简介:目的:从海参体壁组织中分离提取蛋白酶体,研究其酶学性质。方法:新鲜海参组织经匀浆、Tris-HCl缓冲液浸提后得到粗提物,再经(NH4)2SO4盐析、二乙氨乙基葡聚糖纤维素和丙烯葡聚糖凝胶S-300分离纯化后得到海参蛋白酶体。经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,其分子质量200ku。结果:海参蛋白酶体特异性最强的检测底物Boc-GAA-MCA,最适pH8.0,最适反应温度45℃。40℃时蛋白酶体活性稳定,在1h的孵育过程中呈现一定的热激活效应。在50~60℃,酶活力随孵育时间的延长迅速下降。K+、Ca2+、Mg2+、Zn2+均可明显抑制其活性。抗痛素、N-甲苯磺酰-L-赖氨酸氯甲基化酮、N-甲苯磺基-L-苯乙胺酰氯甲基酮及E-64均可显著抑制该蛋白酶体活性。结论:海参体壁蛋白酶体具有典型的蛋白酶体的复合型活性,其中胰蛋白酶样活性较强,之后是糜蛋白酶样活性,而肽基谷氨酰肽水解酶样活性最弱。
简介:目的:探讨用蛋白质组学iTRAQ技术分析大鼠下颌骨牵张成骨过程中新生组织蛋白表达的改变。方法:6只大鼠进行单侧下颌骨牵张,速率:0.4mm/d,牵张期为10d,术后随机分为2组,分别于下颌骨牵张成骨牵张期第10d及下颌骨牵张成骨固定期第14d取材。将取材的新生骨组织标本进行蛋白质提取及蛋白质定量检测。应用iTRAQ技术对蛋白质样本进行检测,寻找及鉴定差异蛋白。结果:应用iTRAQ技术对大鼠下颌骨牵张成骨的新生骨组织成功进行了蛋白质组学分析,质谱鉴定出置信度95%的蛋白质共567种,共鉴定出差异蛋白207个,其中上调≥1.5倍的47个,下降≤0.8倍的58个。结论:筛选出多种与牵张成骨过程中新骨形成相关的差异表达蛋白质,为进一步验证与新骨形成相关的蛋白质奠定基础。
简介:目的:总结小儿肺炎支原体(mycoplasmapneumoniae,MP)脑炎临床特点与诊断方法,探讨阿奇霉素联合丙种球蛋白治疗儿童支原体脑炎的联合治疗的效果。方法:以随机对比方法观察儿童支原体脑炎的临床资料,观察阿奇霉素单药治疗(对照组)与阿奇霉素联合丙种球蛋白(观察组)治疗儿童支原体脑炎的临床效果。结果:两组患者经过积极的治疗之后,无死亡病例。观察组的总有效率为93.94%(31/33),显著高于对照组总有效率72.73%(24/33),差异有统计学差异(字2=5.82,P〈0.05);观察组患儿的发热、抽搐、意识障碍、肢体活动、脑脊液检查等主要症状与体征消失时间明显短于对照组,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论:阿奇霉素联合丙种球蛋白治疗效果优于阿奇霉素单药治疗。
简介:摘要目的观察自体富血小板纤维蛋白(PRF)促进兔耳皮肤创面愈合的效果。方法制备兔耳创面,随机分为实验组(创面敷PRF)和对照组(普通换药),术后通过大体观察,计算创面面积和组织学切片来观察伤口愈合情况。结果术后实验组创面的缩小速度明显高于对照组,更快愈合。结论自体富血小板纤维蛋白可以明显地促进兔耳皮肤创面的愈合。
简介:目的应用自制的大肠癌相关蛋白SCAP47作为抗原制备兔多抗血清和鼠单克隆抗体,测定效价,鉴定特性,为相关抗体的临床应用提供可行性依据。方法①制备兔多抗血清:实验动物为纯种新西兰白兔,卡介苗基础免疫后,分次多点注射抗原,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和双向凝胶扩散法测血清效价,分离高效价血清。②制备小鼠单克隆抗体:实验动物为BALB/c小鼠,分次腹腔、脾内注射抗原蛋白乳剂和水剂,采用ELISA测血清效价,高效价鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合,有限稀释法亚克隆阳性细胞株,克隆细胞种植小鼠腹腔,收获腹水,纯化单克隆抗体,鉴定抗体效价、亚类、纯度。结果①3只实验兔中2只产生了一定效价的多抗血清,多抗血清效价:间接ELISA结果兔1为1:6400,兔2为1:1600;琼脂糖双扩试验结果兔1为l:32,兔2为1:4。②克隆了2株能产生抗SCAP47抗原的单克隆抗体细胞株抗SCAP47-B1和抗SCAP47-B2,将细胞种植于BALB/c小鼠腹腔,成功诱导小鼠腹水生成,以50、22kD为主要蛋白,Westernblot试验证实为小鼠IgG,琼脂糖双扩试验显示为小鼠IgG2a亚型;免疫荧光细胞组织化学试验显示,SCAP47蛋白在大肠癌细胞膜表面可表达,正常对照细胞未见表达,大肠癌细胞膜表面表达的SCAP47蛋白可与抗SCAP47-B1细胞株分泌的抗体产生特异性结合反应;纯化的单克隆抗体效价:SCAP47-B1为1:1600,SCAP47-B2则达到1:6400。结论通过杂交瘤单克隆抗体技术制备和纯化的抗SCAP47单克隆抗体,经效价检测和性质鉴定,证明初步达到了免疫试验的要求,为进一步的临床应用提供了可行性依据。
简介:目的研究尿纤维连接蛋白试纸(FN试纸)诊断膀胱尿路上皮癌的灵敏度和特异度,探讨其与膀胱尿路上皮癌各项临床指标之间的关系,为进一步无创性地诊断、随访膀胱尿路上皮癌提供依据.方法运用自主研制的FN试纸测定膀胱尿路上皮癌患者、良性泌尿系疾病患者、正常体检人群尿液纤维连接蛋白.结果FN试纸诊断膀胱尿路上皮癌的敏感度和特异度分别为72.94%和79.03%,其阳性预测值和阴性预测值分别为85.67%和68.06%;尿液细胞学诊断膀胱尿路上皮癌的特异度较高(100%),但其敏感度仅为47.06%.结论FN试纸检测对不同分化及浸润深度的膀胱尿路上皮癌有着较高的灵敏度与特异度,诊断价值高于尿液液基细胞学检查,但不能对膀胱肿瘤的分级以及病灶数量进行检测.