小承气汤HPLC指纹图谱的建立

小承气汤 HPLC指纹图谱的建立

王文智 1 于崇丽 1 杜守颖 2 白洁 2 陆洋 2

1 河北万岁药业有限公司 河北沧州 061000

2 北京中医药大学 北京 100029

摘要：目的：建立小承气汤物质基准高效液相色谱法，指纹图谱结合化学模式识别方法分析质量。方法：采用Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 m），流动相甲醇（A）-0.1%磷酸水溶液（B）梯度洗脱（0~60 min，20%~90%A；60~70 min，90%~100%A），流速1 mL·min-1，柱温25℃，检测波长254 nm。结果：建立了小乘气汤物质基准的HPLC指纹图谱，确定了31个共有峰对共有风进行药材归属，通过对比指认了18个成分，15批小乘气汤物质基准的指纹图谱与对照图谱相似度均大于0.92。结论：建立的指纹图谱分析方法具有较高的灵敏度和稳定性，数据来源可靠，能够对小承气碳物质基准整体化学成分特征进行体现，可作为该经典名方复制制剂质量标准的参考依据。

关键词：小承气汤；HPLC；指纹图谱

小承气汤来源于张仲景的《伤寒论》，其药材包括大黄四两、厚朴二两至13枚，功效清下热结、除螨消痞，主要用于治疗阳明腑实轻症，目前被摄录在古代经典名方目录中，成为经典名方制剂的重点研究内容^[1]。经典名方物质基准研制和制剂研制的两个阶段是经典名方制剂研制的组成部分，前者属于结合古代经典方法制作的重要物质标准，能够为制剂的研发提供一定的依据，保障现代制剂和传统医用物质质量一致，能够使经典名方具有现代制剂的便捷性，以及传统经方的有效性两方面优点^[2]。所以，突破经典名方物质基准控制技术的瓶颈，建立规范的体系是经典名方制剂面临的重点问题。中药复方化学成分较为复杂，药效发挥并非单一有效成分，而是不同药物之间的配伍和制约，促进协同作用的发挥。小承气汤物质基准是在提取工艺中的基础上，由间叶冷冻干燥制的化学成分复杂，组方药材多为原产地导致，具有较高的质量控制难度。近些年来，临床上主要研究小承气汤的药理作用，大部分针对的患者为肠梗阻术后胃肠动力障碍患者^[3]。但关于小承气汤的质量，临床尚无相关报道，且采用的手段比较常规，一般是多成分定量分析和薄层色谱定性鉴别等方法。此外，也有研究小承气汤指纹图谱的文献，但均存在一定的不足之处，例如实验采用自制的小承气汤，处方药味基缘，饮片炮制方法、处方剂量等缺乏考证，指纹图谱研究中也没有利用图谱涵盖的大量化学信息来综合评价物质质量。中药指纹图谱可以对中药的复杂化学成分组成进行全面的反应^[4]。化学模式识别技术能够综合分类分析多个指标来表达、识别与处理指纹图谱信息，结合两者能够对中药质量进行全面评价，当前已被用于经典名方质量控制中。在此基础上，本实验建立了小承气汤物质基准的HPLC指纹图谱，并对其相似度进行评价，结合主成分分析和辨别分析等化学模式识别方法，对批次样品质量差异进行评价，为完善小成其他物质基准质量和实现后续制剂深度研究提供基础^[5]。

1.材料与方法

1.1样品前处理：

1.1.1供试品溶液的制备：

分别称取酒大黄55.2g，姜厚朴27.6g，麸炒枳实39g于陶瓷锅中，加800mL去离子水，武火煎沸（1600W 9min30s）转文火至沸，文火煎煮240mL（600W 47min），用300目尼龙筛网过滤，调整滤液体积至240mL。分别用甲醇调整醇浓度，摇匀后，5000 r·min^-1离心10 min，取上清液，过0.45μm微孔滤膜，分别得到90%、70%、50%的醇沉液供试品；全方水液不经甲醇处理，直接10000 r·min^-1离心10 min后，取上清液，0.45μm微孔滤膜，得到全方水液供试品。

考察流动相种类以及检测波长

1.1.2供试品溶液的制备

分别称取酒大黄55.2g，姜厚朴27.6g，麸炒枳实39g于陶瓷锅中，加800mL去离子水，武火煎沸（1600W 9min30s）转文火至沸，文火煎煮240mL（600W 47min），用300目尼龙筛网过滤，调整滤液体积至240mL。精密移取上述小承气汤样品3mL，精密加入7ml甲醇摇匀后，5000 r·min^-1离心10 min，取上清液，过0.45μm微孔滤膜，进样。

2.结果

乙腈-0.1%甲酸

乙腈-0.5%甲酸

乙腈-水

甲醇-0.1%甲酸

小承气汤特征峰归属：

供试品溶液的制备

全方：酒大黄55.2g，姜厚朴27.6g，麸炒枳实39g

酒大黄单味药：酒大黄55.2g

酒大黄阴性：姜厚朴27.6g，麸炒枳实39g

姜厚朴单味药：姜厚朴27.6g

姜厚朴阴性：酒大黄55.2g，麸炒枳实39g

麸炒枳实单味药：麸炒枳实39g

麸炒枳实阴性：酒大黄55.2g，姜厚朴27.6g

分别称取上述组别药材于陶瓷锅中，加800mL去离子水，武火煎沸（1600W 9min30s）转文火至沸，文火煎煮240mL（600W 47min），用300目尼龙筛网过滤，调整滤液体积至240mL。精密移取上述小承气汤样品3mL，精密加入7ml甲醇摇匀后，5000 r·min^-1离心10 min，取上清液，过0.45μm微孔滤膜，进样。

大黄

大黄素甲醚

大黄酚

大黄素

大黄酸

芦荟大黄素

厚朴

厚朴酚

和厚朴酚

枳实

3. 讨论

经典名方作为中药方剂的接触代表，是历代医学世家临床经验的总结，也是我国中药宝库中的精华。其开发的关键在于建立严格的质量控制系统，从药材到饮片到中间体和制剂，对质量准备过程中的每一个环节进行精准的控制。本文建立的小承气汤物质基准HPLC指纹图谱，能够对小承气汤中的化学成分信息进行全面反映，且具有可重复性和便捷性。结合化学模式识别技术综合评价指纹图谱，能够使结果更加全面和科学，对小承气汤物质基准级试剂质量控制标准提供参考依据。

参考文献：
[1]王其田,杨西晓,郭丹.小承气汤的高效液相色谱指纹图谱研究[J].中国药业,2007,16(20):2.

[2]孟岩,李焐仪,单家明,等.经典名方小承气汤物质基准的HPLC指纹图谱分析[J].中国实验方剂学杂志,2021年27卷4期,130-136页,ISTIC PKU CSCD CA,2021:国家自然科学基金项目.

[3]熊红.大黄不同煎煮时间对小承气汤化学成分及药效学影响研究[D].广州中医药大学,2012.

[4]范妙璇.复方小承气汤化学成分及指纹图谱研究[D].中国中医科学院,2008.

[5]胡晓静.小承气汤配伍机制、药效物质基础及质量控制研究[D].沈阳药科大学,2006.