反相高效液相色谱法测定丹参妇康胶囊中芍药苷的含量

【摘要】 　　目的建立测定丹参妇康胶囊中芍药苷含量的方法。方法色谱柱Reliasil C18（5 μm,250 mm×4.6 mm），保护柱(5μm,12.50 mm × 4.6 mm)，以乙腈-0.02 mol·L-1磷酸二氢钠溶液（26∶74）为流动相，检测波长为230 nm, 柱温30℃， 流速为1.0 ml·min-1。结果芍药苷在0.496～29.76 μg·ml-1 线性范围与色谱峰的峰面积积分值呈良好的线性关系，r=0.999 5；芍药苷平均回收率98.82 %，RSD=2.11%。结论该方法简便，分离完全，结果可靠，能够有效控制该制剂的质量。

【关键词】 芍药苷 丹参妇康胶囊 反相高效液相色谱

　　Abstract:ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of paeoniflori in Fukang capsules. MethodsAnalytical column: Reliasil C18（5μm,250 mm×4.6 mm）, protective column：（5 μm,12.50 mm×4.6 mm) ; mobile phrase: acetonitrile-0.02mol·L-1phosphate buffer (26∶74)； detective wavelength was at 230 nm; temperature was at 30℃；the flow rate was about 1.0 ml·min-1. ResultsThe standard curve showed a good linearity in the range of 0.496～29.76 μg·ml-1, r=0.999 5. The average recovery was 99.82% and RSD was 2.11%.ConclusionThe method is feasible and simple to operate, and it is suitable for the quality control of Fukang capsules.

　　Key words:Paeoniflori; Fukang capsules; HPLC

　　丹参妇康颗粒依据中医药理论，采用现代制剂技术制成的含有当归、丹参、赤芍、红花等5味药材的中药复方制剂，该方剂在治疗月经不调、痛经、闭经、产后淤血腹痛不孕等方面疗效显著［1］。赤芍是本方主药，其主要成分为芍药苷，具有镇静、解痉、抗炎、抗凝血、抗血栓等多方面的作用［2］。本实验采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）对该胶囊剂中的芍药苷测定方法进行了研究，结果表明，该方法简便可行，结果准确，其他成分无干扰。适用于该制剂的含量测定，能够有效控制丹参妇康胶囊的质量。

　　1 仪器与试药

　　1.1 仪器

　　HP1100 HPLC , HPRev.A.05.01［273］色谱工作站, 1314A-UV 检测器，AE-200电子天平（瑞士）, KS-5000超声波清洗器 (宁波)。

　　1.2 试药

　　丹参妇康胶囊（040307）, 芍药苷对照品（0736-200117中国药品生物制品检定所），所用其余试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件色谱柱： Reliasil C18（5 μm,250 mm×4.6 mm）,保护柱： (5 μm,12.50 mm×4.6 mm);流动相：乙腈-0.02 mol·L-1磷酸二氢钠溶液（26∶74）；检测波长230 nm; 柱温30℃；流速：1.0 ml·min-1；进样量10 μl；芍药苷保留时间为10 min左右。

　　2.2 供试品溶液的制备

　　取中药颗粒约2 g，精密称定，置索式提取器中［3］，加50 ml乙醇提取1 h，将乙醇挥干后，加流动相于残渣中并定量转移到25 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，用0.45 μm 微滤膜过滤，量取1 ml置于塑料离心管中，离心(8 000 r/min，4 min)，取上清液，作为供试品溶液。

　　2.3 阴性对照液的测定

　　取不含赤芍处方同法制备的阴性样品，按样品测定项下方法制备阴性溶液。

　　2.4 芍药苷标准曲线的制备

　　取干燥至恒重的芍药苷对照品约12 mg，精密称定，置100 ml棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得对照品储备液。精密吸取芍药苷对照品储备液0.04，0.12，0.36，1.2，2.4 ml，分别置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别吸取10 μl，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定峰面积，将进样浓度（X）与峰面积（Y）进行回归处理，回归方程为：Y=116 848.53X+592.90,r=0.999 5。实验表明，芍药苷对照品在0.496～29.76 μg·ml-1范围内具有良好的线性关系。

