不孕症患者外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞及NK细胞特征分析

不孕症患者外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞及NK细胞特征分析

李辉玉刘文斌吴其坤

长沙生殖医学医院检验科410006

[摘要]目的：研究不孕症病患外周血NK细胞、T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞临床特征。方法:取2018年12月-2019年5月我院所收治患有不孕症的240例病患为对象：其中包括126例继发性的不孕症、114例原发性的不孕症。同期接受早期的健康妊娠120例女性，同期健康的非妊娠120例女性；采用流式细胞学的检测方法，对不孕症病患、早期的健康妊娠与健康的非妊娠女性，外周血NK细胞、B细胞、T细胞的亚群特征进行检测分析。结果：原发性不孕症组与继发性不孕症组，在外周血的CD8+T细胞、B细胞的水平状况上，均明显比健康的非妊娠及早期的健康妊娠女性较低，差异统计意义存在，P<0.05；CD4+T/CD8+T比值高于健康非妊娠及早期健康妊娠女性，差异统计意义存在，P<0.05；原发性不孕症组与继发性不孕症组，在CD3T细胞的水平方面，明显比健康的非妊娠及早期的健康妊娠女性较低，差异统计意义存在，P<0.05；各组间NK细胞的水平、CD4+T差异统计意义不存在，P＞0.05；原发性的不孕症组与继发性的不孕症组，在NK与B细胞的水平、T细胞的亚群等方面，差异统计意义不存在，P＞0.05。健康的非妊娠及早期的健康妊娠女性，在NK与B细胞水平、T细胞的亚群等方面，差异统计意义不存在，P＞0.05。结论：不孕症病患B细胞、T细胞的亚群比例失调所引发机体细胞的免疫功能提升及体液免疫的应答紊乱现象，针对免疫性的不孕症发病机制当中起着关键作用。

[关键词]不孕症；外周血；T淋巴；细胞亚群；B淋巴细胞；NK细胞；特征

为深入研究不孕症病患外周血NK细胞、T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞临床特征，此次临床实验观察研究取2018年12月-2019年5月我院所收治患有不孕症240例病患为对象，以下为此次临床实验观察研究的具体结果：

1.一般基线资料及研究方法

1.1研究对象

取2018年12月-2019年5月我院所收治患有不孕症240例病患为对象：其中包括126例继发性的不孕症、114例原发性的不孕症。病患年龄范围：22-47岁，平均年龄区间：（23.55±4.32）。所有病患经附件、子宫B超检查后均确认无异常症状，输卵管处于通畅状态，排除男性病患；诊断标准主要参考中华妇科临床医学、妇产科学[1]。择取同期接受早期的健康妊娠120例女性，年龄范围：23-45岁，平均年龄区间：（24.66±4.22）；同期健康的非妊娠120例女性，年龄范围：24-44岁，平均年龄区间：（25.39±4.03）；每组间年龄差异不存在统计意义，P＜0.05，可比性存在，排除免疫系统及其余系统疾病病患。

1.2方法

1.2.1采集标本

做好不孕症病患标本并采集工作，常规组晨起空腹期间取2ml外周的静脉血，用EDTA-K2抗凝。

1.2.2仪器与试剂

仪器：美国所生产BDFACSCalibur型号的流式细胞仪；

试剂：BDMultitestCD3FITC/CD16+CD56PE/CD45PerCP/CD19APC；BDMultitestIMK试剂盒溶血素（10倍浓缩）；BDMultitestCD3FITC/CD8PE/CD45PerCP/CD4APC；BDTrucount管。

1.2.3操作方法

在1号BDTrucount管底部添加20цlBDMultitestCD3FITC/CD8PE/CD45PerCP/CD4APC；在2号BDTrucount管底部添加20цlBDMultitestCD3FITC/CD16+CD56PE/CD45PerCP/CD19APC；后再各管底部添加50цlEDTA-K2充分混匀的抗凝全血，予以充分地混匀后放置于20-25℃避光孵育15min；后向各试管内添加450цl10倍稀释的BDMultitest溶血素，予以充分地混匀处理，在20-25℃避光放置10min之后，上机实施检测。

