亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性、同型半胱氨酸与妊娠高血压综合征的相关性

亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性、同型半胱氨酸与妊娠高血压综合征的相关性

甄广怀李磊邦甄美婵梅秀云周玉萍

甄广怀李磊邦甄美婵梅秀云周玉萍

（广东省台山市人民医院广东台山529200）

【摘要】目的：探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因677C/T多态性及血清同型半胱氨酸(HCY)浓度水平与妊娠高血压综合征(妊高征)的关系。方法：采用免疫荧光技术对37例妊高征患者(妊高征组)及40例正常孕妇(对照组)进行MTHFR基因677C/T等位基因检测,并同时用生化酶法测量两组孕妇血清中的同型半胱氨酸（HCY)浓度。结果：妊高征组677TT突变型频率24％明显高于正常组10％（P＜0.05），妊高征组677T等位基因频率47％也明显高于正常组的28％（P＜0.05）；同时，妊高征组同型半胱氨酸（HCY)水平为14.1±2.3μmol/L,明显高于对照组的8.3±1.6μmol/L(P<0.01)。结论：MTHFR基因677C/T多态是妊高征发病的遗传危险因素之一,它可以导致孕妇血液中同型半胱氨(HCY)水平升高而引发妊高征。应普及推广MTHFR基因677C/T多态性及HCY在孕前、孕期的检测，确保孕妇和胎儿的安全。

【关键词】亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因；多态性；同型半胱氨酸(HCY)；妊娠高血压综合征(妊高征)

【中图分类号】R714.246【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2018）20-0125-02

妊娠高血压综合征（简称妊高征），是孕妇妊娠期常见的高发病，主要出现在妊娠20周到产后两周，发病率大约占孕妇总数的5%，该病严重威胁母婴健康，是导致孕产妇和围生儿病率和死亡的常见疾病之一。妊娠高血压发生的原因很多，具体还不是太明确。但最近研究发现，亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因677C/T多态性与妊高征发病关系密切[1]，而高同型半胱氨酸（HCY）血症可导致血管内皮细胞损伤并可能是妊高征的发病原因之一[2-3]。为此，本研究旨在探讨亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性、同型半胱氨酸与妊娠高血压综合征的相关性，为进一步寻找妊高征的病因及防治提供依据，从而利于优生优育。

1.资料与方法

1.1研究对象

选择2016年6月至2017年12月期间在本院登记进行产前检查的妊娠高血压综合症孕妇37例作为妊高征组，年龄24～44岁，平均19.0±4岁，孕周21～39周，平均16±2周，诊断标准参见乐杰主编的《妇产科学》第7版。另对照组40例，均为随机选取的与妊高征组同期的正常健康孕妇，平均年龄26±3岁，孕周24±2周。

1.2方法

1.2.1亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因677C/T检测：（1）DNA提取：抽取孕妇外周静脉血2～3mlEDTA-K2抗凝全血，按DNA提取试剂盒（TIANGEN公司）说明书要求操作。采用可以特异性结合DNA离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取血液中的基因组DNA。（2）MTHFR基因PCR扩增，使用达安基因公司DA7600Ⅱ型荧光分析仪，试剂盒由江西诺德医疗器械有限公司提供。按操作程序进行，将配置好的反应管放入仪器通道内，仪器运行加热程序如下：步骤一，95℃10分钟，激活荧光基团；步骤二，95℃15秒，使样本变性；步骤三，60℃40秒，使荧光基团与样本充分结合；重复二、三步骤四十次；步骤四，室温冷却1分钟，完成反应。信号收集：60℃收集FAM和VIC信号。不同的荧光基因与相对应位置的氨基酸特异结合后，会发出不同颜色的荧光信号，通过检测反应最终的荧光信号曲线，确定检测样本中亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因对应位置的氨基酸情况，反映MTHFR基因的活性。

1.2.2血清同型半胱氨酸（HCY）测定：抽取研究对象空腹静脉全血3ml，放入干燥试管内送检。标本于室温下离心10分钟，分离血清后上机测定HCY浓度。检测试剂盒为北京九强公司的双液体试剂，利用酶法进行测定，配套校准品和质控品；检测仪器为西门子ADVIA2400全自动生化分析仪。按相应说明书设置参数和操作，质控在控之下测定标本。

1.3统计学处理

用SPSS13.0统计软件进行统计分析，计量资料采用均数±标准差表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1MTHFR基因677C/T分布情况：

妊高征组中，MTHFR基因677位点三种基因型分布如下：CC野生型11例，占比30%，CT杂合型17例，占比46%，TT突变型9例，占比24%。而在对照组中，上述三种基因型分别为22例、14例、4例，占比分别为55%、35%和10%。妊高征组的TT突变基因型频率24%明显高于正常组的10%（P＜0.05）；同时，妊高征组T等位基因频率47%也明显高于正常组的28%（P＜0.05），结果见表1。

3.讨论

3.1MTHFR基因与妊高征

亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）是叶酸及同型半胱氨酸代谢过程中的关键酶。其主要作用是催化5，10，-亚甲基四氢叶酸形成5-甲基四氢叶酸，5-甲基四氢叶酸为HCY转化为蛋氨酸提供受体。蛋氨酸是体内各种代谢中甲基反应的直接供体-S-腺苷蛋氨酸（SAM）的前体，SAM经脱腺苷生成HCY，HCY可通过N-5-甲基四氢叶酸转甲基酶及其辅酶维生素B12的催化作用，重新生成蛋氨酸，此过程又是已知体内能利用N-5-甲基四氢叶酸的唯一反应。MTHFR基因位于染色体的1P36.3[4]，具有多态性，特别是当677位C→T突变后，此位点的氨基酸由丙氨酸转化为缬氨酸，导致MTHFR酶活性下降，5-甲基四氢叶酸生成不足，血浆HCY浓度增高，是妊娠高血压综合征、习惯性流产、胎盘血管疾病等妊娠相关疾病的高危因素[5]。

