固相法在门诊患者ABO、 RhD血型定型中的应用

固相法在门诊患者ABO、RhD血型定型中的应用

成永平

（天水市麦积区中医医院甘肃天水741000）

摘要：目的ABO血型和Rh血型是人类红细胞上最重要的血型系统之一。Rh血型中的D抗原具有较大的临床意义，因此在常规检查中一般只鉴定Rh阴性和阳性[1]。方法：通过应用固相法、纸片法、微柱凝胶法同时检测门诊患者血型，评价固相法是否能用于门诊患者ABO血型及RhD血型定型。结果:固相法与微柱凝胶法符合率为100%。结论:固相法血型定型试剂操作简单快捷，携带方便，准确性高，适合流动采血点和应急采血初筛，尤其可以用于门诊患者ABO\RhD血型定型。

【关键词】：固相法门诊患者ABO、RhD血型定型

【中图分类号】R193.3【文章标识码】A

SolidphasemethodinoutpatientsABO,RhDapplicationofbloodtyping

ChengYongPing(tianshuiwheatproductareahospitaloftraditionalChinesemedicinehospitalclinicallaboratory,gansutianshui741000).Thepurpose:ABObloodgroupandRhbloodgroupisoneofthemostimportantbloodgroupsystemonthehumanredbloodcells.DofRhbloodgroupantigenhasgreatclinicalsignificance,thereforeonlycommonlyintheroutineinspectionappraisalRhnegativeandpositive[1].Methods:byusingsolidphasemethod,thepapermethod,microcolumngelmethoddetectionoutpatientbloodtypeatthesametime,whethertheevaluationmethodofsolidphasecanbeusedforoutpatientsofABObloodgroupandRhDbloodtyping.Results:thesolidphasemethodandmicrocolumngelmethodcoincidenceratewas100%.Conclusion:themethodofsolidphasebloodtypingreagentsoperationsimpleandquick,easytocarry,highaccuracy,suitableformobilebloodpointandearlyemergencybloodscreening,especiallycanbeusedintheclinicpatientsABO\RhDbloodtyping.

Keywords:solidphasemethodOutpatientsABO,RhDbloodtyping

自从1900年Landsteiner发现ABO血型并因此获贝尔奖以来，血型在治疗学、遗传学、法医学、人类学及考古学上的应用日趋广泛，已发展成一门血型学。在红细胞血型系统中，以ABO血型系统发现最早，应用最广，与临床输血关系最密切，最重要，其次是Rh系统[2]。医院门诊患者鉴定血型是常规检测之一，在本地区，医院门诊检测血型，大多数采用纸片法或玻片法，由于方法学限制，检测的准确度较差，本调查在门诊患者检测血型中应用固相法检测，检测结果与微柱凝胶法结果一致，虽然固相法的成本略高于纸片法，但操作简单，结果易于观察，易于留存，不需要其它设备，适合于门诊大批量的快速血型鉴定。

1材料与方法

1.1研究对象天水市麦积区中医医院医院2012年11-12月门诊申请检测血型患者500人次，均用EDTA-K2抗凝。

1.2试剂与仪器ABO血型正定型及RhD血型定型试剂盒固相法（英科新创（厦门）科技有限公司）、抗A抗B血型定型试剂（单克隆抗体）（上海血液生物医药有限责任公司）、抗D（IgM+IgG）血型定型试剂（单克隆抗体）（英国MILLPORE）、反定型红细胞（自制）、ABO、RhD血型定型检测卡（单克隆抗体）（长春博迅生物技术有限公司）、免疫微柱孵育器，血型血清学离心机（长春博迅生物技术有限公司）。所有试剂均按厂家说明书操作。

1.3标本处理申请血型检测患者EDTA-K2抗凝血标本2毫升，固相法检测血型后，1000g离心5min备用。

1.4血型测定：

1.4.1每份标本先用固相法试剂测定血型，该试剂根据抗原抗体免疫吸附原理进行血型鉴定，将抗A、抗B、抗D单克隆抗体分别固定于多孔固相载体上，当待测样本中的红细胞和固相抗体发生免疫结合反应，红细胞即被截留在载体上，显示红色，为阳性反应；如无抗原抗体免疫反应，红细胞则不能被截留，显示无色，为阴性反应。（结果见图1）

两例O型患者纸片法正定型为O型，反定型为A型，经微柱凝胶法确认，该患者血型为O型，抗B效价为2。

3讨论

ABO血型系统是根据红细胞表面有无特异性抗原A和B来划分的血液类型系统。根据凝集原A，B的分布把血液分为A，B，AB，O四型。红细胞上只有凝集原A的为A型血，其血清中有抗B凝集素；红细胞上只有凝集原B的为B型血，其血清中有抗A的凝集素；红细胞上有A，B两种凝集原都有的为AB型血，其血清中无抗A,抗B凝集素；红细胞上有A,B两种凝集原皆无者为O型，其血清中抗A，抗B凝集素皆有。具有凝集原A的红细胞可被抗A凝集素凝集；抗B凝集素可使含凝集原B的红细胞发生凝集。输血时若血型不合使输入的红细胞发生凝集，引起血管阻塞和血管内大量溶血，造成严重后果。所以在输血前必须做血型鉴定。

RH血型系统是一般指Rh系统中D抗原的检测，根据病人红细胞是否带有D抗原分为Rh阳性和Rh阴性。Rh血型系统一般不存在天然抗体，故第一次输血时不会发现Rh血型不合。但Rh阴性的受血者接受了Rh阳性血液后，可产生免疫抗体Rh抗体，如再次输受Rh阳性血液时，即可发生溶血性输血反应。因此，临床输血前Rh血型系统的检测也是常规必要的。

临床上常用的检测ABO，RhD血型的试剂有两种，一种为抗A，抗B标准血清检测血型的试剂和RhD血型检测试剂，它是利用抗原抗体的凝集的方法来判断结果；一种为微人球蛋白试验阳性，新生儿溶血病或获得性溶血，前者为液体的抗A，抗B血型试剂，其对含有自身冷凝集素的受检者，往往被误定为AB型。玻片法反应时间不能少于10min，否则较弱凝集不能出现，造成假阴性。后者微柱凝胶卡法检测血型灵敏度高，结果易标准化，易判断，结果保存时间长，但相对成本较高，受纤维蛋白及冷凝蛋白的影响也会产生假阳性。操作时间相对较长，不适用于门诊患者检测血型。

ABO，RhD血型检测卡准确率极高，它是根据抗原抗体免疫吸附原理进行检测的。将A,抗B抗体及D抗体分别固定于多孔固相载体垫上，当待测样本中的红细胞与固相抗体发生免疫结合反应，红细胞即被载留在固相载体上，反应孔显示为红色，即为阳性反应；如抗原抗体无免疫反应发生，游离的红细胞即可被冲洗液冲走，反应孔显示为无色，为阴性反应。为此反应结果清晰可见，易于判断。血型检测卡可被放在2-30摄氏度环境中储存，即可放在常温环境中，保存简便，避免了标准血清使用时可能产生冷藏凝集现象。另外，这种血型检测卡操作简单，结果显示快速，携带方便，特别适合与大批量血型检测的筛查。

固相法试剂的不足之处是现有试剂只能进行ABO血型正定型。此外，本研究中只针对门诊常规标本，样本量较少，没有涉及亚型，疑难血型的影响因素。今后，还将继续加大样本量，进一步证实固相法在门诊患者检测血型的准确性和可行性。

参考文献

[1]赵桐茂.人类血型遗传学.北京:科学出版社,1987:103.

[2]林武存.临床检验学.北京：科学技术文献出版社，1994：111.