简介：目的：克隆并表达caspase-8／10相关RING结构域蛋白1（CARP1）基因，检测其泛素连接酶活性。方法：提取结肠癌HCT116细胞总RNA，RT-PCR扩增CARP1基因，将其克隆到真核表达载体pcDNA3-Flag中，序列正确的阳性克隆进行扩增，提取质粒转染至293T细胞中进行瞬时表达，通过体内泛素化检测其泛素化酶活性，通过萤光素酶报告基因的方法检测其对NF-kB转录活性的影响，利用细胞生长曲线检测CARP1基因对结肠癌细胞生长的影响。结果：免疫印迹实验表明CARP1基因在293T细胞中获得有效表达；免疫共沉淀实验表明，当CARP1存在时，受体相互作用蛋白1（RIP1）被泛素化；萤光素酶实验结果表明CARP1抑制肿瘤坏死因子a（TNFa）引起的NF-kB报道基因的激活；通过生长曲线发现CARP1能促进结肠癌细胞系HCT116生长，并能部分抵抗顺铂抑制细胞生长的作用。结论：构建的人CARP1基因真核表达载体在293T细胞中获得表达，表达产物具有RIP1泛素连接酶的活性，可抑制TNFa引起的NF-kB报告基因的激活，并且促进结肠癌细胞的生长，为进一步的基因功能研究奠定了基础。

简介：摘要肿瘤的发生和发展是多因素、多步骤的复杂过程。而泛素化是多步级联的蛋白质修饰过程，是维持真核细胞内稳态的重要机制。其中E3泛素连接酶家族是泛素-蛋白酶体系统的重要成分，可催化多种蛋白底物的泛素化，促进其被蛋白酶体系统降解。迄今为止，E3泛素连接酶在多种肿瘤细胞生物学过程中发挥着重要作用，包括细胞增殖、凋亡及周期调控。而HECT型E3泛素连接酶作为E3泛素连接酶最早被研究的一种，其主要参与蛋白质翻译后转录调控的泛素化修饰过程。本文就HECT型E3泛素连接酶及其在肿瘤中作用的现状和最新研究进展进行综述。

简介：目的探讨泛素连接酶Hrd1与L型氨基酸转运载体1（LAT1）在胃癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化、反转录酶-聚合酶链锁反应（RT-PCR）及Westernblotting检测62例胃癌及癌旁组织中Hrd1和LAT1的表达水平,并分析2种蛋白表达的相关性及与胃癌临床病理特征的关系。结果Hrd1、LAT1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率分别为54.8%（34/62）和56.4%（35/62）,明显高于癌旁正常组织的25.0%（5/20）和20.0%（4/20）,差异均有统计学意义（P〈0.05）。Hrd1在胃癌组织中的表达仅与肿瘤大小有关（P〈0.05）,LAT1表达与肿瘤大小、临床分期有关（P〈0.05）。RT-PCR检测显示,胃癌组织中Hrd1与LAT1的相对表达量分别为4.22±0.83和5.80±1.72,高于癌旁组织的1.14±0.39和1.32±0.77（P〈0.05）。Westernblotting检测显示,胃癌组织中Hrd1和LAT1的相对表达量分别为0.855±0.153和0.896±0.148,高于癌旁组织的0.357±0.178和0.439±0.136（P〈0.05）。Hrd1与LAT1蛋白的表达水平呈正相关（r=0.820,P〈0.001）。结论Hrd1与LAT1在胃癌组织中的表达均高于癌旁正常组织,提示两者可能在胃癌的发生、发展中发挥重要的作用。

简介：摘要E3泛素连接酶(ubiquitin ligase enzyme，E3)通过调控细胞生物学过程的关键蛋白，参与肿瘤的发生发展。研究结果表明，环指家族(RING-finger)作为最大的E3家族，可以作为抑癌或促癌因子在肝细胞肝癌(HCC)中发挥重要作用。本文对RING-finger E3s在HCC中作用机制，以及靶向治疗中的应用进行综述，为HCC的研究提供新思路。

