KISS1/hot7T175、KAI1/CD82基因在鼻咽癌中的表达及意义

KISS1/hot7T175、KAI1/CD82基因在鼻咽癌中的表达及意义

周峰

安徽省立医院安徽合肥230000

【摘要】目的：鼻咽癌是常见的头颈部肿瘤，早期可发生淋巴结转移。放射治疗是鼻咽癌的首选治疗方法。随着放疗设备的不断更新和技术水平的不断进步，鼻咽癌总的5年生存率可达到60%～70%。鼻咽癌治疗失败的主要原因是局部复发和远处转移。肿瘤转移是恶性肿瘤的标志和特征，肿瘤转移抑制基因逐渐成为研究热点。KISS1/hot7T175、KAI1/CD82、为近年来陆续发现的肿瘤转移抑制基因，本实验主要研究这2种基因在鼻咽癌组织中的表达情况，分析其与鼻咽癌淋巴结转移及远处转移的关系，并探讨这些基因在鼻咽癌转移中的可能作用。方法：采用免疫组化S-P法检测100例鼻咽癌组织中KISS1/hot7T175、KAI1/CD82、蛋白的表达情况，分析其与鼻咽癌淋巴结转移及远处转移的关系。结果：1.鼻咽癌的淋巴结转移与KISS1/hot7T175、KAI1/CD82、蛋白表达呈负相关性（P=0.006；P=0.035；P<0.05，具有统计学意义）；2.鼻咽癌的远处转移与KISS1蛋白的表达呈负相关性（P=0.014；P<0.05，具有统计学意义）；与KAI1/CD82蛋白表达无关（P>0.05，无统计学意义）结论：1）KISS1/hot7T175蛋白在发生淋巴结转移及远处转移的鼻咽癌组织中均表达缺失，该基因可能抑制鼻咽癌的淋巴结转移及远处转移。2）KAI1/CD82蛋白在发生淋巴结转移的鼻咽癌组织中均表达缺失，这两种基因可能抑制鼻咽癌的淋巴结转移。

【关键词】鼻咽癌；转移抑制基因；免疫组织化学法

鼻咽癌（Nasopharyngealcaicinoma，NPC）是一种多基因遗传性肿瘤，在中国南方发病率极高，有着明显的地区聚集性、种族易感性及家簇遗传性。其组织发生源于鼻咽粘膜被覆上皮和陷窝柱状上皮，其病理发生机制与环境和遗传因素的相互作用密切相关。鼻咽癌治疗失败的主要原因为局部复发和远处转移，而远处转移约占治疗失败原因的35%--46%。肿瘤转移是一种涉及肿瘤和宿主细胞之间复杂的相互作用的多步骤过程，经历细胞骨架变化、粘附特性改变、蛋白酶水解表达增加及运动能力增强等一系列步骤【1】。肿瘤转移前的微环境、降解机制与脉管系统以及肿瘤细胞运动均对肿瘤转移有着深刻的影响。此外，肿瘤的转移受到多种基因/蛋白质的调控。KISS1/hot7T175、KAI1/CD82、为近年来陆续分离出的肿瘤转移抑制基因。

本实验主要通过免疫组化S-P法，检测鼻咽癌组织的KISS1/hot7T175、KAI1/CD82基因的蛋白表达情况。通过统计学分析，探讨KISS1/hot7T175、KAI1/CD82基因在鼻咽癌组织中的异常表达与各项临床病理因素及预后之间的关系，为这些基因在鼻咽癌中的应用提供实验背景及可靠依据。这对预测鼻咽癌转移、判断预后、甚至个体靶向治疗都有着积极的意义。

1.试验方法：

免疫组化标本来源：收集2013年1月1日至2015年12月30日安徽省立医院病理科鼻咽癌存档蜡块100例（临床资料完整，活检前均未行放、化疗）。

主要试剂：SantaCruz生物公司（兔抗人KISS1多克隆抗体、鼠抗人CD82单克隆抗体）ABcam生物公司（兔抗人BRMS1单克隆抗体、兔抗人TIP30多克隆抗体、兔抗人Maspin多克隆抗体、兔抗人MEK4（MKK4单克隆抗体、兔抗人MTSS1多克隆抗体）及免疫组化主要仪器

2.处理载玻片后制备标本切片

2.1对照及结果判定

对照：以PBS代替一抗作为阴性对照。

结果由2名对临床资料不详的病理科资深医生判定。判定标准：以胞浆被染成棕黄色为阳性染色。采用高倍视野随机计数500个肿瘤细胞中的阳性细胞（阳性细胞呈棕褐色细颗粒状）所占的比例，分为：

（1）阴性（-）：未见阳性表达或阳性细胞百分数≤5%；

（2）弱阳性（+）：阳性细胞百分数6%-25%；

（3）中度阳性（++）：阳性细胞百分数26%-50%；

（4）强阳性（+++）：阳性细胞百分数＞50%。

表1影响鼻咽癌淋巴结转移不同因素的Logistic回归分析结果

2.2统计分析

所有数据输入计算机，使用统计软件SPSS19.0进行处理，计数资料采用Logistic回归分析，统计检验以P＜0.05（双侧）为统计学差异具有显著性。

2.3.影响鼻咽癌远处转移不同因素的Logistic回归分析结果

鼻咽癌的远处转移与KISS1蛋白的表达呈负相关性（P<0.05，具有统计学意义）；与KAI1/CD82、蛋白表达无关（P>0.05，无统计学意义）

鼻咽部肿瘤组织KISS1蛋白表达情况

图2免疫组化SP法检测CD82蛋白在鼻咽部肿瘤组织

弱阳性（+）表达（10×40）

3.讨论：

鼻咽癌又被称为“广东瘤”。根据世界卫生组织的粗略统计，全世界约80%的鼻咽癌发生在我国。可发生于各个年龄组，但以30--60岁多见，男女性别比为2--3.8：1。鼻咽癌的发生有着明显的地区聚集性、种族易感性及家族遗传性，此外还与环境污染、EB病毒感染等密切相关。鼻咽癌治疗失败的主要原因是局部复发和远处转移。而鼻咽癌发生远处转移则与颈部淋巴结转移密切相关，随着淋巴结的增大、数目的增多，远处转移的几率明显增加。近年来，随着多种肿瘤转移抑制基因陆续被发现，其功能及作用机制也逐渐成为研究热点。

