TCA/丙酮沉淀法对尿液标本中微量蛋白效果分析

TCA/丙酮沉淀法对尿液标本中微量蛋白效果分析

杨左钱

杨左钱（辽宁省盘锦市中心医院检验科124000）

【摘要】目的：探讨TCA/丙酮沉淀法对尿液标本中微量蛋白检出的效果。方法：患者尿液标本150份随机均分为A组、B组和C组，分别行TCA/丙酮沉淀法、CAN/TFA沉淀法、丙酮沉淀法检测。结果：三组间蛋白回收率和所得蛋白点数均值比较：TCA/丙酮沉淀法组最高，丙酮沉淀法组最低，三组间均数两两比较显示，TCA/丙酮沉淀法与CAN/TFA沉淀法、TCA/丙酮沉淀法与丙酮沉淀法、CAN/TFA沉淀法与丙酮沉淀法组间差异均有统计学意义。结论：TCA/丙酮沉淀法对尿液标本中微量蛋白检测敏感性强，准确性高。

【关键词】尿液微量蛋白TCA/丙酮沉淀法CAN/TFA沉淀法

【中图分类号】R446.12【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）51-0074-02

【Abstract】Objective:ToinvestigatetheTCA/acetoneprecipitationmethodfordetectionoftraceproteininurinespecimenseffects.Methods:150patientswithurinespecimenswererandomlypidedintogroupA,groupBandgroupC,respectively,thelineTCA/acetoneprecipitation,CAN/TFAprecipitation,acetoneprecipitationassay.Results:Thethreegroupsproteinrecoveryandtheresultingproteinspotsmeancomparison:TCA/acetoneprecipitationwashighest,acetoneprecipitationwasthelowestamongthethreegroupswerepairwisecomparisonshows,TCA/acetoneprecipitationandCAN/TFAprecipitation,TCA/acetoneprecipitationandacetoneprecipitation,betweenCAN/TFAprecipitationwithacetoneprecipitationmethodgroupdifferenceswerestatisticallysignificant.Conclusion:TCA/acetoneprecipitationmethodfordetectingtraceproteininurinespecimenssensitivity,highaccuracy.

【Keywords】urinemicroalbuminTCA/acetoneprecipitationCAN/TFAprecipitation

当早期肾脏病变如早期肾病综合征、肾炎综合征时、糖尿病肾病、高血压肾病患者，肾小球有不同程度损害，微蛋白可从滤过屏障漏出[1]。故及时、准确的检测尿液标本中微蛋白对于肾脏病变的针对和病情评估有重要意义。目前检验科常用的微蛋白检测方法有CAN/TFA沉淀法、丙酮沉淀法、TCA/丙酮沉淀法等[2]，本研究通过分析三种方法对于检测尿液微蛋白的效果差异，探讨其应用价值：

1资料与方法

1.1临床资料

选自2012年8月～2013年12月间我院住院患者尿液标本150份。其中男性87例，女性63例。年龄14岁～75岁，平均年龄46.7±11.7岁。

1.2分组和检测方法

将我院住院患者尿液标本150份随机均分为三组（A组、B组和C组），并分别予以不同微蛋白检验方法，其中A组行TCA/丙酮沉淀法，B组行CAN/TFA沉淀法，C组行丙酮沉淀法对尿液标本中微量蛋白进行检测。三组患者间性别构成、年龄分布、疾病类型等其他因素间无显著差异，具有可比性。其中TCA/丙酮沉淀法操作步骤简述为：取5ml尿液标本，加入90%TCA溶液17.5ml，-20℃环境中沉淀24h，后经4℃低温离心15min（10000r/min），再将沉淀物置于5ml的丙酮溶液中超声破碎重悬，再4℃低温离心15min（10000r/min）后弃除上清液，并将沉淀物液氮吹干备用。CAN/TFA沉淀法步骤简述：使用该沉淀法沉淀尿液蛋白质，经4℃低温离心15min（10000r/min）后弃除上清液，并将沉淀物液氮吹干备用。丙酮沉淀法：取5ml尿液样本，加入5ml4℃丙酮溶液，二者混匀后于-20℃静置24h，经4℃低温离心15min（10000r/min）后弃除上清液，并将沉淀物液氮吹干备用。

