简介：摘要目的探讨乙肝病毒编码X蛋白促进甲胎蛋白表达的分子机制。方法非参数检验-秩和检验评估肝癌患者HBV感染与否与AFP表达水平间的相关性；在PLC/PRF/5肝癌细胞系中转染HBV、HBx及P53真核表达质粒，36 h Western blot和qRT-PCR分别在蛋白质和mRNA水平检测HBV和HBx对P53和AFP表达的影响，以及P53对AFP表达的影响；在PLC/PRF/5细胞中转染包含AFP基因启动子和沉默子的荧光素酶报告质粒，通过检测荧光素酶活性改变明确沉默子区域，再将包含沉默子的报告载体与HBV/HBx质粒共转染PLC/PRF/5细胞，通过检测荧光素酶活性的改变验证HBV/HBx对AFP基因沉默子区域的作用；用ChIP实验验证P53在AFP基因沉默子区域的结合，并证实HBx对P53与作用序列结合能力的影响。结果统计分析发现HBV感染与AFP表达之间存在明显相关性，HBV阳性肝癌患者的血清AFP值总体中位数为296.8 ng/ml，而HBV阴性患者的AFP总体中位数为71.5 ng/ml(P＝0.02)，HBV阳性肝癌患者的AFP表达水平明显高于HBV阴性肝癌患者；P53可以抑制AFP表达(P<0.001)，而HBV和HBx均能抑制P53表达(P＝0.0011、P＝0.0027)，并促进AFP表达(P＝0.0014、P<0.001)；HBV和HBx可以作用于AFP基因沉默子区域，促进基因转录(P<0.001、P＝0.0019；P＝0.0046、P＝0.0015)；P53与AFP基因沉默子的结合作用能够被HBx所够削弱。结论HBx可通过抑制P53表达，并且抑制P53在AFP基因沉默子区域的结合，以此促进AFP基因转录，并进一步促进AFP蛋白表达。

简介：摘要目的探讨结直肠癌组织中膜联蛋白A10(ANXA10)与肿瘤生长转移的关系。方法选取唐山市工人医院肿瘤外科在2018年1月至2019年10月手术切除的结直肠腺癌标本进行研究，患者均为初诊患者。75例结直肠癌患者中男45例，女30例，年龄(57.69±8.32)岁。免疫组织化学技术(IHC)检测75例结直肠癌肿瘤及癌旁正常肠黏膜石蜡组织中ANXA10蛋白表达，分析ANXA10与患者临床病理特征的关系。应用全基因克隆技术上调人结直肠癌细胞株SW480中ANXA10的水平；新型四唑化合物(MTS)法检测细胞活性，划痕实验及Transwell小室实验检测肿瘤细胞迁移及侵袭能力。实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)技术检测肿瘤细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、N-钙黏素(N-cadherin)、E-钙黏素(E-cadherin)的表达。应用SPSS 21.0软件对数据采用t检验、单因素方差分析。结果结直肠癌组织中ANXA10蛋白阳性率(22.67%)低于癌旁正常肠黏膜(54.67%，χ2＝16.190，P<0.01)；ANXA10表达与患者的肿瘤分化(高中分化36.36%，低未分化11.90%)、淋巴结转移(阳性5.13%，阴性41.67%)及临床分期(Ⅰ～Ⅱ期58.33%，Ⅲ～Ⅳ期5.88%)明显相关(χ2＝6.307，P<0.05，χ2＝14.258，P<0.01，χ2＝25.614，P<0.01)。ANXA10在人结直肠癌细胞株中低于正常肠黏膜细胞株HIEC，SW480细胞中ANXA10表达最低(F＝31.714、85.211，P<0.01)。转染后SW480细胞中ANXA10表达明显增高(F＝1 774.586、1 559.994，P<0.01)；转染48 h后转染组SW480细胞的活性明显低于对照组(F＝271.017、215.699，P<0.01)；转染组SW480细胞的迁移能力、侵袭能力明显低于对照组(F＝1 204.876、70.137，P<0.01)。转染组SW480细胞中PCNA、N-cadherin、MMP-2的mRNA和蛋白水平均明显低于对照组(mRNA：F＝35.974，P<0.01；F＝8.933，P<0.05；F＝21.868，P<0.01；蛋白：F＝100.484，P<0.01；F＝90.413，P<0.01；F＝7.990，P<0.05)；而E-cadherin的mRNA和蛋白水平在转染组明显高于对照组(mRNA：F＝40.375，P<0.01；蛋白：F＝128.487，P<0.01)。结论结直肠癌组织存在ANXA10表达缺失现象，ANXA10表达下调可能是导致结直肠癌进展及转移的重要机制。