简介：摘要目的探讨泛素连接酶FBW7是否在肝癌细胞HepG2中参与泛素化修饰锌指转录因子Snail而影响侵袭和转移。方法通过转染沉默HepG2细胞(购自武汉普诺赛生命技术公司)FBW7的表达48 h后，实验组为沉默FBW7的HepG2细胞，对照组为空白载体转染，分别检测FBW7、Snail mRNA及蛋白表达。通过划痕实验和Transwell方法检测下调FBW7对HepG2细胞侵袭和转移的影响。组间比较采用t检验。结果转染沉默HepG2细胞FBW7基因表达后，FBW7 mRNA(0.31±0.06比0.98±0.25，t＝－7.813，P<0.05)及蛋白(0.29±0.03比1.00±0.00，t＝－63.967，P<0.05)表达均下调，差异有统计学意义；锌指转录因子Snail mRNA(1.59±0.06比0.99±0.07，t＝18.630，P<0.05)及蛋白(1.75±0.20比1.00±0.00，t＝11.323，P<0.05)表达均上调，差异有统计学意义；划痕实验显示HepG2细胞迁移能力增加(256.00±35.21比185.00±22.45，t＝4.855，P<0.05)，Transwell实验显示HepG2细胞穿透数目增多[(271.00±55.32)个比(162.00±33.14)个，t＝4.138，P<0.05]，差异均有统计学意义。结论FBW7可能通过泛素化修饰Snail而抑制肝癌细胞HepG2的侵袭转移。

简介：目的：α1-抗胰蛋白酶（AAT）缺乏症是一种常染色体隐性遗传病，其特征是错误折叠的AAT突变体在肝细胞内质网内聚集及血清AAT水平降低，并由此引发肝脏及肺部疾病。AAT的Z型突变（ATZ）是造成AAT缺乏的最常见突变类型。有研究已经证实泛素-蛋白酶体通路参与ATZ的降解。Hrd1是一种定位于内质网膜的泛素连接酶（E3），本文旨在研究Hrd1是否可以通过内质网相关降解通路促进ATZ的降解。

简介：摘要目的筛选含有WW结构域的泛素蛋白连接酶1(WWP1)相互作用蛋白，探讨WWP1和依托泊苷诱导蛋白24(EI24)对肝癌细胞增殖的影响。方法利用酵母双杂交的方法筛选与WWP1相互作用的蛋白，并利用免疫共沉淀来进行相互作用验证。通过体内泛素化实验验证泛素连接酶WWP1与EI24酶和底物的关系。以慢病毒感染的方法建立WWP1和EI24稳定过表达或敲低表达的肝癌细胞系。通过细胞增殖实验、平板克隆实验和裸鼠成瘤实验检测WWP1和EI24对肝癌细胞增殖的影响。结果WWP1可以与底物EI24相互作用，并能够在体内将EI24泛素化降解。成功构建稳定过表达或敲低表达的WWP1和EI24的肝癌细胞系HepG2。在HepG2细胞中，过表达WWP1可以降低内源EI24的蛋白水平，而敲低WWP1可以使EI24蛋白水平增加。细胞计数盒8(CCK-8)法检测结果表明，在36 h时，WWP1过表达组和shWWP1组细胞的相对增殖活性分别为(347.00±8.15)%和(187.08±4.86)%，与对照组(270.33±15.01)%比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。在36 h时，EI24过表达组和shEI24组细胞的增殖活性分别为(183.75±8.11)%和(317.33±9.60)%，与对照组(270.33±15.01)%比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。克隆形成实验结果显示，对照组、WWP1过表达组和shWWP1组的克隆形成数分别为(52±7)个/视野、(76±4)个/视野和(19±3)个/视野，WWP1过表达组细胞克隆形成明显增多(P<0.05)，而敲低WWP1后细胞克隆形成较对照组减少(P<0.05)。对照组、EI24过表达组和shEI24组的克隆形成数分别为(38±4)个/视野、(10±3)个/视野和(69±7)个/视野。与对照组比较，过表达EI24使细胞克隆形成明显减少(P<0.05)，敲低EI24的表达使细胞克隆形成明显增多(P<0.05)。裸鼠体内实验结果显示，经过4周同等条件喂养后，对照组、WWP1过表达组和shWWP1组的裸鼠移植肿瘤体积分别为(1 400.00±43.71)mm3、(2 636.67±290.45)mm3和(642.17±36.00)mm3，差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组、WWP1过表达组和shWWP1组的裸鼠移植肿瘤重量分别为(1.23±0.08)g、(2.05±0.17)g和(0.88±0.09)g，差异均有统计学意义(P<0.05)。WWP1过表达组细胞成瘤能力明显增强，shWWP1组成瘤能力明显减弱。对照组、EI24过表达组和shEI24组的裸鼠移植肿瘤体积分别为(1 245.17±93.10)mm3、(662.17±60.88)mm3和(1 986.67±226.75)mm3，差异有统计学意义(P<0.05)。对照组、EI24过表达组和shEI24组的裸鼠移植肿瘤重量分别为(1.15±0.04) g、(0.85±0.02)g和(1.73±0.05)g，差异有统计学意义(P<0.05)。EI24过表达组细胞成瘤能力明显减弱，shEI24组成瘤能力明显增强。结论WWP1可以靶向底物EI24进行泛素化降解，并促进肝癌细胞的增殖。

