影响计算机辅助精液分析结果的因素探讨

影响计算机辅助精液分析结果的因素探讨

张惠芬撖永刚王玲华

张惠芬撖永刚王玲华(宁夏石嘴山市第二人民医院检验科753000)

【关键词】精液分析男科疾病计算机辅助系统实验室依据

【中图分类号】R697【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）32-169-02

精液分析是评价男性生殖能力的一项重要临床检验项目。也是为男科疾病诊断治疗及疗效观察提供实验依据。20世纪80年代发展起来的计算机辅助精液分析系统将现代化的计算技术和先进的图像处理技术应用于精子质量的临床检验，通过对精子动静态图像中精子特性的全面分析，为临床提供有关精子质量各项指标的准确数据[1]。

随着计算机辅助精液分析的不断发展，精液的常规分析逐渐被计算机辅助系统取代的趋势[2]。但是由于实验室环境，样本制备，检验人员的工作态度，理论和操作水平，实验室所用显微镜光学系统，系统分析软件，系统参数设置的不同，造成精液分析报告可比性和通用性较差，因此探讨CASA结果的影响因素及改进方法，对提高本实验室精液分析报告参数的临床应用价值，建立本实验室标准操作程序，质量控制和评价体系均有重要意义。

目前就本实验室而言，造成CASA报告结果差异主要有三方面因素：待检标本，检验人员及仪器试剂；加强这三面因素以及细到各环节的监控是提高精液分析结果准确性的最有效的途径。

1.标本因素

泛指分析前影响标本质量的所有因素；包括患者准备，精液采集与送检，标本确认等，而这些往往是送检人员最难以控制的环节，需要加强对医护人员相关知识的宣传培训，建立送检标本的验收程序，对质量不符合要求的标本应有退回或拒收的标准操作程序[3]。

标本采集前应禁欲至少48h，但不超过7d，否则会影响精子密度.活动及形态等。男性精液分析结果会有相当大的波动性和变异性，初检者应检查2次或2次以上，2次间隔应大于7d，但不超过3周，禁欲的天数应尽可能恒定。标本采集以手淫法为宜，精液收集容器为无毒性的广口玻璃或塑料容器。采集地点最好在实验室附近的采精室内单独完成，室温应保持20-40℃，将完整标本1h内送检。如果未收集到射出的全部精液,特别是丢失了射精过程中第一部分精液的标本，以及标本运送时间过长（超过2h）的标本，均不能进行精液分析。一份精液标本，从患者到实验室的环节众多，影响因素繁杂，须谨慎对待每一步骤，将对实验结果造成影响的因素降到最低，以获取最接近真值的实验结果，为临床诊疗提供可靠的实验室依据[4]。