简介：摘要目的分析沉默信息调节因子6(SIRT6)与上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)在食管鳞癌组织及同一患者的癌旁正常组织中的表达及其临床意义。方法选取2018年6月至2019年12月郑州大学附属洛阳中心医院胸外科收治的61例手术治疗食管鳞癌患者的癌组织及距肿瘤切缘3 cm以上的癌旁组织(镜下观察未见癌细胞)，男42例，女19例，年龄(63.62±9.59)岁，年龄范围为34～82岁。通过免疫细胞化学与蛋白免疫印迹实验(Western blot)方法检测SIRT-6、E-cadherin在食管鳞癌组织中的蛋白表达及免疫组化，并分析SIRT6和E-cadherin与临床病理资料的相关性。结果在食管鳞癌中SIRT6蛋白相对表达量(0.383±0.092)显著低于癌旁组织(1.037±0.116)，差异有统计学意义(t＝9.877，P<0.01)。食管鳞癌中E-cadherin蛋白相对表达量(0.423±0.089)低于癌旁组织(0.967±0.116)，差异有统计学意义(t＝6.976，P<0.01)。SIRT6在食管鳞癌组织中阳性表达与浸润深度相关，差异有统计学意义(P<0.05)；与肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移无关，差异无统计学意义(P>0.05)。E-cadherin在食管鳞癌组织中阳性表达与分化程度、浸润深度相关，差异有统计学意义(P<0.05)；与肿瘤大小、淋巴结转移无关，差异无统计学意义(P>0.05)。进行Spearman等级相关分析显示，两者之间呈正相关关系，差异有统计学意义(r＝0.538，P<0.01)。结论SIRT-6和E-cadherin的表达影响食管鳞癌的侵袭性，可为临床治疗食管鳞癌提供理论依据及靶点。

简介：摘要：

简介：摘要目的通过蛋白重组技术低成本、快速制备高浓度人视黄醇结合蛋白4（hRBP4）参考物质，解决临床hRBP4高值参考物质难以获取的需求。方法在美国国立生物技术信息中心NCB查找hRBP4的互补DNA序列，经大肠埃希菌密码子优化后人工合成，然后将DNA片段克隆至原核表达质粒pET-28a（+）中，以构建重组hRBP4表达载体。将重组质粒转化至E. coli BL21感受肽中，优化诱导表达条件（如温度、转速和异丙基硫代半乳糖苷IPTG浓度等）、诱导质粒表达并对重组蛋白进行His融合标签纯化，获取纯化后的hRBP4重组蛋白。结果DNAMAN软件对比显示编码hRBP4蛋白的碱基序列完全正确，成功构建重组hRBP4原核表达质粒；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示亲和纯化产物中可清晰可见约相对分子质量26 000电泳条带；临床尿液和血清hRBP4常规检测系统均可检测到纯化的hRBP4蛋白，且稀释倍数与检测浓度间呈现良好线性关系。结论成功构建重组hRBP4高水平表达系统，重组hRBP4蛋白纯度大、浓度高、生产周期短，有望在室间质量评价质控品和有证参考物质研制中发挥重要作用。

简介：众所周知,英语是中考中非常重要的科目,对于众多考生而言,考好英语难,而要想在写作部分拿高分似乎更难。在英语作文中,众多的句子构成了作文的基础,因此写出好的句子才能形成一篇上乘的作文。那么,如何才能写出好的英语句子,让中考英语书面表达妙笔生花呢?在此笔者结合多年的教学经验,对