1.3观察指标

本组研究对150份尿液标本行不同方法检测微蛋白，比较三组间蛋白回收率和所得蛋白点数均值差异。

1.4统计学方法

采取Excel建立数据库，SPSS15.0统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差（χ-±s）表示，计量资料采用三组资料的方差分析，三组间两两比较采用Levenet检验，计数资料采用卡方检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

三组间蛋白回收率和所得蛋白点数均值比较显示，差异显著，具有统计学意义（P＜0.05）；其中TCA/丙酮沉淀法组最高，而丙酮沉淀法组最低，三组间均数两两比较显示，TCA/丙酮沉淀法与CAN/TFA沉淀法、TCA/丙酮沉淀法与丙酮沉淀法、CAN/TFA沉淀法与丙酮沉淀法组间蛋白回收率和所得蛋白点数均值差异均有统计学意义（P＜0.05）。具体统计结果见表1.

表1.三组患者间蛋白回收率和所得蛋白点数均值结果统计

3.讨论

正常人尿液中无微蛋白或仅有少量微蛋白，当尿液中出现微蛋白常提示肾小球滤过或重吸收功能受损，是肾脏损伤和心血管系统改变早期敏感指标。正常人群尿液中白蛋白含量不超过20mg/L，当超过这一临界值时提示尿蛋白升高，且其升高幅度常与肾脏损伤程度呈正比例，即肾功能损害越重，尿液中白蛋白含量越高。尿蛋白大量出现时，不同检测方法间检出结果差异不大，但当尿液中白蛋白轻度升高时，对检测方法提出一定考验，此时如不能及时检出尿中微蛋白，则可能延误最佳治疗时机，给患者带来巨大伤害，故如何选择敏感、高效的检测手段有重要临床意义。

对尿液中蛋白检测过程中，为消除尿液高蛋白、低盐环境以及某些高丰度蛋白对检测结果的影响，常需进行透析、冻干等操作步骤，进行提纯、离心、滤过等方法获取蛋白，这一过程步骤繁杂，在分析提纯的过程中会造成不同程度的蛋白丢失，影响蛋白回收量，进而影响检测结果准确性。本研究通过对比CAN/TFA沉淀法、丙酮沉淀法、TCA/丙酮沉淀法三种方法检测尿液微蛋白的效果差异，发现TCA/丙酮沉淀法组蛋白回收率和所得蛋白点数均值最高，而丙酮沉淀法组最低，三组间差异显著，具有统计学意义，这与董明国[3]等人的研究结果基本一致。

检测前对标本进行沉淀处理是减少蛋白丢失、保证检验准确的有效措施，丙酮沉淀法虽然进行了沉淀处理，减少了蛋白流失，但该方法获得蛋白点清晰度不佳，影响观察和判断。故有人提出在丙酮沉淀前应用TCA，清除干扰IEF的盐类物质及其他分子，降低尿液的导电能力，进而保证将蛋白丢失降低到最小程度。TCA/丙酮沉淀法对尿液进行浓缩的同时，可以完成脱去盐分，且可成功避开透析、冻干等操作步骤，以及提纯、离心、滤过等繁琐方法，具有操作简便等优点，并且能保证蛋白回收率和所得蛋白点数均值。

综上所述，TCA/丙酮沉淀法对尿液标本中微量蛋白检测敏感性强，准确性高，能为临床诊治提供科学可靠依据，是尿液微量蛋白检测的首选方法。

参考文献

[1]龙峰.TCA/丙酮沉淀对脑脊液标本中蛋白质双向电泳的影响分析[J].当代医学,2010,12(04):185-186.

[2]孙太欣，彭国光，等.双向凝胶电泳脑脊液蛋白质提取方法的比较[J].中国医药生物技术,2007,2(3):172

[3]董明国，杨明建，等.TCA/丙酮沉淀对尿液标本中微量蛋白效果分析[J].吉林医学，2010,31（36）6691-2