前列腺素DP受体基因C-549T多态性对哮喘患者血IL-4的影响

前列腺素DP受体基因C-549T多态性对哮喘患者血IL-4的影响

余忠技1孙坚2

余忠技1孙坚2(1上饶市人民医院呼吸科334000；2南昌大学第四附属医院330003）

【中图分类号】R562.2+5【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）49-0169-02

【摘要】目的了解哮喘人群中前列腺素DP受体基因（PTGDR）-549位点单核苷酸多态性对血清中IL-4的影响。方法将60例哮喘患者按照2003年中华医学会呼吸分会制定的《支气管哮喘防治指南》标准分为轻中度哮喘组和重度哮喘组，采用聚合酶链反应-限制性片段多态性分析和琼脂凝胶电泳的方法检测哮喘组前列腺素DP受体基因-549位点基因型，然后采用酶脸免疫吸附法（ELISA）测定哮喘不同基因型之间有无显著差异。结果哮喘人群前列腺素DP受体基因-549位点存在三种基因型分别为CC,CT和TT型；不同基因型的血清IL-4蛋白浓度之间的差异不存在统计学意义。结论PTGDR启动子C-549T单核苷酸多态性对血清中的IL-4无关联。

【关键词】哮喘前列腺素DP受体基因单核苷酸多态性酶联免疫吸附法白介素-4

TheinfluenceoftheprostaglandinDPgeneC-549TtoserumIL-4ofasthma

Yuzhongji1Sunjian2

（1.depaturementofrespiratorymedicine,shangraopeople'shospital，shangrao334000,2depaturementofrespiratorymedicine,nanchanguniversityfourthaffiliatedhospital,nanchang330003)

【Abstract】objictive:Toidentifytheinfluencesoftheexpressionofasthmaphenotypes.Methods:firstlywesubpideasthmaticteamintotwoteams.oneisseverteam,theotherismildormorderateteam.Secondly,detectedtheserumproteinlevelsofIL-4bythesandwichenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)method.Result:therearethreegenotypes(CCCTTT)intheregionofPTGDR-549inasthmaticpatients.Buttherewasnosignificantdifferenceingenotypesorallelesbetweensevereandmildasthma.Conclusion:thephenotypeofasthmasuchseverity,thelevelofserumproteinIL-4probablywerenotassociatedwiththesinglenucleotidepolymorphism(SNP).

【Keywords】AsthmaPTGDRSNPELISAIL-4

近年来很多学者认为哮喘患者体内出现明显的Th1/Th2细胞表达失衡，表现为Th2细胞显著增多，Th1细胞不变甚至减少。IL-4在Th细胞分化的过程中发挥着至关重要的调节作用[1-5]。前列腺素DP受体基因是哮喘的易感基因[6]，因此，本研究通过检测不同严重程度的哮喘患者血清IL-4蛋白水平，探讨PTGDRC-549T对哮喘患者血清IL-4的影响。

一．研究对象

哮喘组约60例，全部病例符合1997年制定的《支气管哮喘防治指南》标准：分为轻型和中重型两组。

对照组约30例，选择病例均为健康体检者，所有病例均排除任何肺，心，肝，肾疾病，无慢性鼻窦炎，过敏性鼻炎，皮疹，湿疹等过敏性疾病及其他自身免疫性疾病等。以上病例均为无血缘关系的江西汉族人。病人采血前未全身用药或全身用药已停药4周以上。

二.实验方法

1标本收集与处理

每名研究对象采外周静脉3-5ml，加入装有含100µl乙二胺四乙酸（ethlenediaminetraaceticacid,EDTA）的试管中，离心取上清液放入另一试管然后将两个试管置于-70ºC冰箱保存，以备试验用。

2检测DP受体基因启动子附近位点的SNP

(1)全血提取DNA；

(2)PCR扩增目的片段；

(3)限制性内切酶消化、电泳、紫外线灯下观察;

(4)统计学分析。

3利用免疫酶联反应（ELISA）方法检测血中IL-4含量。译康酶标仪，试剂盒为人IL-4试剂盒（炬英生物）

统计分析所有数据都用SPSS10.0统计软件包处理χ2检验分析不哮喘组和对照组中不同基因型中的IL-4含量是否存在统计学差异。双侧P<0.05为有统计学意义。

三.结果

研究对象的-549位点三种不同基因型的血清IL-4之间不存在显著差异P>0.05，见表1

表1哮喘患者PTGDR启动子C-549T不同基因型中IL-4的比较

基因型例数血清IL-4浓度（pg/ml）

CC212.16=1.087

CT294.328=7.747

TT106.239=9.551

四.讨论

哮喘的病因还不十分清楚，多数学者认为哮喘是遗传因素与环境因素交互作用的结果。个体间遗传基因变异在决定个体的易感性和治疗上具有重要的作用。因此对哮喘易感基因的研究是遗传学研究的一个热点。哮喘遗传学协作研究组根据遗传学所鉴定的染色体区可能含有的哮喘易感基因大致分为三类：（1）决定变态反应性疾病易感的HLA-Ⅱ类分子基因遗传多态性；（2）T细胞受体高度多样性与特异性IgE；（3）决定IgE调节及哮喘特征性气道炎症发生发展的细胞因子基因及药物基因[7]。前列腺素DP受体基因是哮喘的易感基因且属于第三类易感基因。Tsuyoshi等通过细胞转染等技术发现前列腺素DP受体基因启动子附近T-549C的改变并不是直接改变基因所编码的氨基酸而是通过影响转录因子与其结合改变受体的表达，-549位点主要是与GATA转录因子家族中的GATA-3结合[6]。GATA-3是调节T细胞向Th2转化的主要转录因子，在细胞因子水平IL-4是分化T细胞和肥大细胞分泌的一种调节Th细胞分化的关键性细胞因子[1-5]；本研究观察哮喘人群中DP受体基因-549位点上不同基因型对Hh2细胞炎症因子IL-4的影响；但实验结果未发现各基因型之间的IL-4存在统计学意义，这提示：前列腺素DP受体T-549C对血清中IL-4蛋白水平可能影响不明显。当然哮喘是一个复杂性状的，多基因遗传倾向的疾病，而前列腺素DP受体-549位点单核苷酸多态性只是众多影响哮喘易感性的其中一个因素。另外患者的发病及疾病的演变还受到环境的影响。

参考文献

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[2]何维.医学免疫学.北京：人民卫生出版社，2005:104.

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[4]卢巍.白介素-4与支气管哮喘.国外医学呼吸系统分册，2001；21:125-126.

[5]邓群益.Th1/Th2分化的转录调节.国外医学免疫学分册，2003；25:247-250.

[6]TsuyoshiO,LyelJP,FsraB,etal.RoleofprostanoidDPreceptorvariantinsusceptibilitytoasthma[J]NEngJMed,2004;351:1752-1763.

[7]朱元珏，陈文彬.呼吸病学.北京：人民卫生出版社，2003:854.