本研究表明，妊高征组TT突变基因型频率及等位基因T的频率均明显高于对照组，提示MTHFR基因677C/T多态性可能是妊高征发病的一个独立危险遗传因素，并作为遗传因素通过影响HCY的代谢从而引起妊高征。

3.2高HCY与妊高征

HCY是一种含硫的氨基酸，由蛋氨酸通过蛋氨酸循环脱甲基作用产生。HCY浓度水平升高与遗传和营养因素有关，遗传因素包括胱硫醚β合成酶缺乏和MTHFR酶活性降低。研究表明[6]，MTHFR基因677C/T多态性可致MTHFR酶活性降低，从而影响HCY代谢，导致血中HCY浓度升高。饮食原因主要是叶酸和维生素B12缺乏，两者是HCY代谢的主要辅助因子。所以HCY代谢过程中任何关键酶或辅助因子的缺乏，均可导致HCY的代谢障碍，从而引起高HCY血症。

本研究结果表明，妊高征组血清HCY浓度平均值显著高于对照组。目前认为[7]，内皮细胞损伤是妊高征发生病理变化的基础，而高HCY可导致血管内皮损伤，是多因素综合作用的结果，其主要机理包括HCY可在金属离子介导下自身氧化生成过氧化物及氧自由基，损伤内皮细胞的结构和功能[8]，血管内皮细胞损伤后，可使内皮素Ⅰ分泌增加，血管内皮衍生松驰因子及前列环素分泌减少，导致患者血管舒缩因子平衡紊乱，从而引发妊高征。

3.3MTHFR基因多态性、高HCY与妊高征相关性分析

综上所述，在MTHFR基因多态性、高HCY及妊高征三者中，MTHFR基因677C/T多态性导致MTHFR酶活性下降，影响了HCY的正常代谢，HCY代谢障碍导致高HCY血症，而高HCY血症是引起血管内皮细胞损伤的重要原因，从而容易诱发妊高征。可见，高HCY是三者中的中心和关键环节，当血液中HCY浓度升高，可以造成人体血管堵塞，甚至血压增高[9]。本研究显示，携带MTHFR基因TT突变基因型的孕妇容易导致高HCY血症发生，进而易引起妊高征，而妊高征组的HCY平均水平也明显高于对照组，所有研究对象中，TT突变基因型均明显高于对照组。具体到每个基因组，虽然妊高征组均高于对照组，但差别无显著性（P＞0.05），可能和观察例数偏少及分布有关，同时也说明，MTHFR基因多态性对高HCY水平的影响较大和直接，而高HCY水平只是引起妊高征的其中一个原因。另外，HCY代谢过程中存在着基因与营养因素的相互作用，孕妇在妊娠前后大都已服用叶酸，增加叶酸补充在一定程序上弥补MTHFR基因多态性所引起的影响[10]，有利于降低HCY浓度，从而对本研究的结论造成一定的影响。

总之，本研究表明，MTHFR基因677C/T多态性及高HCY与妊高征存在着相互关系。从优生优育的角度出发，应普及推广MTHFR基因677C/T多态性及HCY在孕前、孕期的检测，根据检测结果个体化叶酸的补充，确保孕妇和胎儿的安全。

【参考文献】

[1]李克深，孙延芝，等.妊娠高血压综合征患者亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与血浆中同型半胱氨酸水平测定[J].中华妇产科杂志,2000,35（4）:205-207

[2]林其德.妊高征病因学研究的进展[J].中华妇产科杂志,1997,32:3-4

[3]McCullyKS.Homocysteineandvasculardisease.NatMed,1996,2:386-389

[4]GoyetteP,SummerJS,MilosR,etal.Humanmethylenetetrahydrofolatereductase:isolationofcDNA,mappingandmutationidentification.NatGenet,1994,7:195-200.

[5]FrosstP,BlomHJ,MilosR,etal.Acandidategeneticriskfactorforvasculardisease:acommonmutationinmethylenetetrahydrofolatereductase.NatGenet,1995,10(1):111-3.

[6]黄泳华，罗中明，等.同型半胱氨酸、叶酸、维生素B12与妊娠高血压综合征发病的关系.中华妇产科杂志，2002，37（4）:208-210.

[7]黄华,梁红梅，等.孕妇血清同型半胱氨酸、叶酸、维生素B12水平与妊娠高血压综合征关系探讨.国际检验医学杂志,2014,35(21):2869-2871

[8]王玉芳.同型半胱氨酸致动脉粥样硬化的机制.中国动脉硬化杂志,1998,6:259-263.

[9]林小慧,刘开祥,曾爱源,等.高血压患者血浆同型半胱氨酸水平及亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性的研究[J].实用心脑肺血管病杂志，2012，20（5）:777-779.

[10]韩红敬，沈浣，等.亚甲基四氢叶酸还原酶基因677位多态性、高同型半胱氨酸血症与复发性流产.生殖与避孕，2012，32（7）：486-489

江门市科技计划项目：项目编号：江科[2016]105号-7.