蛹虫草对小鼠免疫作用的 影响

蛹虫草对小鼠免疫作用的 影响

于一希 李勇 苏春雷

沧州医学高等专科学校 河北沧州 061001

【摘 要】目的 探讨蛹虫草对小鼠免疫作用的影响。方法 将192只SPF级昆明雄性小鼠随机分为 A、B、C、D 4组，各组均随机分为4个小组，即对照组、低、中、高剂量组，每组12只。低、中、高剂量组小鼠经口灌胃分别为 0.06、0.12、0.36g/(kg·bw)的蛹虫草粉，对照组给予同体积的去离子水。灌胃容量0.2ml/10g，1次/d。连续灌胃30d后，分别进行迟发型变态反应（DTH）实验、血清溶血素的测定、抗体生成细胞数的测定、碳廓清实验、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、淋巴细胞转化实验和NK细胞活性测定。结果 与对照组相比，中、高剂量组小鼠足跖肿胀度、淋巴细胞增殖能力、抗体生成细胞数、抗体积数、单核-巨噬细胞碳廓清能力、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数均具有统计学意义(P<0.05，P<0.01)，而NK细胞活性无统计学意义（P>0.05）。结论 蛹虫草可以增强老龄小鼠的免疫作用的影响。

关键词：蛹虫草；免疫；小鼠

近年来蛹虫草作为冬虫夏草的替代品，二者同属异种^[1]。 蛹虫草生长环境的要求较冬虫夏草低，生长周期短，大规模培养可获得子座。研究表明，蛹虫草同天然冬虫夏草功效相似，均可发挥抗疲劳、抗肿瘤、抗衰老、增强免疫力等多方面作用^[2]。蛹虫草含有丰富的营养物质：核苷类化合物、虫草多糖、虫草酸、蛋白质氨基酸及多种微量元素。核苷类化合物主要包括虫草素、腺苷、尿苷、鸟苷、腺嘌呤和尿嘧啶等。其中虫草素是蛹虫草的主要活性成分之一，生物活性广泛，主要表现在抗菌、抗感染、抗肿瘤、免疫调节、神经保护及干扰人体RNA和DNA的合成等多个方面^[3-4]。研究表明，蛹虫草超细粉显著提升小鼠耳片重量差值、血清抗体积数、肝脏匀浆（10%）中白介素-６含量^[5]。超Ⅴ星虫草和Ⅰ星虫草均可明显拮抗地塞米松导致的免疫功能低下，显著提高脾脏指数，增强NK细胞杀伤能力，提高巨噬细胞分泌TNF-α水平^[6]。

本实验以18-22g健康成年小鼠为对象，探讨蛹虫草对小鼠的免疫保护作用。

1 材料与方法

1.1 主要仪器 显微镜、游标卡尺、DY89-II型电动玻璃匀浆机、LDZ5-2型低速自动平衡离心机、722N-可见分光光度计、酶联免疫检测仪、CO2培养箱、血细胞计数器等。

1.2受试物 蛹虫草子实体，批号20180215

1.3 动物 健康SPF级昆明雄性小鼠192只，体质量18～22g。

1.4分组与方法 以正常饲料适应性喂养3d后，将小鼠按体重随机分为 A、B、C、D 4组。各组均随机分为4个小组，即对照组、低、中、高剂量组，每组12只。低、中、高剂量组小鼠经口灌胃分别为 0.06、0.12、0.36g/(kg·bw)的蛹虫草粉，灌胃容量0.2ml/10g，对照组灌胃同体积去离子水，1次/d。实验周期为30d。

1.5测定指标 测定方法依据《保健食品检验与评价技术规范》(2003 年版)，进行迟发型变态反应（DTH）实验采用足跖部厚度法、抗体生成细胞测定采用 Jerne改良玻片法、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验采用半体内法、小鼠淋巴细胞转化实验采用MTT法、小鼠NK细胞活性测定采用乳酸脱氢酶 LDH 测定法。血清溶血素的测定及碳廓清实验。

1.6 统计学方法 实验数据均以x±s 进行表示。采用SPSS 20.0 软件进行统计学分析。多组间比较采用方差齐性检验和单因素方差分析（One WayANOVA）。组间两两比较时；方差齐，采用SNK检验（Student-Newman-Keuls 法）；方差不齐时，进行数据转换或改用秩和检验统计。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 蛹虫草对小鼠体质量和脏器体质量比值的影响 各组小鼠生长发育好，体质量稳定增加，各期体质量差异均无统计学意义(P＞0.05)。脾脏、胸腺体重比值在对照组与低、中、高剂量组间比较差异均无统计学意义(表1，P＞0.05)。

