血清肌钙蛋白检验

血清肌钙蛋白检验

马栋杜习翔赵洁

马栋杜习翔赵洁(河南省新乡医学院第一附属医院453000)

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)2-0106-02

【摘要】肌钙蛋白是肌肉收缩的调节蛋白，由3个结构不同的亚基组成，即肌钙蛋白T(TnT)、肌钙蛋白I(TnI)和肌钙蛋白C(TnC)，它附在收缩的横纹肌细微组织上，TnI是一种结构蛋白，它与肌动蛋白及原肌球蛋白互相作用。TnI与肌动球蛋白在静止状态时相结合，抑制肌动球蛋白的ATP酶(ATPase)活性。TnC有4个能结合钙离子的结合点，当它与细胞内的钙离子结合时，能导致整个肌钙蛋白构造上的变化。肌钙蛋白放松了肌动球蛋白，让肌动球蛋白与肌浆球蛋白互起作用，而造成肌肉收缩。肌钙蛋白具有的3种同分异构体，其中两种同分异构体是骨骼肌所特有的，一种同分异构体是心肌所特有的，这三种肌钙蛋白的同分异构体存在着结构上的差异。心肌中的T和I亚基结构不同于其他肌肉组织，心肌钙蛋白T、I(CTNI、CTNI)由于分子量小，分别为37000和24000，所以发病后血中浓度迅速升高。

【关键词】肌钙蛋白检测

应用免疫层析与酶免技术可进行快速检测与定量测定，具有快速、灵敏、特异的特点。但对于单个标本检查有不便之处。胶乳增强透射比浊法，目前已有试剂盒供应，可在各型自动生化分析仪上使用，通用性强，已在临床上使用，不同型号的生化分析仪应严格按照说明书设定参数和进行操作。

(一)心肌钙蛋白T、I的快速检测

1.原理应用免疫层析方法测定样品中的特异抗原(CTnl,CTnI)。测试时滴加血清样品于样品槽，样品通过毛细管效应沿试纸膜运动，如果样品中含有特异抗原，试验部位就出现色带，在对照区域内应该有另一颜色条带作为实验对照。

2.试剂

(1)CTnT免疫层析试纸条。

(2)CTnI免疫层析试纸条。

3.操作

(1)将包装纸打开，标记上样品编号。

(2)加5～6滴血清样品到样品槽中。

(3)在10～15分钟内观察色带出现情况。

4.结果判断

(1)阳性：在试验区和对照区均有色带出现。

(2)阴性：仅在对照区有色带出现。

(3)无效：试验区和对照区都没有色带出现。

(二)心肌钙蛋白T的ELISA法测定

1.原理生物素与亲和素作用下的双抗体夹心ELISA，用链霉亲和素-生物素化的抗TnT单克隆抗体作包被物，依次于样品中TnT抗原和酶标TnT单克隆的抗体反应，然后加入底物色原。酶催化底物显色，由系列TnT标准制定的校正曲线，定量测定CTnT含量。

2.试剂

(1)生物素亲和素CTnT单克隆抗体包被板。

(2)孵育缓冲液。

(3)浓缩洗涤液。

(4)酶标结合物。

(5)CTnT标准品。

(6)底物色原：ABTS(二氨2.2叠氮)。

3.操作

(1)在包被板中分别加入标准血清、对照血清和患者标本于相应的孔内各50μl。

(2)每孔各加孵育缓冲液50μl，并轻轻混匀。

(3)室温下孵育60分钟后洗涤3次，10分钟内完成。在吸水纸上用力拍打微孔。以除去残留水滴。

(4)每孔各加入酶结合物100μl，轻轻混匀。

(5)倒空微孔板中的孵育液，用洗涤液将微孔洗3次，在吸光纸上用力拍打微孔，以除去残留水滴。

(6)将200μl色原底物溶液加入相应的孔中，避光直射，轻轻混匀，静置30分钟。

(7)用酶标仪在10分钟内，于405nm和630nm双波长下测定吸光度值(OD值)。

(三)心肌钙蛋白I的ELISA法测定

1.原理双抗体夹心ELISA法。先将抗CTnI单抗包被于微孔板上，加入标准品、患者血清和孵育缓冲液，如果血清中有CTnI，则将与孔中的抗体结合，然后将孔中剩余的样品洗去，加入辣根过氧化物酶标记的CTnI抗体，让酶联抗体与孔中的CTnI结合。这样，CTnl分子就被固相抗体和酶联抗体夹在中间。孵育和洗涤之后，酶反应显色，吸光度OD值与血清CTnI浓度成正比。

2.试剂

(1)抗CTnI抗体包被板。

(2)孵育缓冲液。

(3)浓缩洗液。

(4)抗体和酶结合物。

(5)CTnI标准品。

(6)显色剂A、显色剂B。

(7)2NHCl终止剂。

3.操作

(1)将50μl标准品、对照血清和患者标本加入相应孔内。

(2)将50μl孵育液加入相应的孔中，轻轻混合30秒，此步混匀是关键。

(3)将微孔板放在室温孵育30分钟。

(4)倒空微孔中的孵育混合液，用洗液将微孔洗5次，在吸抽纸上用力拍打，以除去残留水滴。

(5)将100μl酶结合物加入相应的孔中，轻摇混匀。

(6)将微孔板放在室温孵育30分钟。

(7)倒空微孔中的孵育液，用洗液将微孔洗5次，在吸水纸上用力拍打微孔，以除去残留水滴。

(8)将20μlTMB底物溶液加入相应的孔中，轻轻混合5秒，在室温避光条件下静置20分钟。

(9)每孔加入50μl2mol／LNHCl，终止反应，轻轻混合5～30秒以保证蓝色转变成黄色。

(10)用酶标仪在10分钟内，于450nm波长下测定吸光度OD值。

参考文献

[1]钱学贤，主编.现代心血管病学[M].北京：人民军医出版社，1999.

[2]张丽，王士雯，赵玉生.心肌肌钙蛋白Ⅰ在心血管疾病中的应用，中华心血管病杂志，1997，25：390.

[3]杜宇虹,宁敏,杨华芝.肌钙蛋白Ⅰ在急性心肌损伤临床诊断中的应用[J];中国临床保健杂志;2005年03期.