气相-质谱联用仪测定苯磺贝他斯汀中对甲苯磺酸酯的含量

气相-质谱联用仪测定苯磺贝他斯汀中对甲苯磺酸酯的含量

赵健1  牛犇1  褚青松1贾志祥1

 （1 江苏联环药业股份有限公司 江苏 扬州 225000）

摘要：目的：建立测定苯磺酸贝他斯汀中对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的含量方法。方法：采用5%苯基-甲基聚硅氧烷为填料的毛细管柱（30m*0.25mm*0.25μm）为色谱柱；进样口温度为300℃；载气为氦气，流速为1.0mL/min；升温程序为初始温度150℃保持3min，以10℃/min升至300℃，保持30min；采用分流进样模式，分流比为20:1；GC-MS接口温度为300℃；离子源温度为230℃；四极杆温度为150℃；扫描离子为186、200；扫描模式为SIM模式；溶剂延迟2min；进样量为1μL。结果：该方法检测灵敏度高，硫酸二甲酯的线性范围在限度浓度的20%~200%范围内线性关系良好；回收率、重复性、进样精密度与准确度均良好。结论：该方法灵敏度高、精密度及准确度良好，可用于苯磺贝他斯汀中对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的含量测定。

关键词：气相-质谱联用仪；苯磺贝他斯汀；对甲苯磺酸甲酯；对甲苯磺酸乙酯

苯磺贝他斯汀（Bepotastine besilate）是日本Tanabe Seiyaku 公司和日本Ube Indust ries 公司联合开发的组胺H1受体拮抗剂，用于治疗过敏性鼻炎和荨麻疹。本品是一口服强效和长效的组胺H1受体拮抗剂，具血小板活化因子（PAF）拮抗剂样作用；人体外周血单核细胞的实验表明，此化合物的抗过敏作用可能与白介素-5的介导有关；苯磺贝他斯汀可快速、有效地抑制过敏性鼻炎的3个主要症状：打喷嚏，流鼻涕和鼻塞。本品对组胺H1受体有高度选择性，并能抑制嗜酸粒细胞浸润。嗜酸粒细胞释放细胞毒素蛋白，并致使浸润部位发炎。本品能抑制嗜酸粒细胞浸润至外周组织，因此本品对缓解鼻粘膜的炎症反应，即鼻塞较现有的药物有效。另外，本品很少进入脑内，嗜睡和其它不良反应极小，具有优良的药效学作用和临床效果。

苯磺贝他斯汀的生产中使用对甲苯磺酸，遇到醇类可能产生潜在致突变杂质对甲苯磺酸酯，参考ICH M7指导原则，按照TTC 1.5μg/天计算，结合苯磺贝他斯汀的最大日用量，对甲苯磺酸类的限度为0.0075%。

本文针对苯磺贝他斯汀，由合成工艺可能引入的对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯进行同时测定，以确保药品的安全、有效和质量控制。

1试剂与仪器

1.1试剂

对甲苯磺酸甲酯（阿拉丁）；对甲苯磺酸乙酯（阿拉丁）；甲醇（欧姆尼）；乙酸乙酯（国药）；无水硫酸钠（天津光复化学）；苯磺贝他斯汀（江苏联环药业股份有限公司自制产品） 

1.2仪器

Agilent 8860+5977B气相-质谱联用仪；XS-205型电子天平（梅特勒）

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：5%苯基-甲基聚硅氧烷为填料的毛细管柱（30m*0.25mm*0.25μm）；样口温度为300℃；载气为氦气，流速为1.0mL/min；升温程序为初始温度150℃保持3min，以10℃/min升至300℃，保持30min；采用分流进样模式，分流比为20:1；GC-MS接口温度为300℃；离子源温度为230℃；四极杆温度为150℃；扫描离子为186、200；扫描模式为SIM模式；溶剂延迟2min；进样量为1μL。

2.2溶液的制备

稀释剂：10%甲醇水溶液

贮备液：取对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯各适量，精密称定，用甲醇（过分子筛除水）定量稀释成每1ml含对甲苯磺酸甲酯约150μg和对甲苯磺酸乙酯约150μg的混合溶液，作为杂质贮备液。

对照品溶液：吸取贮备液1ml于100ml容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，作为对照品溶液。取2ml对照品溶液于5ml离心管中，加入2ml乙酸乙酯，振摇后静置，取上层液1ml过无水硫酸钠，待分析。

供试品溶液：称取苯磺贝他斯汀40mg于5ml离心管中，加入2ml稀释剂，超声溶解，再加入2ml乙酸乙酯，振摇后静置，取上层液1ml过无水硫酸钠，待分析。

2.3专属性

贮备液A：取对甲苯磺酸甲酯适量，精密称定，加甲醇稀释配制成每1ml中约含对甲苯磺酸甲酯150μg的溶液，作为贮备液A。

贮备液B：取对甲苯磺酸乙酯适量，精密称定，加甲醇稀释配制成每1ml中约含对甲苯磺酸乙酯150μg的溶液，作为贮备液B。

稀释剂：10%甲醇水溶液

对照品溶液：吸取储备液A和B各1ml于100ml容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，作为对照品溶液。