2.检验人员因素与检测过程

检验人员是具体检验过程的操作者，必须具有扎实的理论基础和实际操作经验，要有规范的操作行为，具备专业的责任意识和质量意识。

检验人员在接收标本时，要询问标本的采集情况，将接收标本马上放入37℃水浴箱孵育，并记录准确时间，输入报告时要准确核对病人信确保无误。

在观察标本及标本检测前，应特别注意精液不液化和黏度高的区别。前者为黏度增高的黏液状匀质流体，无明显聚集物镜下精子运动较缓但分布均匀。后者呈上稀下浓的不均匀胶体，伴较明显的聚集物，轻轻振摇，上述现象无明显消失，镜下精子运动缓慢，分布不均匀，活动精子的运动可牵动周围不动的精子，检测中尤其注意。精子密度尤其是高密度对CASA结果准确性的影响较明显，CASA直接测定高密度精液结果除受到精子碰撞和非精子成分的影响，还与精子密度，CASA应变和阈值设置密切相关，有人[5]采用CASA和RSA对3种不同密度的精液标本进行检测后发现精子密度在（20-100）×106/ml时，用CASA系统对精液进行检测能够获得准确结果，而当精子密度>200×106/ml时，稀释后再检测也能获得理想的结果。吴志平等[6]对门诊19例高密度精子标本采用CASA直接分析，精浆稀释后进行CASA测定以及手工计数法分析精液密度，并与伊红染色法进行比较发现，对高精子密度标本（>50×106/ml）用精浆稀释后进行CASA测定，其结果更能反映精子的质量。用移液器或加样枪吸取标本前应充分混匀精液使精子分布均匀，一般取样量5.0微升，滴于干燥清洁的计数板上，要保证加样量的准确也要避免产生气泡，检测室温保证在20-24室温下进行，由于温度会影响精子活动，所以我实验室在没有温镜台的条件下，因地处西北地区，冬季温度较低，故要求每次测量前先打开底灯将计数板放置镜台烘烤至少15min,使计数板温度不致过低，另外精液分析操作应熟练，尽量缩短检查时间，因为精子在计数板中的活力会随时间延长而下降[7]精子密度也会影响CASA结果的准确性，故如果静态图上精子计数小于20个应取几个视野计数，而精子数如果大于50个则应稀释以增加准确度，一般检测精子数至少200个，最好追踪检测400个左右。我实验室一般采用生理盐水作为稀释液。在计数视野选择上，应选择计数池中央部分，而靠近计数池边缘部分精子密度会偏高，而比较好的视野应是精子分布均匀且圆细胞较少的视野，计数时要将阀值调整到可将精子全部采集，而不采集卵磷脂小体、白细胞等非精子微小颗粒的状态。阀值过低，小细胞数计数偏高，精液结果假阳性会增高；而阀值过高，又会影响正常精子计数不上，造成精液计数结果偏低，会出现假阴性。所以我实验室将阀值设定上，专门安排经验丰富技师对科室其它工作人员进行培训，并将阀值设定标准化，定为90-120的范围内，可根据具体标本情况做细微调整。对“无精症”的报告应格外慎重，如收到标本后遇比较稀薄的标本，要待精液完全液化后充分混匀再进行分析。世界卫生组织提出所有显微镜检查未见精子的标本都应离心确定在沉渣中有无精子建议使用RCF>3000×g离心15min，只有当所有沉渣重新悬浮，经彻底和系统检查发现无精子后才能做出无精子的判断[7]。

3．仪器试剂因素

在CASA系统中仪器性能状态也是非常重要的影响因素，我科对仪器工作状态及定期的维护设有专门记录。仪器试剂因素中还有加样枪加样量的准确性，计数板是否清洁、有无杂质，水浴箱是否保持在37，显微镜及计算机分析系统必须调试至正常使用状态。另外可定期用同一患者标本进行重复测定，以观察精密度。

结语

计算机CASA系统在实际工作中具有无可比拟的优势，操作方便快捷，易学易懂，报告单中的参数更全面、细致、客观，但各种因素对结果准确性的影响不容忽视，要求检验工作者避免并控制这些因素的影响，使发出的精液报告尽可能客观准确地为临床提供可靠依据。

参考文献

[1]黄宇烽，许瑞吉.男科诊断学[M].上海:第二军医大学出版社，1999：122-125.

[2]龚平，周治兰，王昌富.计算机辅助精液分析的临床应用[J].中国误诊学杂志，2004,4(5);759-760.

[3]叶应妩，王毓，申子瑜.全国临床检验规程[M].3版.南京:东南大学出版社，2006;46.

[4]戈一峰，汪春晖，陆金春等.精液分析前质量控制的初步研究[J].中华男科学杂志，2008,14(11):1015-1016.

[5]魏小斌，白志明，李春芸.计算机辅助与常规精液分析的精子密度检测结果比较[J].中国热带医学，2006,6(3):555.

[6]吴志平，吴祥林.高精子密度精液标本质量分析方法探讨[J].临床输血与检验，2006,8(4):288-290.

[7]世界卫生组织，人类精液及精子-宫颈黏液相互作用实验室检验手册[M].4版.北京：人民卫生出版社，2001:3-7.