制作术中优质冰冻切片的方法及技巧

制作术中优质冰冻切片的方法及技巧

刘林华

新疆维吾尔自治区人民医院 新疆 乌鲁木齐 830001

摘要：目的：探讨针对术中优质冰冻切片的制作方法及技巧。方法：选取2021年5月至2022年8月该时间段本院送检标本100例，并对冰冻切片的制作方法以及技巧进行观察，并对其切片的效果进行观察。结果：研究结果显示，在使用优质方式对冰冻切片进行制作后，其切片刻在规定的时间内完成，切片仍然可以保存完整，未出现冰晶、裂痕、褶皱以及图片的现象，在对其燃热后，切片的结构形态更清晰，核质对比鲜明，封固后仍保持美观，不存在溢胶及棋牌的现象，冰冻切片与石蜡切片的符合率有显著的提升。结论：采用冰冻切片的方式需要技术人员有谨慎的态度，并在实践过程中针对不同的制片方式，才能更好的解决冰冻切片中遇到的问题。

关键词：冰冻切片；技巧；方法

引言：

所谓冰冻切片，就是将手术中的新鲜组织放入冰冻切片机中，迅速冻结至某种程度后，进行切片。使用包埋剂将新鲜组织会快速冷冻，并且保留了最大限度的酵素活动，因此被大量用于临床。快速的冰冻组织学检查已经成为了医生进行疾病的诊断和制定合适的外科治疗计划的基础，一份高品质的冰冻组织学检查可以确保医生做出准确的诊断，但是一份劣质的冰冻组织会让医生难以做出准确的判断，并且很容易导致医生的误诊和漏诊，因此，高品质的冰冻切片是非常重要的。本文主要介绍了冷冻切片的技术要点，注意事项，方法和技巧。

一、资料与方法

1.1一般资料

选取2021年5月至2022年8月该时间段本院送检标本100例，标本类型主要包括子宫、卵巢、输卵管、淋巴结等，多有组织均为新鲜切除，未经过任何处理。

1.2方法

试剂： OCT包埋剂， AF复合固定液（45毫升无水乙醇，10毫升冰乙酸），苏木素，分化液，返蓝液，伊红组染色液。

仪器与材料：莱卡 CMI950冰冻机、日本费瑟（Feather）式刮刀、世泰（St）载玻片。

方法：采集手术中所需的新鲜组织，选择适宜的尺寸和厚度， OCT包裹后放置在冰柜上，用冰锤轻轻挤压，使冰锤所挤压的组织变得平坦，冰柜打开，使其变至白色，以4微米为宜，在室温下迅速将干净的玻璃片贴在此纸片上，然后在 AF溶液中静止1分钟，彻底冲洗，然后苏木素染色，分化，返蓝，伊红染色，酒精脱水，透明封片，再用酒精（75~85%~95%~100%）干燥，透明封片。

1.3统计学方法

在这一次的观察和研究中，笔者使用了SPSS25.0作为数据统计分析工具，通过t检验对比符合率的差异，并明确两组之间差异的显著性，以从数据层面获得有效的量化解释，以验证制作术中优质冰冻切片的方法及技巧。

二、结果

研究结果显示，在使用优质方式对冰冻切片进行制作后，其切片刻在规定的时间内完成，切片仍然可以保存完整，未出现冰晶、裂痕、褶皱以及图片的现象，在对其燃热后，切片的结构形态更清晰，核质对比鲜明，封固后仍保持美观，不存在溢胶及棋牌的现象，冰冻切片与石蜡切片的符合率有显著的提升。

表一  100例标本冰冻切片诊断的符合率

三、结论

在平时的工作中，对制作冷冻切片时应注意的几个问题进行了归纳，并对其进行了阐述。

1.将麦迪克斯实验室引入样本病理学，通过与医院各部门的数据库建立联系，将申请单和样本发送到病理科中，用扫描仪进行识别，产生相应的样本编号，并在此基础上进行验证[1]。在将样本送出的时候，一定要将样本放在一个清洁的样本袋中，然后将样本快速地带到病理科，避免将样本浸泡在生理盐水、固定液和酒精中，以防止冰晶的产生。在样本收到之后，采材医生和技术人员都要将样本袋中的数据和病理申请单中的数据进行比对，这是进行冰冻制片的关键步骤。