取2ml对照品溶液于5ml离心管中，加入2ml乙酸乙酯，振摇后静置，取上层液1ml过无水硫酸钠，待分析。

供试品溶液：称取苯磺贝他斯汀40mg于5ml离心管中，加入2ml稀释剂，超声溶解，再加入2ml乙酸乙酯，振摇后静置，取上层液1ml过无水硫酸钠，待分析。

加标供试品溶液：称取苯磺贝他斯汀40mg于5ml离心管中，加入2ml对照品溶液，超声溶解，再加入2ml乙酸乙酯，振摇后静置，取上层液1ml过无水硫酸钠，待分析。

分别取乙酸乙酯、对照品溶液、供试品溶液和加标供试品溶液进样。结果对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯保留时间分别为5.049min、5.792min，分离度为13.0。

2.4线性

稀释剂：10%甲醇水溶液

线性母液：取对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯各适量，精密称定，用甲醇（过分子筛除水）定量稀释成每1ml含对甲苯磺酸甲酯约150μg和对甲苯磺酸乙酯约150μg的混合溶液，记为作为线性母液。

按表配制线性溶液：

分别取上述线性1#至6#溶液2ml于5ml离心管中，依次加入2ml乙酸乙酯，振摇后静置，取上层液过无水硫酸钠后进样分析。结果见表1：

表 1 线性关系

2.5定量限检测限

取对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯各适量，用甲醇（过分子筛除水）定量稀释成每1ml含对甲苯磺酸甲酯约1.5μg和对甲苯磺酸乙酯约1.5μg的混合溶液。取该混合溶液用稀释剂[10%甲醇水溶液]逐级稀释，照专属性进行前处理后进样，记录色谱图。将信噪比大于10时作为定量限浓度，信噪比大于3时作为检测限浓度。结果见表2

表 2 定量限、检测限

由结果可知，对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的定量限、检测限浓度均远低于限度浓度，说明此色谱条件能将样品中对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯有效检出，方法灵敏度较高。

2.6回收率

照线性项下配制2#、4#、5#溶液，作为低浓度（50%限度）、中浓度（100%限度）和高浓度（150%）的溶液。

回收率样品处理：称取苯磺贝他斯汀40mg，置5ml离心管中，共10份。其中第1份加入2ml稀释剂，超声溶解，加入2ml乙酸乙酯，振摇后静置，取上层液1ml过无水硫酸钠，作为空白供试品溶液。其余每3份为一组，分别加入低浓度（50%限度）、中浓度（100%限度）和高浓度（150%）的溶液2ml，超声溶解，再依次加入2ml乙酸乙酯，振摇后静置，取上层液1ml过无水硫酸钠，作为不同浓度的加标供试品溶液。

取上述加标供试品分别进样，按外标法计算加样回收率。结果显示，对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯回收率范围均在80%~120%之间，RSD分别为5.59%和3.86%，符合验证要求。

2.7进样精密度

稀释剂：10%甲醇水溶液

对照品溶液：取对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯各适量，精密称定，用甲醇（过分子筛除水）定量稀释成每1ml含对甲苯磺酸甲酯约150μg和对甲苯磺酸乙酯约150μg的混合溶液，记为作为贮备液。取该贮备液1ml于100ml容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，作为对照品溶液。

取对照品溶液2ml于5ml离心管中，加入2ml乙酸乙酯，振摇后静置，取上层液1ml过无水硫酸钠后连续进样6次，记录色谱图。结果对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯进样精密度良好，RSD分别为4.48%、4.46%。

2.8重复性

加标供试品溶液：称取苯磺贝他斯汀40mg于5ml离心管中，平行6份，分别加入2ml对照品溶液，超声溶解，再依次加入2ml乙酸乙酯，振摇后静置，取上层液1ml过无水硫酸钠，待分析。按外标法计算回收率。结果显示，6份加标供试品溶液中对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯测得回收率RSD分别为4.12%和3.63%，符合验证要求，说明本方法的重复性良好。

2.9中间精密度

由不同实验人员在不同实验时间，参考重复性实验项下，同法配制对照品溶液与加标供试品溶液，检测加标供试品溶液中杂质回收率。实验结果显示，由不同人、不同天配制加标供试品溶液进行试验，测得加标供试品溶液中对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的回收率RSD（n=12）均小于10%，符合验证要求，中间精密度良好。

3讨论与结论

3.1色谱条件耐用性试验

本研究进行了色谱条件耐用性试验，将上述实验条件分别作如下细小改变：N2流速±0.1 ml/min；柱温±2℃；改变进样口温度及检测器温度并做系统评价。

实验结果显示，色谱条件微小改变，加标供试品溶液中对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的测得回收率RSD分别为3.48%和4.26%，符合验证要求，表明本方法耐用性良好。

3.2小结

本方法能够快速、有效、准确和可靠的分离检测出苯磺贝他斯汀原料药中对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯，有利于提高苯磺贝他斯汀的产品质量，提高患者用药安全性。