简介：目的评价连接酶链反应(LCR)技术对尿液中淋病双球菌诊断的意义。方法对在STD门诊就诊的276例尿道/宫颈炎患者进行分泌物细菌培养及尿液淋球菌LCR检测,对两项结果不符合的标本进行聚合酶链反应(PCR)检测,确定细菌培养、LCR法检测尿液中淋球菌的敏感性、特异性。结果276例患者中24例LCR检测阳性(8.7%),21例培养阳性(7.6%)。5例两项结果不符合者进行聚合酶链反应检测。结果表明LCR的敏感性及特异性分别为92.3%,100%。结论LCR分析法检测尿液中的淋球菌具有较高的敏感性及特异性。

简介：摘要目的LCR与PCR在检测解脲支原体（UU）泌尿生殖感染中的临床意义与差别，方法用LCR法与PCR法对232份临床病历进行检测UU，其中201份来源于男性尿道拭子和女性宫颈拭子，对两种检测方法的检测结果进行了分析。结果LCR检测法检测232份标本，UU阳性率为29%（69/232），PCR法检测232份标本，阳性率为23%（55/232）。LCR与PCR检测有明显差异（P〈0.05〉，结论LCR用于临床男性尿道拭子和女性宫颈拭子在诊断泌尿生殖感染中有极其重要意义。

简介：[目的]研究1种既高度敏感又高度特异的淋球菌和沙眼衣原体的实验室诊断方法.[方法]采用连接酶链反应技术(LCR)对受检者的尿液标本进行淋球菌和沙眼衣原体的检测.[结果]在1128份标本中,共检测出淋球菌阳性样品8份,阳性检出率为0.71%(8/1128),沙眼衣原体阳性标本38份,阳性检出率为3.37%(38/1128),其中共有5份标本为淋球菌和沙眼衣原体双阳性标本,阳性检出率为0.44%(5/1128).[结论]作为1种探针检测技术,连接酶反应技术可用于淋球菌、沙眼衣原体等多种病原体的实验室检测.

简介：目的与细胞培养和LCR比较考察6种国产PCR试剂盒在检测性传播疾病门诊患者标本沙眼衣原体的诊断价值。方法在北京、上海、南京、天津5家临床医院性传播疾病门诊收集到673份尿道／宫颈拭子标本，分别进行沙眼衣原体培养和PCR检测，对结果不相符合的标本采用连接酶链反应(LCR)复检，比较分析检测结果。结果合格病例616例，36份培养法检测阳性6．3％，PCR检测阳性率分别为23．5％-28．7％。与培养结果比较，各种PCR检测的敏感性均在90％以上。LCR复核标本200份，与之相比，PCR检测的敏感性为83．9％-98．6％，特异性66．7％-94．7％，YI指数0．523-0．881。其中PCR2结果符合性最好(YI指数0．881)。综合分析发现国产PCR技术检测沙眼衣原体的敏感性均在85％以上，特异性均在95％以上。结论国产PCR技术检测尿道／宫颈拭子沙眼衣原体具有较高的敏感性与特异性，可以用于临床检验，实验率质控与监督是本方法得以正确应用的关键。

简介：无

简介：摘要泛素-蛋白酶途径可调节多种细胞过程，近年来以该途径为导向的研究逐渐增多。特异性蛋白酶7作为其调节泛素化动力学的关键成分——去泛素化酶家族成员之一，参与病毒复制、肿瘤、神经系统病变、炎症反应等多种疾病的相关蛋白调控。在过去十多年进行了一系列的相关疾病及其抑制剂研究，一些抑制剂已经初步显现出其对肿瘤、炎症等疾病的治疗意义。本文就特异性蛋白酶7的结构、功能及其与疾病的关联和其抑制剂进行综述。

