简介：摘要目的建立测定脊髓灰质炎病毒(poliovirus，PV)滴度的结晶紫染色法，并对该法进行验证。方法基于PV的半数细胞培养感染量(50% cell culture infective dose，CCID50)，用结晶紫染色和酶标仪确定PV的致细胞病变效应(cytopathic effect，CPE)，并验证该法的准确度、精密度、线性范围和耐用性。分别采用建立的结晶紫染色法和传统的显微镜观察法测定66批口服Ⅰ型Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗的病毒滴度，通过Pearson相关分析评价2种检测方法的相关性。将细胞板浸泡液盲传3代，观察培养物的CPE，并通过逆转录PCR确定病毒灭活情况。结果用建立的方法测定理论滴度8.00、6.00和4.00 lgCCID50/ml的PV样品，回收率为98%～104%。细胞板内和板间测定结果的变异系数(coefficient of variation，CV)为0%～7.85%，同一工作日和不同工作日测定结果的CV分别不超过6.44%和5.27%，不同实验人员测定结果的CV不超过5.10%。该法测定PV滴度的线性范围为2.00～8.00 lgCCID50/ml。该法具有较好的耐用性，以不同细胞浓度(F＝1.624，P＝0.215)或不同培养时间(F＝2.731，P＝0.055)培养对PV滴度的测定结果没有影响。该法与显微镜观察法的检测结果具有相关性，Pearson相关系数0.918。实验用细胞板的浸泡液在Hep-2细胞上盲传3代后，培养物未观察到CPE，逆转录PCR测定结果为阴性。结论建立的结晶紫染色法具有较好的安全性、准确度、精密度和耐用性，适用于口服脊髓灰质炎减毒活疫苗的病毒滴度测定。