积雪草中黄酮类化合物含量测定

积雪草中黄酮类化合物含量测定

张蝶,詹梦瑶,卢少华,刘柳柳,王青*

 陕西国际商贸学院  陕西咸阳  712046

摘要：为提高积雪草药材质量控制，建立紫外-可见分光光度法测定积雪草药材中黄酮类成分的定量分析方法。结果芦丁对照品溶液在0.008~0.048mg/ml范围内线性关系良好（R2=0.9991），回归方程Y = 15.246 X+0.0233，加样回收率在99.1%~100.4%之间，RSD为1.605%。所建立的方法稳定可靠，简便可行，重复性好，为进一步香橼药材质量管理控制提供依据，同时为后续黄酮类成分提取工艺研究提供评价指标。

关键词：香橼；多酚；紫外-可见分光光度法；含量测定

积雪草为伞形科植物积雪草Centellaasiatica (L.)Urb.的干燥全草，属于多年生匍匐草本植物，具有清热利湿，解毒消肿的功效，对湿热性黄疸、淋证中石淋和血淋、跌打损伤、中暑、泄泻及痈疽疮疡治疗有良好治疗的效果[1]。主要含有三萜类、挥发油类、多炔烯类和黄酮类化学成分成[2-3]。积雪草主要分布于陕西、江苏等地，可用于中暑和腹泻，修复皮肤组织的损伤等，常被用为天然的添加剂，在医药和化妆品等各个行业都被广泛应用。目前，人们主要对积雪草中的积雪草苷以及多糖类化合物的提取工艺研究较多，但有关积雪草黄酮的研究却很少。本文以积雪草为主要原料，建立积雪草药材中黄酮类成分的含量测定方法，从而为该药材的质量控制和食品深加产业提供一定的理论支撑。

1 仪器设备及试药

仪器：UV-5100紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）、BSM-120.4型电子分析天平（上海卓精电子科技有限公司）、ZK-300A高速万能粉碎机（北京中科浩宇科技发展有限公司）、CHCY-1-2L多功能恒温超声波萃取仪（诚洋生物科技有限公司）、HH-6电热恒温水浴锅（常州市金坛晨阳电子仪器厂）。

试药：积雪草购自安徽惠丰国药有限公司，经鉴定为伞形科植物积雪草Centella asiatica(L.)Urb.的干燥全草；芦丁（中国食品药品生物检定研究院，批号B22742）、无水乙醇、亚硝酸钠、氢氧化钠均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。

2实验方法

2.1 药材前处理

将积雪草的药材进行粉碎，过三号筛，装入密封袋中，保存备用。

2.2 黄酮类成分提取

精密称取适量，20倍乙醇超声提取两次，每次30min，滤过，合并滤液，浓缩至干，得积雪草总黄酮样品，备用。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备

精密称取芦丁对照品2.000mg于25ml容量瓶中，加入60%的乙醇，溶解后定容至刻度，摇匀，即得对照品溶液（0.08mg/ml）。

2.2.2供试品溶液的制备

取积雪草干燥药材粉末，过3号筛。精密称取药材粉末3.000g，置于具塞锥形瓶中，加入6倍量60%的乙醇，在500W功率下超声提取30min，过滤提取液，放冷再称定质量，补足损失重量，作为供试品溶液。

2.2.3标准曲线的绘制

精密量取芦丁对照品溶液0、1、2、3、4、5、6ml，分别放置于10ml的容量瓶中，再加入0.3ml浓度为5%的亚硝酸钠溶液，摇匀后再加入2ml浓度为2%的氢氧化钠溶液，摇匀，加蒸馏水定容至刻度，摇匀之后静置10min，将第一管作为空白对照，在波长510nm处测定样本的吸光度。结果得回归方程：Y = 15.246 X+0.0233，R2 = 0.9991，说明其符合规定，可以用于黄酮浓度的计算。

3 黄酮类成分含量测定[4]

3.1精密度试验

精密吸取对照品溶液0.5ml，按“2.2.3”项下方法操作，在510nm处连续测定吸光度值，计算RSD。结果计算得RSD=0.127%，表明仪器的精密度良好。

3.2稳定性试验

精密移取“2.2.2”项下供试品溶液0.5ml，分别在0.5、1、1.5、2、2.5h测定吸光度A。计算RSD。计算结果得RSD=0.107%。表明供试品溶液在2.5h 内

3.2重复性试验

取总黄酮样品粉末30mg，共6份，精密称定，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液并测定吸光度值。结果见表3。计算结果得 RSD=0.354%，表明样品重复性良好。

3.4加样回收率

精密称取已知含量的香橼药材粉末6份，按照“2.1”项下提取多酚成分并制备供试品液，分别取供试品溶液1ml，并各加入0.2ml对照品溶液，测定吸光度，并计算回收率。

表1 加样回收率试验结果

结果计算黄酮类成分的平均回收率为99.9%，RSD=1.62％，表明此方法回收率良好。

3.5样品含量测定

取3批积雪草药材，精密称定，按照建立方法测定吸光度，计算多酚类成分含量，结果分别为15.62mg/g，15.70 mg/g，15.69 mg/g，平均值15.67gm/g。

4小结

本实验建立定量方法稳定、可靠、重复性良好，为积雪草药材中黄酮类成分提供了一种可靠的测量方法，同时为进一步研究积雪草药材的质量控制和临床新产品研究开发利用提供了数据支持。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中国药典:2020年版:一部[S].北京:中国医药科技出版社,2020:296.

[2] 王翕,李早慧,孙旭.积雪草的开发研究[J]吉林农业,2017(13):91-92.

[3] 彭晶玉,丛晓东,张云,等.积雪草的化学成分和质量控制研究进展[J].中国民族民间医药,2011,(14):49-50.

[4] 罗爱勤,曹颖男,钟春燕.蓝刺头中总黄酮的含量测定[J].2022.12(15)75-77+90.

基金项目： 陕西省大学生创新创业项目（编号：S202113123023）、陕西省教育厅项目（编号：21JK0517）、陕西省科技厅项目（编号：2021SF-386）

作者简介：张蝶，女，陕西国际商贸学院医药学院，中药学2018级；

*指导教师：王青（1987-）女，讲师，硕士，主要从事中药化学及质量控制的教学与科研工作；