病理小科普之冰冻切片

病理小科普之冰冻切片

李劲松

新乡医学院第一附属医院 河南 新乡 453100

冰冻切片这个词很多人都没听过，感到很陌生，其实这是较难掌握的病理实验技术之一，是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。

一、冷冻切片技术的目的

术中快速病理诊断不仅能判定病变的性质，还决定了患者手术的方式。冰冻切片为临床医师提供下一步的手术方案及治疗提供依据与指导。对于组织化学上酶活性的显示，利用冷冻切片对肾小球内抗原和抗体复合物的性质及分布进行的诊断等。

什么情况需要做冰冻切片呢？简单的说，就是外科医生希望在手术过程中马上了解病变的性质，以便及时确定手术范围，并做出相应的处理，病理诊断的结果直接关系到手术台上患者的下一个治疗步骤。

如果没有快速切片病理诊断，乳腺癌、卵巢癌、甲状腺癌患者一般会做两次手术，先切包块，5天后常规病理诊断为恶性后，再进手术室一次，麻醉一次，重新拆开缝线再做手术一次。并且两次手术的并发症多于一次手术。这样的结果是患者会经历梦魇样经历，一个星期内做两次手术，患者会付两次手术的钱，住院费大大增加，患者的住院时间大大延长。

二、冰冻切片的优点

1、简便，快速，用时短。在临床上，手术的摘出物需急速诊断时，用此法从采取标本到切片制成，可以在15分钟之内完成。切片前可以不需要对组织固定、脱水、透明、包埋等手续即可进行切片，减少了一些中间环节。

2、组织变化不大。能较好地保存脂肪、类脂等成分；在免疫组织化学研究中有利于组织抗原性的保存；有些研究为了保存某些酶的活性也需要采用此法。

但是也有5%到10%左右的病人术中冰冻病理有误差，比如当时术中报的结果是良性的，术后常规病理明确是恶性的，因此第一次手术范围不够而需要二次手术。

三、冰冻切片的制作方法和步骤

1、取材

解剖之后迅速取出所需的新鲜组织，用干纱布或滤纸擦干后不需固定直接取材（24×24×2mm*）,以防形成冰晶造成切片中形成形状不一的空泡,使细胞内结构移位。

2、冷冻切片

（1）取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上冰冻，用吸热器压住组织，至包埋剂与组织冻结成白色冰体即可切片（1~3分种）。

（2）将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。

（3）调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5 ～10μm间。

（4）调好防卷板。制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。切片时，以切出完整、平滑的切片为准。切好的组织在干净的玻片上黏附时顺着一个方向稍微用力轻轻一带 ,可避免组织摊片过程中皱折 ,保证组织结构的完整及切片的美观。

3、切片后固定

将切好的冰冻片用预冷的组织固定液固定30min，蒸馏水洗3-5次，洗干净固定液，自然晾干后进行下一步实验或-20℃保存

四、冰冻切片操作的注意事项

1、防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干净，需经常用毛笔挑除切片残余和用柔软的纸张擦。有时需要每切完一张切片后就用纸擦一次。因为这个地方是切片通过和附贴的地方，如果有残余的包埋剂粘于刀或板上，将会破坏甚至撕裂切片，导致切片不能完整切出。

2、多例多块组织同时需做冰冻切片时，可各自放于不同的支承器上，于冷冻台上冻起来，然后依据不同的编号，依序切片，这样做既不费时也不会乱。

3、放置组织冰冻前，应视组织的形状及走势来放置，所谓“砍柴看柴势”，切片也是如此，如果胡乱放置，就不能收到很好的效果。

4、组织块不需要经各种固定液固定，尤其是含水的固定液，在没有达到固定前，更不能使用。临床快速冰冻切片，不需要预先固定，一是为了争取时间，二是固定了的组织，反而增加了切片的难度。如果使用未完全固定的组织做冰冻切片，就会出现冰晶。这是因为含水的固定液在组织未经固定前，其中的水分也可渗入到组织中去，当冰冻发生时，这些水分就存留于组织中，形成了冰晶。

5、切片时，如果发现冰冻过度，可将冰冻的组织连同支承器取出来，在室温停留片刻，再进行切片，或者用口中哈气，或者用大拇指按压组织块，以此来软化组织，再行切片。另者，调高冰冻点。

6、用于附贴切片的载玻片，不能存放在冷冻处，在正常室温下存放即可。因为当附贴切片时，从室温中取出的载玻片与冷冻箱中的切片有一种温度差，当温度较高的载玻片附贴上温度较低的切片时，由于两种物质间温度的差别，它们碰撞在一起时，分子彼此间发生转移而产生了一种吸附力，使切片与载玻片牢固地附贴在一起。如果使用冷藏的载玻片来附贴切片，由于温度相同，就不会发生上述的情况。

冰冻切片病理诊断对手术治疗有重大帮助和指导意义，尤其是对肿瘤良恶性的定性判断，通过这样的技术不仅可以确定手术范围，还可以快速确定病情，减轻病人在治疗过程中的身体负担，这项技术也是广大病人的福音。