1.3统计法

通过spss20.0软件系统进行数据统计分析，数据计数的资料用x2计作算检验，t值对计量的资料作计算检验。若P<0.05，证明组间的数据差异统计学意义存在。

2.研究结果

在该240例不孕症病患当中，T淋巴细胞出现不同程度亚群失衡状况的病患为156（65.00）例，常见为CD8+/CD4+Z参数值异常；B淋巴细胞出现不同程度失衡状况病患为例60（25.00）例，NK淋巴细胞出现不同程度失衡状况病患为例24（10.00）例。原发性的不孕症组与继发性的不孕症组，在外周血的CD8+T、B细胞的水平状况上，均明显比健康的非妊娠及早期的健康妊娠女性较低，差异统计意义存在，P<0.05；CD4+T/CD8+T比值高于健康非妊娠及早期健康妊娠女性，差异统计意义存在，P<0.05；通过对比分析可了解到，原发性的不孕症组与继发性的不孕症组，在CD3T的细胞水平方面，明显比健康的非妊娠及早期的健康妊娠女性较低，差异统计意义存在，P<0.05；各组间NK的细胞水平、CD4+T差异统计意义不存在，P＞0.05；原发性的不孕症组与继发性的不孕症组，在NK与B细胞水平、T细胞的亚群等方面，差异统计意义不存在，P＞0.05。健康的非妊娠及早期的健康妊娠女性，在NK与B细胞水平、T细胞的亚群等方面，差异统计意义不存在，P＞0.05，详见表1。

表1对比不孕症病患、健康的非妊娠及早期的健康妊娠女性NK细胞、B细胞、T细胞的亚群（±s）

4讨论

不孕症，属于孕龄期女性常见病，引发不孕症因素较多，包涵着微生态状况、免疫因素、生殖系统的病变、排卵异常等。免疫向的不孕症病因及发病机制复杂性较为突出，临床治疗难度系数较高[2-3]。机体自身免疫功能的紊乱属于各种免疫功能细胞水平出现失衡状况所致免疫性的不孕症客观因素[4-6]。通过以上对于不孕症病患外周血NK细胞、T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞临床特征试验对比研究后可得出如下结论：不孕症病患外周血当中B细胞、CD8+T、CD3+T的细胞水平明显降低，而CD8+/CD4+却持续提升，表明不孕症病患存在着B细胞与T细胞的亚群比例失衡这一现象，促使病患机体细胞的免疫功能处于升高状态，机液免疫处于应答紊乱状态，在免疫性的不孕症发病机制当中作用明显。对不孕症病患外周血的淋巴细胞亚群变化进行综合监测，便于充分了解病患机体免疫功能实际状态，针对于不孕症临床诊治与治疗效果判断来说应用价值较为突出。

[参考文献]

[1]彭梅,鲁小龙,张雷.T淋巴细胞亚群与NK细胞检测在弥漫大B细胞淋巴瘤患者治疗中的意义探讨[J].实用医院临床杂志,2018，21(03):64-66.

[2]曲志刚,江锦红,马光丽.B细胞淋巴瘤患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞活性的监测[J].放射免疫学杂志,2016,23(01):120-121.

[3]甄敬飞,包芳,朱明霞.外周血免疫细胞亚群的变化与B细胞淋巴瘤患者的预后关系研究[J].中国实验血液学杂志,2018,26(06):878-879.

[4]SanjaV,SnjezanaZidovecL,AlenkaA,etal.B-andT-cellsinthefollicularfluidandperipheralbloodofpatientsundergoingIVF/ETprocedures[J].AmericanJournalofReproductiveImmunology,2015,52(6):379-385.

[5]Chao-QunH,Jiong-YuC,Wei-PingY,etal.ClinicalsignificanceofdetectingthelevelsofT-lymphocytesubsets,NKandNKTcellsinperipheralbloodofpatientswithesophagealsquamouscellcarcinomabeforeandafteroperation[J].JournalofModernOncology,2016,11（02）：239-245.

[6]HoekA,VanKasterenY,DeHaan-MeulmanM,etal.AnalysisofPeripheralBloodLymphocyteSubsets,NKCells,andDelayedTypeHypersensitivitySkinTestinPatientsWithPrematureOvarianFailure[J].AmericanJournalofReproductiveImmunology,2015,33(6):495-502.