1.KISS11/hot7T175基因在鼻咽癌组织中的表达及意义

在针对人类食管癌、胃癌、胰腺癌、大肠癌等消化系统肿瘤的免疫组化检测结果显示，KISS11/hot7T175基因的低表达、缺失、甲基化或磷酸化与肿瘤的浸润、转移以及不良预后密切相关相关；在一项体外实验也发现，KISS11/hot7T175基因的表达降低、缺失、化学修饰及突变与黑素瘤的浸润、转移相关。这些研究结果均显示，KISS11/hot7T175基因在多种肿瘤的发生、发展过程中扮演抑癌基因的角色。近年来对于肾癌、前列腺癌等泌尿系统肿瘤的研究也得到类似结论【2】。

本次实验结果显示：鼻咽癌的淋巴结转移和远处转移均与KISS1/hot7T175基因的表达呈负相关性，结论具有统计学意义（P<0.05）。提示在伴有淋巴结转移和远处转移的鼻咽癌组织中KISS1基因表达缺失。本次研究结果可说明，KISS1基因在鼻咽癌中表现出抑癌基因的作用，这有助于对早期鼻咽癌进行病情评估及预后判断。

关于KISS1基因抑制肿瘤转移的机制，目前下列几种观点：1、KISS1基因通过磷酸化细胞外信号调节激酶1/2（extracellularregulatedproteinkinases1/2，ERK1/2）及P38/丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activatedproteinkinases，MAPK）来抑制肿瘤细胞的浸润和转移；2、KISS1基因通过抑制基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinases，MMPS）相关通路降解细胞外基质和基底膜来抑制肿瘤细胞的浸润和转移；3、通过G蛋白的Rho途径诱导黏附激酶和蛋白磷酸化，使表达KISS1蛋白受体的细胞产生大量黏连斑和张力纤维丝，限制细胞移动【3】；4、通过磷脂酶Ｃ（phospholipaseC，PLC）途径增高细胞内钙离子水平，从而抑制肿瘤细胞恶性增殖、诱导肿瘤细胞分化、凋亡；5、趋化因子相关通路。其中MAPK通路及MMPS通路最为明确。

2.KAI1/CD82基因在鼻咽癌组织中的表达及意义

KAI1/CD82基因与消化系统肿瘤的关系是近年来的研究热点。Tsusumi等研究证实KAI1/CD82蛋白在胃癌中表达缺失，在正常胃上皮细胞中表达丰富。GUO等经实验提出KAI1/CD82基因抑制癌细胞的转移增殖是通过抑制胰腺癌细胞的运动迁移实现的。Yu等采用酶联免疫吸附测定法及westernblot（蛋白质印迹技术）证明KAI1/CD82能够抑制细胞间黏附分子的分泌并产生上皮细胞钙黏素，并使细胞外基质表达下调，从而增加肿瘤细胞黏性，影响肝癌细胞的增殖。另有研究显示，KAI1/CD82基因可通过上调Sprouty2蛋白的表达来抑制肝细胞生长因子介导的肿瘤细胞转移。此外，KAI1/CD82蛋白可以抑制肝癌细胞合成和分泌血管内皮生长因子，抑制肿瘤的浸润和转移。以上结论均说明KAI1/CD82的表达水平在一定程度上影响肿瘤的侵袭性，这为消化系统肿瘤的抗浸润转移治疗研究提供了重要线索【4】。

本实验结果显示：鼻咽癌的淋巴结转移与KAI1/CD82基因的表达呈负相关性，结论具有统计学意义（P<0.05）；说明KAI1/CD82基因对于鼻咽癌的淋巴结有抑制作用。KAll/CD82基因主要通过增加肿瘤细胞之间及肿瘤细胞与细胞外基质之间的粘附性，降低肿瘤细胞的运动迁移的能力，从而降低癌细胞的潜在转移能力，从而达到抑制转移的目的。这一机制可以从某种程度上解释本实验结果。由于鼻咽癌组织中KAll/CD82基因的表达缺失，导致鼻咽癌细胞粘附力降低，鼻咽癌细胞更加容易脱离原发病灶出现淋巴结转移。本实验未能说明鼻咽癌远处转移与KAll/CD82基因表达具有相关性。参考文献：

[1]KedrinD，vanRheenenJ，HernandezL，CondeelisJandSegallJE.Cellmotilityandcytoskeletalregulationininvasionandmetastasis.JMammaryGlandBiolNeoplasia2007；12（2-3）：143-52.

[2]TakenawaTandSuetsuguS.TheWASP-WAVEproteinnetwork：connectingthemembranetothecytoskeleton.NatRevMolCellBiol2007；8（1）：37-84.

[3]XieF，YangH，WangS，ZhouB，TongF，YangDandZhangJ.Alogisticregressionmodelforpredictingaxillarylymphnodemetastasesinearlybreastcarcinomapatients.Sensors（Basel）2012；12（7）：9936-50.

[4]ShojiS，TangXY，SatoH，UsuiY，UchidaTandTerachiT.Metastinhaspotentialasasuitablebiomakerandnoveleffectivetherapyforcancermetastasis.OncolLeft2010Sep；1（5）：783-788.