哈萨克族肺癌EGFR基因突变比较分析

哈萨克族肺癌EGFR基因突变比较分析

陈树兴

陈树兴(福州肺科医院胸外科福建福州350000)

【摘要】目的研究哈萨克族中肺癌EGFR基因的突变情况，比较哈萨克族与汉族肺癌EGFR基因突变率的差异。方法收集临床肺癌病理石蜡切片样本124例，包括54例哈萨克族和70例汉族肺癌的样本，采用ARMS（AmplificationRefractoryMutationSystem,ARMS）PCR扩增方法检测EGFR基因外显子18、19、20及21的突变，х2分析对比哈萨克族和汉族肺癌EGFR基因突变差异。结果124例肺癌患者中有41例EGFR基因突变，总突变率为33.1%，其中哈萨克族突变9例，突变率为16.7%，汉族突变32例，突变率为42.8%，哈萨克族肺癌EGFR突变率与汉族肺癌EGFR突变率有显著差异（P<0.001）,突变以外显子19为主要突变点。结论哈萨克族中肺癌EGFR基因突变率为16.7%，汉族中EGFR基因突变率为45.7%，哈萨克族肺癌EGFR突变率显著低于我国汉族EGFR基因突变。

【关键词】肺癌EGFR实时荧光PCR基因突变

【中图分类号】R730.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）18-0058-02

肺癌是世界范围内常见的癌症，发病率和死亡率居各癌症之首。据2010年我国卫生部的统计，肺癌死亡率为30.83/10万。肺癌已经成为发病率和死亡率第一位的恶性肿瘤，其5年生存率仅为15%。表皮生长因子（EpidermalGrowthFactorReceptor,EGFR）是一种跨细胞膜糖蛋白，属于受体型酪氨酸激酶，EGFR信号通路对细胞的生长，增殖和分化等生理过程发挥着重要调节作用。EGFR基因在多种肿瘤中存在突变或过表达,并通过其介导的信号通路调控肿瘤的生长，侵袭、转移和血管新生[1]。以吉非替尼为代表的EGFR酪氨酸激酶抑制剂（TyrosineKinaseInhibitors,TKIs）靶向药物在肺癌的治疗中显示出良好的治疗效果，然而，该类药物的治疗效果在不同个体间存在很大差异。多项临床研究显示，EGFR基因外显子18-21突变是导致不同个体间治疗效果差异的主要原因。因此，根据EGFR基因突变检测结果选择合适的治疗对象，对于提高患者治疗效果，延长患者的生存期有重要意义。目前，已有肺癌的EGFR突变研究还没有针对哈萨克族突变率的报道。本研究检测了54例哈萨克族和70例汉族肺癌患者的EGFR基因，首次报道了哈萨克族肺癌EGFR基因突变率，并对哈萨克族和汉族EGFR基因突变率进行了比较。

1材料与方法

1.1研究对象

收集医院哈萨克族肺癌患者54例，其中男性30例，女性24例；年龄31-75岁，中位年龄50岁。汉族肺癌患者70例，其中男性49例，女性21例；年龄35-79岁，中位年龄57岁。

1.2标本采集与DNA提取

采用病理石蜡切片样品，5微米切片不少于8片，室温保存。所用样品均为病理诊断确定含有肿瘤组织的蜡块切片，并且保存时间不超过两年。取石蜡标本组织，用QIAGEN公司核酸提取试剂盒提取（QIAamp?DNAFFPETissueKit,商品号：564074）DNA，所提DNA溶于Tris-HCl(10mmol/L,pH8.0)，经紫外分光光度计检测提取质量，并确定浓度，用Tris-HCl溶液(10mmol/L,pH8.0)调整DNA浓度到10ng/μl和2ng/μl备用[2]。

1.3实时荧光PCR扩增

采用ARMS（AmplificationRefractoryMutationSystem,ARMS）方法进行PCR扩增，检测EGFR基因18、19、20和21外显子突变。用厦门艾德生物医药科技公司EGFR基因突变检测试剂盒（人类EGFR基因21种突变检测试剂盒）进行检测，实验具体操作步骤参照试剂盒说明书进行操作。采用StrataGeneMX3000P实时PCR仪进行扩增，每次检测样品包括1个阳性质控品，1个NTC对照。如果Ct值为0或Ct值>30，则实验结果判为野生型。所述荧光PCR的反应条件：95oC预变性5分钟，1个循环；95oC变性25秒，64oC退火20秒，72oC延伸20秒，15个循环；93oC变性25秒，60oC退火35秒，72oC延伸20秒，31个循环。

1.4统计学分析

采用SPSS13.0统计软件进行统计学分析，采用х2和Fisher精确检验分析突变差异显著性，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1EGFR突变率

共检测124例肺癌的样本，包括54例哈萨克族，70例汉族，共检测出41例突变，检测总突变率为33.1%。哈萨克族突变9例，突变率为16.7%，汉族突变32例，汉族突变45.7%，以外显子19和21突变较为多见。х2分析表明哈萨克族EGFR突变率显著低于我国汉族EGFR突变率（х2=11.622,p<0.001）结果见表1，突变比例分析图见图1。