　　2.5 精密度实验

　　精密吸取对照品溶液、同一供试液各10 μl ，重复进样5次，测定峰面积，计算相对标准偏差。 结果对照品平均RSD为0.41%，供试品平均RSD为2.84%。2.6 重现性实验

　　取样品适量粉碎，精密称取5份，每份1 g，按“2.2”项下制备供试液，上述色谱条件测定，结果：芍药苷含量的平均RSD为3.36%。

　　2.7 稳定性实验

　　取同一份芍药苷对照品溶液，分别室温放置不同时间测定，结果表明，样品至少在12 h内稳定。

　　2.8 加样回收率的实验

　　取本品（040307）5份各1 g，精密称定，置50 ml索式提取器中，加入芍药苷对照品，按“2.2”项下制备供试液，依法测定，结果芍药苷平均回收率：98.82%，RSD为2.11%（n=5）。

　　2.9 方法可行性考察

　　分别取芍药苷对照品溶液、样品溶液、阴性对照溶液，在上述色谱条件下测绘HPLC图谱，结果见图1。由图1可知，阴性样品溶液对测定无干扰，芍药苷与其他组分分离良好，方法可行。

　　2.10 样品的测定

　　样品按2.2项下处理后，按上述色谱条件测定样品3批次，每批次取3个样品。精密吸取供试品液10 μl，结果芍药苷平均含量为1.167 mg·g-1。

　　3 讨论

　　3.1 流动相选择

　　在进行流动相的选择时，依据文献［3～5］进行了大量的摸索实验，实验中发现甲醇-水体系色谱柱压较高，且芍药苷理论塔板数低，保留时间长；选用乙腈-水-冰醋酸（16∶84∶0.8）为流动相时,柱效符合要求但芍药苷峰的保留时间较长约为16 min。而文中所确定的流动相则芍药苷峰的保留时间为10 min，柱效5 000以上,峰形较好,分离度大于1.5,因此我们选其为流动相［6］。再者由于本品是一个由5味中药组成的复方制剂, 在样品测定时，供试样品中含有一些极性小的物质不易从色谱柱上洗脱, 若连续进样，易造成芍药苷位置附近有杂质干扰, 影响其分离效果。因此在样品测定时, 需要经常用乙腈对色谱柱进行冲洗, 以除去弱极性物质, 以保证样品的重现性和色谱的分离性能。

　　3.2 提取方法的选择
　
　　分别用甲醇、乙醇、甲醇-水及乙醇-水作溶媒，选用加热回流提取、超声提取、索氏提取等方法进行摸索提取，实验结果提示，正文所示方法芍药苷提取较完全。

　　3.3 该方法简单、准确可行，可作为控制丹参妇康胶囊质量的方法之一控制制剂质量。

【参考文献】
　　［1］王筠默.中药药理学［M］.上海：上海科学技术出版社,1985：115.

　　［2］王朝虹,闵知大.芍药化学成分及药理研究［J］.时珍国医国药,1999,10(7):544.

　　［3］刘燕, 谢培德, 王宝琴. 丹参及其制剂质量的评价方法［J］.中国中药杂志, 1990, 15(3):31.

　　［4］吴毅,张文惠,王永刚.HPLC法测定安坤颗粒中芍药苷含量［J］.江西中医学院学报,2002,14(1):42.

　　［5］周滢,张永萍 ,梁光义.RP - HPLC测定芍石护睛胶囊中芍药苷的含量［J］.华西药学杂志，2006, 21 (6) : 595.

　　［6］桂双英,周亚球,徐 衡.反相高效液相色谱法测定血府逐瘀软胶囊中芍药苷的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2006，12（11）：12 .