简介：摘要本文报道SUCLG1基因复合杂合突变所致的以轻度甲基丙二酸尿症获诊的新生儿琥珀酰辅酶A连接酶缺乏症1例。患儿生后2 d发病，以"呕吐、拒奶"就诊于山东大学齐鲁医院，血气分析提示代谢性酸中毒及高乳酸血症。实验室检查提示血氨轻度升高、血清转氨酶轻度升高、同型半胱氨酸正常。影像学检查提示脑发育不良及心脏多发畸形。血液氨基酸及酰基肉碱谱、尿有机酸谱分析提示甲基丙二酸尿症。行全外显子组测序，结果显示，SUCLG1基因有2个新突变，即c.40A>G(p.M14V)突变和6~9号外显子的杂合缺失，分别来自于患儿母亲和父亲。患儿经扩容、纠酸等治疗，代谢性酸中毒好转，但乳酸持续偏高，出现水肿及呼吸衰竭，家长放弃治疗，出院后死亡。SUCLG1基因突变可导致琥珀酰辅酶A连接酶缺乏症、线粒体DNA耗竭综合征。该病无特效治疗，对于喂养困难、乳酸酸中毒、多脏器受累的新生儿，应行遗传代谢病筛查，基因检测为确诊手段。

简介：泛素蛋白酶系统（ubiquitin—proteasomesystem，UPS）是真核细胞内除溶酶体外的另一种蛋白降解系统。内源性抗原大多需要泛素蛋白酶系统处理而经MHCI类途径提呈参与免疫应答。该文就UPS与内源性抗原的关系做简要综述。

简介：泛素蛋白酶体水解途径是蛋白质的选择性降解中一种非常重要的机制,它通过选择性地降解蛋白质控制着体内许多重要的生物学过程。病毒侵染宿主细胞后,细胞的泛素蛋白酶体途径与一些重要的病毒蛋白相互作用,参与调节病毒的生命周期。同时,病毒的某些蛋白也会影响泛素蛋白酶体途径,以逃避宿主的防御机制。

简介：泛素-蛋白酶体途径是真核细胞内降解蛋白质的重要途径，对于维持细胞的正常功能起着重要作用。雌激素受体α（ERα）作为转录因子，与乳腺癌的发生及进展关系密切，抑制ERα的功能已经成为治疗乳腺癌的主要策略之一。目前发现泛素-蛋白酶体途径能够促进ERα降解，影响其转录。简要综述了泛素-蛋白酶体途径对雌激素受体α的转录及降解调控的研究进展。

简介：摘要：目的：探究泛素结合酶-9对胃癌细胞凋亡的影响。方法:采用Ubc9基因的质粒对胃癌SGC7901细胞株进行瞬时转染，将实验对象分为：正常胃癌细胞A组(Normal组)，脂质体B组(Lipo-2000组)，空载质粒C组(NC-shRNA组)，及目的质粒D组(Ubc9-shRNA组)。采用qRT-PCR检测各组mRNA水平，Western-blot检测各组Ubc9、α-SMA、Bcl-2蛋白表达结果，流式细胞仪检测各组细胞周期与凋亡结果。结果：1.与各组比较，Ubc9-shRNA组转染后细胞凋亡增加（P < 0.05）；2.Ubc9-shRNA组能显著的抑制胃癌SGC7901中Ubc9基因的表达（P < 0.05）；3.Ubc9-shRNA组明显抑制SGC7901细胞中Ubc9、α-SMA、Bcl-2蛋白表达（P < 0.05）。结论：Ubc9能抑制SGC7901细胞的增殖，诱导胃癌细胞凋亡。

简介：摘要: 泛素-蛋白酶体系统是细胞内蛋白质降解的主要途径，而去泛素化酶在这种动态的蛋白质双向修饰调控系统内发挥重要作用。泛素特异性蛋白酶7（ubiquitin-specifific protease 7,USP7)作为去泛素化酶(deubiquitinating enzymes，DUBs)中成员最多的USPs(ubiquitin-specific proteases)家族内的一种，可以调控多种在细胞内发挥重要作用的蛋白质的稳定性，进而在DNA的损伤与修复、表观调遗传的调控、免疫反应和病毒感染等众多病理生理过程中发挥重要作用。本文将对USP7近年来在结构及功能方面的研究进展做一综述。

简介：摘要: 泛素-蛋白酶体系统是细胞内蛋白质降解的主要途径，而去泛素化酶在这种动态的蛋白质双向修饰调控系统内发挥重要作用。泛素特异性蛋白酶7（ubiquitin-specifific protease 7,USP7)作为去泛素化酶(deubiquitinating enzymes，DUBs)中成员最多的USPs(ubiquitin-specific proteases)家族内的一种，可以调控多种在细胞内发挥重要作用的蛋白质的稳定性，进而在DNA的损伤与修复、表观调遗传的调控、免疫反应和病毒感染等众多病理生理过程中发挥重要作用。本文将对USP7近年来在结构及功能方面的研究进展做一综述。