表1 对小鼠脏器比的影响（x ± s ）

2.2 蛹虫草对小鼠细胞免疫功能的影响 与对照组比，其足跖肿胀度与淋巴细胞增殖能力在中、高剂量组具有统计学意义（表2，P＜0.05，P＜0.01）。

2.3 蛹虫草对小鼠体液免疫的影响 中、高剂量蛹虫草组小鼠抗体生成细胞数（溶血空斑数、抗体积数均显著高于对照组（表2，P＜0.05）。

表2 对小鼠细胞免疫和体液免疫的影响（x ± s ）

注：^*与对照组比较，P＜0.05，^**与对照组比较，P＜0.01

2.4 蛹虫草对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响 中、高剂量组小鼠单核-巨噬细胞碳廓清率、腹腔巨噬细胞鸡红细胞吞噬指数显著高于对照组(表3，P＜0.05，P＜0.01)。

2.5 蛹虫草对小鼠NK细胞活性的影响 经口给予小鼠不同剂量的蛹虫草30d，经统计学处理，其NK细胞活性在各组间均无统计学意义（表3，P＞0.05）。

表3 对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能和NK细胞活性的影响（x ± s ）

注：^*与对照组比较，P＜0.05，^**与对照组比较，P＜0.01

3 结论

免疫调节是由各种免疫细胞与免疫分子相互作用构成的网络结构，即细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫共同构成机体的防御体系。脾脏是机体最大的外围免疫器官，参与机体多种免疫反应；淋巴细胞转化试验可以在体外检测淋巴细胞的应答能力；迟发型变态反应是机体接受再次抗原刺激24～48h后发生的组织损伤，上述指标水平的高低均可直接反映机体细胞免疫功能的强弱。实验结果显示，中、高剂量的蛹虫草可明显增强小鼠的足跖肿胀度及淋巴细胞增殖能力，从而提高小鼠的细胞免疫功能。

小鼠血清溶血素抗体生成实验是衡量机体体液免疫的一种测定方法。溶血素是小鼠B淋巴细胞产生的特异性抗SRBC抗体，溶血空斑可反映抗体生成细胞能力；通过测定溶血素的水平和溶血空斑的数量就可以反映机体的体液免疫能力。本实验结果显示，中、高剂量蛹虫草组小鼠抗体生成细胞数（溶血空斑数）、抗体积数均显著高于对照组，提示蛹虫草可以增强小鼠的体液免疫。

巨噬细胞是除淋巴细胞外免疫系统中第二大主要的细胞群，其吞噬能力是衡量机体非特异性免疫功能的标志之一。巨噬细胞能迅速清除多种致病物质，并呈递抗原、分泌细胞因子，继而维持机体内环境的稳定。小鼠碳廓清实验中所测得的廓清指数K可反映网状内皮系统的吞噬功能,吞噬指数则可反映单核-巨噬细胞的吞噬能力。研究结果显示，中、高剂量组小鼠单核-巨噬细胞碳廓清能力吞噬率、腹腔巨噬细胞鸡红细胞吞噬指数。

综上所述，蛹虫草具有增强小鼠免疫功能的作用。

引用文献：

[1] 蒋志涛, 戴国梁,潘金火,等. 蛹虫草化学成分及药理作用研究进展[J]. 现代中药研究与实践,2015,29(5):80-83.

[2] 詹欢.蛹虫草的有效成分和药用价值及其在食品中的应用 [J]. 现代食品, 2016(16):56-61.

[3]郑壮丽,黄春花,梅彩英,等.蛹虫草国内外研究的新进展[J].环境昆虫学报 , 2011, 33(2):225-233.

[4]吕金朋，张晔,姚梦杰,等.蛹虫草的化学成分及药理作用.吉林中医药.2018 年3月，38（3）：310-312

[5]孙勇，杨文建，马宁，等.蛹虫草子实体超细粉对小鼠免疫力及抗氧化功能的调节作用.食用菌学报.2013，20（1）：66-69

[5]马淑梅，陈瑶，颜仁杰，等.不同级别蛹虫草子实体菌粉对免疫低下小鼠非特异性免疫功能的调节作用比较.中国药理学通报.2019年 4月，35(4): 535～539