2.采集标本采集标本时，应清洁、无任何污染，应使用干燥的纱布，使标本中的血水完全吸收，避免出现冰晶、空洞等现象。在选择材料的时候，一定要注意使其最大切面平坦程度，选择的材料应该是2 cmX1.5 cmX0.3cmb3，材料的厚度要适度，如果组织的体积过大，很难进行贴片，如果组织的体积过小，则会影响到检查的结果。

3.在包埋之前，使用干燥的纱布尽可能的吸收组织中的水份，使用 OCT (PEG与 PEG的水溶性混合液）作为埋剂，其优点是减少皱纹与刀痕，减少冰晶生成，增加切片的连贯性。将取出的纸片置于冷冻支架中心，加入一定量的 OCT后，立即投入冷冻装置。

4.冰冻的时间及冰冻的温度

（1）冷藏温度：通常冷藏切刀的低温设置在-29℃，24小时后处于待机的状态，在冷藏过程中，需要对所要检测的组织进行相应的冷藏处理，如：含有油脂的组织在-30℃到-25℃之间，而含有油脂的乳腺则在-30℃到-22℃之间，子宫在-25℃到-23℃之间，肌肉组织和皮肤在-26℃到-22℃之间，淋巴结在-20℃到-18℃之间。

（2）冰冻时间应视所需的冰冻时间而定，高脂的冰冻8-15分钟，高密度的冰冻时间不能太久，否则会导致冰冻，给切取带来麻烦。

5.切面内含物从四个星期起冰冻，由内至外由内而外，、直至完全变成白色，为切面的最佳时间。将冰冻托放在刀头上，然后慢慢地后撤，直到适当的位置，才可以进行粗略的切割，入刀的范围不能过大，需要的时候可以进行4-6 um的切割，在进行细分的时候，要注意要慢慢地、均衡地切割，将组织平整，直到露出最大的切面，在需要的时候，可以进行多个切面的切片，避免因为没有切到位而出现误诊、漏诊的情况[2]。

6.固定是制片质量保证的关键步骤，也是不容忽视的一步，确定的最好时间是将已粘合的胶片置于确定溶液中，确定时间可以使胶片得到迅速的稳定，确定时间可以对胶片上的多种酶类起到很好的作用，使胶片上的蛋白得到了沉淀，从而避免了胶片上的自溶和腐烂现象，使胶片保持在其原本的形状上。

7.由于手术中冷冻样本的大量增加，冷冻切片的着色器的应用就变得十分必要，因为这样可以让技师边做边做其它工作，不仅能确保冷冻切片的着色，还能防止技师手足无措造成的错误，能同步进行制片和着色，节省时间，提高效率。

染片时应特别留意：①当细胞浆与细胞核间的反差不明显时，应及时更换苏木素、伊红及分化液。②澄清液体澄清后必须湿润密封，不然在显微镜下看不清。

总之，在进行术中冰冻切片的生产过程中，不仅要具备严谨的工作的精神，还要具备精湛的技能，它要求在工作中要具备良好的观察力、思维能力以及良好的学习能力，还要将理论与实践相结合，要根据具体的情况，采取相应的制片方式，不断地去寻找问题并加以处理，唯有如此，经过持续的工作，才能生产出高质量的冰冻切片，为病理学的确诊工作奠定良好的基础。

参考文献：

[1] 徐海晶. 一种罗氏沼虾性腺组织冷冻切片的制作方法:, CN114414346A[P]. 2022.

[2] 杨芳. 快速石蜡切片与冰冻切片在卵巢病变术病理诊断中的应用[J]. 中国保健营养, 2021, 031(012):65.