(CRY2)在银屑病小鼠模型及HaCaT细胞中的表达变化及其机制。方法咪喹莫特诱导小鼠模型实验:12只C57BL/6雌鼠随机均分为咪喹莫特组(连续外用咪喹莫特乳膏5 d诱导构建银屑病小鼠模型,6只)和对照组(不予任何处理,6只),第6天处死小鼠,取其背部皮肤组织,免疫荧光染色检测表皮中CRY2的表达。HaCaT细胞转染实验:使用小干扰RNA(siRNA)技术在HaCaT细胞中敲减CRY2的表达(siRNA-CRY2组),以siRNA-NC组作为对照,5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色检测HaCaT细胞增殖活力,实时荧光定量PCR(qPCR)检测HaCaT细胞中趋化因子mRNA表达水平,Western印迹检测细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白的磷酸化水平。肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激动物和细胞实验:12只C57BL/6雌鼠随机均分为TNF-α组(小鼠耳部皮下连续注射TNF-α溶液6 d,6只)和磷酸盐缓冲液(PBS)组(注射等量的PBS,6只),第7天处死小鼠,取其耳部皮肤组织,免疫荧光染色检测表皮中CRY2的表达;用50 ng/ml TNF-α刺激CRY2基因敲减的HaCaT细胞12 h(siRNA-CRY2 + TNF-α组),以siRNA-NC + TNF-α组作为对照,qPCR检测各组细胞中趋化因子mRNA的表达。统计分析采用两独立样本t检验。结果免疫荧光染色显示,咪喹莫特组小鼠背部表皮层中CRY2蛋白的表达(0.94 ± 0.23)显著低于对照组(2.30 ± 0.25,t = 3.99,P = 0.016)。HaCaT细胞转染实验:siRNA-CRY2组EdU阳性细胞比例(48.13% ± 10.97%)显著高于siRNA-NC组(38.23% ± 0.81%,t = 5.00,P = 0.007),且siRNA-CRY2组趋化因子CXCL1、CXCL8 mRNA相对表达量及p-ERK1/2蛋白相对表达量均显著高于siRNA-NC组(均P < 0.05),但两组间CCL20 mRNA表达量及ERK1/2蛋白表达量差异无统计学意义(均P > 0.05)。TNF-α刺激实验:免疫荧光染色显示,TNF-α组鼠耳表皮组织中CRY2蛋白表达水平(0.37 ± 0.34)显著低于PBS组(2.04 ± 0.17,t = 4.38,P = 0.012);siRNA-CRY2 + TNF-α组HaCaT细胞趋化因子CXCL1、CXCL8、CCL20 mRNA相对表达量均显著高于siRNA-NC + TNF-α组(均P < 0.05)。结论CRY2在银屑病小鼠模型中表达降低,促进了角质形成细胞的增殖以及趋化因子CXCL1、CXCL8和CCL20的表达,且TNF-α可能是下调CRY2表达的上游细胞因子。
简介:摘要目的验证黄芪甲苷对照品溶液(0.2mg/ml)在特定的储存条件下储存一个月。方法对黄芪甲苷含量检测的准确性方法分别将制备两份供试品溶液A、B,在第1天(配制当天)与新鲜配置的0.2mg/ml黄芪甲苷对照品溶液进行色谱分析。在第7、14、21、28、35天同样将供试品溶液A、B进行色谱分析。结果两份对照品储备液在各个时间点所检测的外观与供试品相比,没有出现异常情况;以及储备液在各时间点测得的含量与供试品相比,在第0天的绝对差值均小于2.0%,而各测试点与第一天的RSD值均小于2.0%。结论将0.2mg/ml黄芪甲苷对照品溶液存储于棕色容量瓶,封口膜密封,2℃~8℃的冰箱中,在一个月内均可以用于检测黄芪甲苷含量,并可以保证检测的准确性。