在检测的肺癌EGFR基因突变中，外显子19突变率最高，在哈萨克族有5例，占突变数的55.6%，在汉族中有12例，占突变数的37.5%。Fisher精确检验表明哈萨克族外显子19的突变率与汉族的突变率无显著性差异（p=0.45），结果见表2。

3讨论

EGFR属于表皮生长因子ErbB家族,该家族包括HER1,HER2,HER3和HER4四个成员。EGFR是一种细胞表面膜蛋白受体，由1186个氨基酸组成，分子量为170KD，由三个功能不同的结构域组成，包括胞外区、跨膜区和细胞内的酪氨酸区。当EGFR与其相应的信号分子结合后，受体分子之间会形成二聚体，两个受体胞内的酪氨酸激酶彼此作用而相互磷酸化，并启动胞内的级联信号通路，从而引起细胞内一系列形态学的改变[3]。

EGFR基因在多种肿瘤会存在突变或者过表达，并通过其下游信号通路调控肿瘤的生长、增殖和转移。目前，常用EGFR的TKIs抑制剂主要包括吉非替尼和厄洛替尼，是治疗肺癌最有效的靶向药物。然而，该类药物对EGFR突变患者的有效率高达80%以上，而对野生型的几乎没有疗效，因此，检测EGFR的突变情况是肺癌化疗预后重要标志物。研究表明,不同人种肺癌的EGFR突变率差异较大，Marchetti等和Kris等通过对大量肺癌病例研究发现，高加索人（Caucasian）肺癌EGFR突变率约为8-17%。Sasaki等人的研究显示日本人肺癌EGFR基因突变率为36.8%。Yang等人_ENREF_2通过对251例肺癌患者发现，我国汉族人的肺癌EGFR突变率为53.8%。Jia和Wu等的研究进一步表明，我国汉族肺癌EGFR突变率约为30-50%。本研究首次对哈萨克族肺癌EGFR突变进行检测,检测结果表明哈萨克族EGFR突变率为16.7%,其突变率显著低于我国汉族肺癌EGFR突变率，略高于高加索人EGFR突变率。本研究对哈萨克族肺癌EGFR突变检测为临床医生提供了重要参考信息，有益于其肺癌的个体化治疗[4]。

从地域分布来看，汉族人与日本人居源于东亚大陆，高加索人居源于欧洲大陆，哈萨克族人居于欧洲大陆和东亚大陆之间。居源于东亚大陆人肺癌EGFR突变率较高，居源于欧洲大陆的人肺癌EGFR突变率较低，哈萨克族人所居区域突变率介于两者之间,肺癌EGFR突变率从欧洲大陆到东亚大陆表现出突变率逐渐增大的趋势。

肺癌EGFR基因19外显子缺失突变是吉非替尼类药物作用的关键靶点，其缺失突变可引起酪氨酸激酶结构域中4个氨基酸残基的缺失，从而导致EGFR-ATP受体结合域的角度改变，使吉非替尼类药物更易结合到该位点，通过阻止ATP进入而阻断EGFR激酶活性。本研究检测了54例哈萨克族和70例汉族肺癌EGFR基因，发现EGFR总突变率为33.1%，哈萨克族的突变率为16.7%，其中外显子19缺失突变的突变率最高,占突变比例的55.6%。在汉族中EGFR突变率为45.7%，其中外显子19的缺失突变的突变率有12例，占突变比例的37.5%，哈萨克族EGFR基因外显子19缺失突变的突变率略高于汉族的外显子19缺失突变的突变率，Fisher检验分析表明哈萨克族肺癌EGFR基因外显子19突变率与汉族外显子19突变率差异无显著性（p=0.546）[5]。

综上所述，本研究表明哈萨克族肺癌患者EGFR基因突变率显著低于我国汉族EGFR基因突变率。EGFR基因突变与EGFR-TKIs药物治疗敏感性显著相关，基于EGFR的突变情况来选择EGFR-TKIs的药物进行化疗已成为临床医生的共识，本研究首次提供哈萨克族肺癌的EGFR突变率信息，可以为临床医生提供有益参考，使广大肺癌患者受益。

图1哈萨克族与汉族肺癌EGFR基因突变比较

参考文献

[1]JemalA,SiegelR,WardE,etal.Cancerstatistics,2008.CACancerJClin.2008;58(2):71-96.

[2]中华人民共和国卫生部.2010年中国卫生统计年鉴.2010;9:4-1.

[3]SchillerJH,HarringtonD,BelaniCP,etal.Comparisonoffourchemotherapyregimensforadvancednon-small-celllungcancer.NEnglJMed.102002;346(2):92-98.

[4]JorissenRN,WalkerF,PouliotN,GarrettTP,WardCW,BurgessAW.Epidermalgrowthfactorreceptor:mechanismsofactivationandsignalling.ExpCellRes.102003;284(1):31-53.

[5]ChoongNW,DietrichS,SeiwertTY,etal.Gefitinibresponseoferlotinib-refractorylungcancerinvolvingmeninges--roleofEGFRmutation.NatClinPractOncol.2006;3(1):50-57;quiz51pfollowing57.