升麻的HPLC指纹图谱研究

升麻的HPLC指纹图谱研究

王瑜

王瑜（牡丹江市食品药品检验检测中心黑龙江牡丹江157001）

【摘要】目的：HPLC法建立升麻指纹图谱。方法：采用AgilentEclipseXDB-C18色谱柱（4.6×250mm，5μm）；流动相为乙腈（A）和0.1%磷酸溶液（B）；梯度洗脱：0~20min，5%~13%A，20~60min，13%A~18%A；60~90min，18%A~28%A，90~110min，28%A~50%A，110~115min，50%A~5%A；流速：1.0ml/min；进样量：10μl；柱温：30℃；检测波长：316nm。结果：建立了升麻的HPLC指纹图谱，标定出9个共有指纹峰。结论：升麻药材的指纹图谱可用于升麻的定性鉴别，为升麻药材的质量控制提供参考依据。

【关键词】升麻；指纹图谱【中图分类号】R2【文献标号】A【文章编号】2095-9753（2016）3-0414-02

升麻为毛茛科植物大三叶升麻CimicifugaheracleifoliaKom.、兴安升麻Cimicifugadahurica(Turcz.)Maxim.或升麻CimicifugafoetidaL.的干燥根茎。[1]升麻是我国传统中药材，始载于《神农本草经》，列为上品。其味辛、微甘，微寒。归肺、脾、胃、大肠经。具有发表透疹，清热解毒，升举阳气的功效。用于风热头痛，齿痛，口疮，咽喉肿痛，麻疹不透，阳毒发斑，脱肛，子宫脱垂。[1]升麻中含有有机酸、糖苷、色原酮、甾醇等多种类型的化学成分。

[2]目前，中国药典规定对升麻的质量评价以异阿魏酸为考察指标(含异阿魏酸不得少于0.10%)，然而这种单一成分的检测结果并不足以表明药材的质量。中药指纹图谱是控制天然药物质量的有效方式之一，已日益成为国内外广泛接受的中药质量评价模式。本实验采用HPLC法建立并分析升麻的指纹图谱，为升麻药材的质量评价提供参考。

1仪器与材料1.1仪器高效液相色谱仪：Ultimate3000(Z069)，配二极管阵列检测器DAD-3000。十万分之一天平：XP105DR，万分之一天平：ME204E/02。电热恒温水浴锅：KDM型。

1.2材料乙腈为色谱纯（Fisher公司），水为娃哈哈纯净水。其他试剂均为分析纯。异阿魏酸（111698-201103）购自中国食品药品检定研究院。10批升麻样品均采自牡丹江地区（S1：太平沟林场；S2：二道林场；S3：双桥林场；S4：镜泊湖乡南湖头；S5：海林；S6：林口；S7：东宁；S8：东京城；S9：宁安；S10：绥阳），由牡丹江市食品药品检验检测中心安天海主任药师鉴定为正品。

2方法2.1色谱条件AgilentEclipseXDB-C18色谱柱（4.6×250mm，5μm）。流动相：乙腈（A）和0.1%磷酸溶液（B）；梯度洗脱：0~20min，5%~13%A，20~60min，13%A~18%A；60~90min，18%A~28%A，90~110min，28%A~50%A，110~115min，50%A~5%A；流速：1.0ml/min。进样量：10μl；柱温：30℃；检测波长：316nm。

2.2对照品溶液的制备精密称取异阿魏酸对照品适量，加甲醇制成46μg/ml的对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备分别精密称取不同采集地升麻粉末（过3号筛）1g于具塞锥形瓶中，精密加入25ml10%乙醇，称重，回流提取2.5小时，放冷，用10%乙醇补足减失的重量，0.45μm微孔滤膜过滤，续滤液即为供试品溶液。

2.4精密度试验取S3供试品溶液，在“2.1”色谱条件下连续进样6次，各主要色谱峰的相对保留时间RSD小于0.04%，相对峰面积RSD小于2.2%，表明仪器精密度良好。

2.5重复性试验取S3供试品粉末6份，按“2.3”项供试品溶液制备方法进行制备，在“2.1”色谱条件下进行HPLC检测。各主要色谱峰的相对保留时间RSD小于0.1%，相对峰面积RSD小于2.8%，说明该法重复性良好。

2.6稳定性试验取S3供试品溶液，分别在0，4，8，16.5，25h检测指纹图谱。

各主要色谱峰的相对保留时间RSD小于0.06%，相对峰面积RSD小于2.9%，表明供试品溶液在25h内稳定性良好。

3结果3.1升麻指纹图谱的建立取上述10批升麻粉末，按“2.3”项下方法分别制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定。其典型的色谱图见图5-a。在色谱图中选择归一化峰面积大于1%的色谱峰作为指纹峰，最终选择了9个共有的指纹峰，并通过与对照品的保留时间和紫外光谱进行比较，确定了峰4为异阿魏酸，图5-b是异阿魏酸对照品的色谱图。

3.2对照指纹图谱的建立及相似度评价本文采用国家食品药品监督管理局推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）”，将10个采集地的升麻色谱图导入该软件后，剪切掉前5min的溶剂峰，对10批供试品的色谱峰进行匹配并自动生成对照指纹图谱R，见图6。并对10批升麻供试品的HPLC指纹图谱进行相似度评价，结果见表2。分析结果显示7号样品的相似度为0.858，其余9批次样品的相似度均在0.943以上。10批升麻药材的指纹图谱中9个共有峰相对保留时间符合程度良好，共有峰占总峰面积的90%以上，但各个峰的相对峰面积存在一定差异，说明不同来源的升麻药材质量是有差别的；各样品的非共有峰数略有差异，说明不同来源的升麻所含有的成分略有差异，这可能与药材生长的地理位置、环境、气候、采收季节和时间等因素有关。

3.3指纹峰的特征性本文所建立的指纹图谱色谱峰分离度较好，选择了9个共有的指纹峰。其中峰4为异阿魏酸，该色谱峰分离度较好，峰面积占总指纹峰峰面积的25%左右，具有很强的代表性，所以选择作为参比峰。峰5、峰6、峰7、峰8和峰9五个峰面积的和约占总指纹峰峰面积的70%，具有很强的特征性。

4讨论目前，简单的测定一个或几个有效成分含量为主的传统的质量分析方法不能真正地反映中药材的质量，也不能适应国内外对中药现代化越来越高的科学要求。因此，建立全面、系统而又特征地反应中草药的化学成分的指纹图谱，可以为中草药的质量评价和控制提供一个有效的参考方法。本文所建立的方法在精密度、重复性和稳定性方面完全符合指纹图谱研究的技术要求，为今后通过人工干预所恢复的野生升麻药材的质量控制提供保障，同时也可为人工栽培升麻药材的质量监控提供参比。

参考文献[1]中国药典委员会．中国药典(2010年版一部)[s]．北京：中国医药科技出版社，2010.1[2]张庆文，叶文才，赵守训等．兴安升麻的化学成分研究[J].中草药，2002，(8):683-685