攸县麻鸭 OPN基因多态性分析

李东海

（华安县华丰畜牧兽医站 福建漳州 363800）

摘要：本试验釆用PCR-SSCP方法检测攸县麻鸭的骨桥蛋白（OPN）基因第七外显子的多态性，结果显示：在攸县麻鸭OPN基因第七外显子267位点发现碱基突变（T→C），并检测出TT、TC和CC3种基因型，TT型、TC型和CC型的基因频率分别为0.220、0.430和0.350， T、C的基因频率分别为0.435和0.565。

关键词：攸县麻鸭、OPN基因、PCR-SSCP、多态性

Analysis of OPN Gene Polymorphism in Youxian

Partridge Duck

Li Donghai

（Huafeng Animal Husbandry and Veterinary Station of Hua'an County,FujianZhangzhou,363800）

Abstract:In this experiment, the PCR-SSCP method was used to detect the polymorphism of the seventh exon of the OPN gene in Youxian Partridge duck. The results showed that A base mutation (T→C) was found at position 267 of exon 7 of OPN gene in Youxian Partridge duck，and detect three genotypes of TT, TC and CC. The gene frequencies of TT, TC and CC were 0.220, 0.430 and 0.350.The gene frequencies of T and C were 0.435, 0.565.

Key words：Youxian Partridge Duck,OPN,PCR-SSCP,correlation

攸县麻鸭是我国优良蛋鸭品种，因位于湖南省攸县而得名。2006年6月被定为国家级畜禽遗传资源保护品种^[1]。骨桥蛋白是一种广泛分布于组织和细胞内，并且参与自身代谢、组织修复等功能糖蛋白^[2]。据有关报道，骨桥蛋白可以影响蛋壳形成过程及调控蛋壳的品质。Pines等^[3]发现骨桥蛋白参与蛋鸡蛋壳形成。Nys.Y等^[4]在母鸡子宫及蛋壳内发现骨桥蛋白并影响蛋壳质量。

1 材料与方法

1.1试验材料

由福建光阳蛋业股份有限公司提供的100只攸县麻鸭鸭群，用一次性真空采血管（装有抗凝剂EDTA-2Na），翅下静脉采血，血样1.5ml，血样采集完迅速放置于-20℃冰箱，保存并用来提取DNA。

1.2试验方法

由上海生工生物工程技术服务有限公司合成引物，具体为：F：5'-CAGGAAGAGGCCTTCACGAG-3'；R：5'-TGGTTACTTGCACCAATGCG-3'，片段大小342bp。PCR反应体系的总体积为20μl，其中：DNA1μl，Mix液10μl，上下游引物各0.5μl，ddH₂O8μl。PCR反应程序为：95℃预变性10min，35X(95℃变性30S,58℃退火30S,72℃延伸30S),72℃延伸10min,最后于4℃保存。PCR扩增产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测，采用硝酸银染色法洗胶，根据位置和数量条带类型进行统计。利用 Excel 软件统计基因型频率、 基因频率。

4. 结果与分析

4.1DNA检测结果

通过DNA纯度测定仪测定，攸县麻鸭DNA的OD值为1.8，满足试验要求。

4.2OPN基因的PCR扩增结果

扩增的PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测扩增效果。从图1可知，PCR扩增产物长度均在300～400bp之间，扩增效果良好，无拖尾，可进行SSCP检测。

图
1 攸县麻鸭PCR扩增图

4.3OPN基因SSCP检测和测序结果

利用OPN-1引物得到PCR扩增产物后进行SSCP后，成像仪拍照。从如图2可知，在攸县麻鸭100个体中共检测出3种基因型，定义为TT型、TC型和CC型， 其中T与C为等位基因。通过DNAstar软件分析测序结果，从图2可知，在扩增序列267bp位点处发生T→C的突变。

CC TC TC CC TC TT

图2 攸县麻鸭OPN基因片段聚丙烯酰胺凝胶电泳图

图3 攸县麻鸭OPN基因不同基因型测序图

4.4OPN基因的多态性位点统计分析

攸县麻鸭OPN基因的突变位点统计分析结果如表1：TT型、TC型和CC型的基因频率分别为0.220、0.430和0.250，TC为优势基因型。T、C的基因频率分别为0.435和0.565，C为优势基因。在基因型频率上，表现出TC>CC>TT的趋势。经χ

²适应性检验，该突变位点处于Hardy-weinberg平衡。

5.讨论

本试验通过PCR-SSCP技术检测攸县麻鸭OPN基因的多态性，在扩增序列267bp位点发现一处碱基替换（T→C），并产生TT、TC和CC3种基因型，攸县麻鸭TT型、TC型和CC型的基因频率分别为0.220、0.430和0.350。T、C的基因频率分别为0.435和0.565。在基因型频率上，呈现TC>CC>TT的趋势。经χ²适应性检验，突变位点处于Hardy-weinberg平衡。

参考文献

[1] 湖南株洲攸县麻鸭[J].水禽世界,2012,(6):37.

[2]赵文捷,徐来祥,薛慧良.黑线姬鼠OPN部分编码区结构与分子系统进化分析[J].曲阜师范大学学报(自然科学版),2011, 37 (2):84-87.

[3]Pines.M,Knopov.V,Bar.A.Involvement of osteopontin in egg shell formation in the laying chicken [J]. MatrixBiology,1995,14(9): 765-771.

[4]Nys.Y,Hincke.MT,Arias.JL,et al.Avian eggshell mineralization[J].Poultry and Avian Biology Reviews,1999, 10(3) :143-166.