病理组织学诊断检材的制备技术

病理组织学诊断检材的制备技术

李秋静

李秋静（山东省威海市立医院264200）

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）19-0186-02

【关键词】病理组织诊断检验制备技术

1组织的固定

1.1凡需要进行病理组织学检查的标本(器官或组织)，离体(活体或尸体)后，应尽快置放(浸泡)于装有足够量固定液的容器中固定。固定液量应为被固定标本体积的5～10倍。置放标本的容器大小视标本和固定液的体积而定，应适当大一些。临床科室切取的标本置放于容器中固定后，应尽快送交病理科继续固定。未能及时、充分固定的干涸或腐败标本不能再进行固定和用于制作切片。

1.2常规固定液为4％中性甲醛(10％中性福尔马林)。应预先多量配制贮存，以备随时使用。小标本的固定时间为4～6h，大标本为18～24h或更久。

1.3根据病理学特殊检查(特殊染色和组织化学染色、免疫组织化学染色和原位核酸分子杂交染色、电镜观察等)的需要，应选用其他适宜的固定液进行固定。

(1)食管、胃、肠、胆囊、膀胱等空腔器官：依规范方法剪开后，按其自然状态平铺于硬纸板上(重点暴露黏膜面或内表面的病变处)，并用大头针将标本边缘处固定于纸板上，然后放入4％中性甲醛中固定(黏膜面或内表面朝向容器的液面，并覆盖薄层脱脂棉)。

(2)肝、脾：由器官背面，沿其长轴每间隔1.5～2.0cm纵向平行剖开，切成数片。将每片肝或脾轻轻地平放于装有4％中性甲醛的容器中，容器底面衬以脱脂棉。应避免标本弯曲和相互间的叠压。

(3)肺叶：放入固定液中的肺叶漂浮于液面，须在肺表面覆盖浸含固定液的薄层脱脂棉。必要时从支气管注入适量4％中性甲醛。

2常规石蜡包埋组织切片(常规切片)的制备

2.1注意事项

组织切片制备及其HE染色过程中使用的乙醇、丙酮、二甲苯、石蜡等为易燃、有毒物，必须专人管理，2m以内不得有明火，局部环境应有良好的通风和消防设施。

2.2常规切片的手工操作

水洗用流水冲洗已经固定的组织块30min。

脱水(常温下)

(1)乙醇-甲醛(AF)液固定：60～120min。

(2)80％乙醇：60～120min。

(3)95％乙醇Ⅰ：60～120min。

(4)95％乙醇Ⅱ：60～120min。

(5)无水乙醇Ⅰ：30～60min。

(6)无水乙醇Ⅱ：30～60min。

(7)无水乙醇Ⅲ：30～60min。

注意事项：①未经充分固定的组织不得进入脱水程序；②用于脱水的试剂容积应为组织块总体积的5～10倍以上；③自低浓度乙醇向高浓度乙醇逐级移进脱水；④脱水试剂应及时过滤、更换(500ml乙醇可用于500个组织块脱水；加入硫酸铜的无水乙醇变蓝时，提示需要更换)；⑤较大组织块的脱水时间长于较小者，应将两者分开进行脱水；⑥组织块置于无水乙醇内的时间不宜过长(以免硬化)；⑦丙酮脱水性能强，会使组织块过缩、硬脆，不宜用以替代无水乙醇。

3冷冻组织切片的制备

3.1应用恒冷箱切片机制备切片

是目前最适用方法。恒冷箱切片机种类较多，应严格按有关厂商的说明书操作。用于切片的组织块必须未曾固定。

3.2应用开放式冷冻切片机制备切片

二氧化碳制冷切片

(1)将组织块放在冷冻台上，滴加OCT或羟甲基纤维素液于组织块周围(将组织块包埋)，使固定在切片机上的切片刀接近组织块表面。

(2)间断开放液态二氧化碳桶的开关，喷冻组织块和切片刀，使组织块冻结和切片刀制冷。

(3)迅速移动切片刀进行切片。先将组织块修平，然后调节厚度至8～12μm处进行切片。

(4)用毛笔将切片展开，贴附于载玻片上，稍干后，置于冷冻切片固定液中固定1min，随即进行HE染色。也可用毛笔将切片托入水中，再用玻璃弯针将切片移至染色皿中进行染色。

(5)组织块也可先在4％中性甲醛中煮沸固定1min，水洗后再行冷冻切片。

半导体致冷切片

(1)切片刀与持刀器之间要间隔一层云母片或硬纸片。将冷刀致冷器粘在刀面上。

(2)将组织冷冻台安装在半导体切片机上。

(3)将冷冻台和切片刀致冷器上的导线连接在控制台直流电源上(注意：正负电极不可接反)。

(4)连接致冷器的冷却水管并开始放水，然后开启电源；冷却水管中的水流量不宜过大，在使用过程不得断水。

(5)调整冷冻温度调节器，至切片刀和冷冻台呈现霜冻。

(6)将新鲜组织块或已固定的组织放在冷冻台中央，滴加水或OCT，或用水调成糊状的羟甲基纤维素于组织块周围(将组织块包埋)。

(7)待组织块冷冻适当后，进行切片。

(8)对于未经固定的新鲜组织，用毛笔将制作满意的切片展平，立即裱贴于盖玻片或载玻片上，待冷冻的切片刚要融化时，立即将其置于冷冻切片固定液中固定1min。对于已经固定的组织块，可用毛笔将制作满意的切片托入水中，再用玻璃弯针将切片移至染色皿中进行染色。

(9)切片完毕后，先关闭电源，再关闭冷却水，待冰霜融化后擦干机器，加罩。

甲醇致冷切片按有关厂商的仪器说明书操作。

氯乙烷致冷切片

(1)将新鲜的或已经固定的组织块置于支持器中央，加少许水或OCT。

(2)连续喷射氯乙烷于组织块上，待组织块冻结后，改为间歇喷射，使冷冻适度，立即切片。使用氯乙烷时应注意防火、防爆。

(3)进行组织切片的裱贴、固定和染色(与上述方法相同)。

参考文献

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