简介：摘要目的探讨甲胎蛋白抑制顺铂诱导的肝癌细胞凋亡的分子机制。方法选用HepG2(甲胎蛋白阳性)和QSG-7701(甲胎蛋白阴性)两种常见肝癌细胞系。分别在HepG2细胞中转染甲胎蛋白干扰质粒和在QSG-7701细胞中转染甲胎蛋白过表达质粒，培养12、24、36和48 h后，采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖情况；在HepG2和QSG-7701细胞中分别干扰和过表达甲胎蛋白24 h后，加入凋亡诱导剂顺铂，采用流式细胞术检测甲胎蛋白对顺铂诱导的肝癌细胞凋亡的影响；采用蛋白质免疫共沉淀技术(CoIP)检测甲胎蛋白与转录因子维甲酸受体(RAR)的相互作用；运用染色质免疫共沉淀技术(ChIP)实验联合蛋白质印迹法验证甲胎蛋白表达水平对DNA损伤诱导转录基因1(DDIT1)表达的影响，以及甲胎蛋白和DDIT1对肝癌细胞凋亡的影响。统计学方法采用t检验。结果CCK-8结果显示，质粒转染12、24、36和48 h后，过表达甲胎蛋白的QSG-7701细胞相对增殖率分别较对照组升高28.7%±2.7%、49.8%±6.1%、65.8%±3.0%和79.3%±2.0%，而敲减甲胎蛋白后的HepG2细胞相对增殖率分别较对照组降低16.5%±6.1%、28.5%±5.7%、42.5%±1.7%和57.6%±3.8%，差异均有统计学意义(t＝3.978、4.357、3.461、3.636、2.858、2.446、3.233、4.492，P均<0.05)。流式细胞术结果显示，QSG-7701细胞过表达甲胎蛋白24和48 h后的细胞凋亡率较单独顺铂处理细胞24和48 h后分别降低46.3%±2.9%和47.7%±7.4%，HepG2细胞敲减甲胎蛋白24和48 h后的细胞凋亡率较单独顺铂处理细胞24和48 h后分别升高86.7%±4.0%和31.6%±10.5%，差异均有统计学意义(t＝3.543、3.893、2.336、2.561，P均<0.05)。CoIP实验结果显示，AFP与RAR能够发生相互作用。在HepG2细胞中敲减甲胎蛋白表达后，提取核蛋白发现RAR的入核较对照组增加；而在QSG-7701细胞中过表达甲胎蛋白后，RAR的入核较对照组减少。ChIP实验结果显示，AFP能够调控DDIT1表达。敲减甲胎蛋白的HepG2细胞中DDIT1表达量高于对照组，而过表达甲胎蛋白的QSG-7701细胞中DDIT1表达量低于对照组。转染DDIT1后，HepG2和QSG-7701细胞凋亡率分别较对照组上升53.1%±4.0%和73.3%±6.4%，差异均有统计学意义(t＝3.462、3.012，P＝0.009、0.017)。在QSG-7701细胞中，过表达甲胎蛋白后细胞凋亡率较单独加入顺铂下降46.6%±4.8%，过表达甲胎蛋白＋顺铂＋过表达DDIT1后细胞凋亡率较过表达甲胎蛋白＋顺铂上升43.6%±2.7%，差异均有统计学意义(t＝2.833、2.545，P＝0.018、0.029)。在HepG2细胞中，敲减甲胎蛋白后的细胞凋亡率较单独加入顺铂上升73.3%±6.1%，敲减甲胎蛋白＋顺铂＋敲减DDIT1后的细胞凋亡率较敲减甲胎蛋白＋顺铂下降32.7%±3.7%，差异均有统计学意义(t＝2.497、2.773，P＝0.032、0.020)。结论甲胎蛋白能够通过与转录因子RAR相互作用，抑制其下游基因DDIT1表达，不仅促进肝癌细胞增殖，还可增强肝癌细胞的抗凋亡能力，削弱顺铂对肝癌细胞的促凋亡作用。

简介：【摘要】目的根据验证计划安排，需通过本次验证制剂室人免疫球蛋白生产用超滤系统符合人免疫球蛋白生产工艺要求，生产前、后手工清洗程序的清洗效果是否符合产品工艺要求，并建立证明性文件。方法确认超滤系统按清洗程序清洗后的清洗效果是否符合工艺要求，并确认生产前清洗有效期和生产后待清洗保留时间。结果超滤系统生产前、后清洗效果符合要求，生产前清洗有效期经确认为清洗后保持5h，生产后待清洗保留时间为1.5h。

简介：摘要免疫球蛋白G4（IgG4）相关性疾病（IgG4-RD）是一种全身系统免疫性疾病，以器官组织无痛性肿胀为临床特征，病理学、血液学、影像学等诊断方式均有参考意义。其在眼部的表现称为IgG4相关性眼病（IgG4-ROD）。此病发病机制尚不明确，目前主要假说为T细胞及肥大细胞参与机制。糖皮质激素仍为治疗一线用药，利妥昔单抗、手术等治疗方式远期效果需进一步评估。本文就IgG4-ROD的诊断方式和IgG4-RD的发病机制、治疗进展进行总结和分析，以期为相关研究提供参考。

简介：摘要目的建立一种基于同位素稀释液相色谱串联质谱法（ID-LC/MS/MS）检测血清糖化白蛋白（GA）的准确定量方法。方法本研究在日本临床化学学会（JSCC）推荐的ID-LC/MS方法上进行优化，采用阴离子交换色谱柱提纯白蛋白（Alb），使用重量法准确称量提纯标本、赖氨酸（Lys）和糖化赖氨酸（DOF-Lys）的标准溶液及两种的混合内标，将Alb酸水解为氨基酸，检测Lys和DOF-Lys从而定值GA。根据C62-A文件对建立的方法进行方法学评价并与常规方法进行比对研究。结果蛋白电泳鉴定标本Alb纯度结果为100%。Lys和DOF-Lys线性标准曲线R2范围分别为0.997 8~0.999 9、0.999 4~1.000 0。血清GA测定的批内、批间和总的变异系数（CV）分别为0.69%~1.97%、1.13%~2.33%、1.37%~2.54%。正确度评价中三个浓度参考物质测定结果与认定值偏差分别为-2.56%、-1.87%、-2.94%。Lys和DOF-Lys的基质效应分别为89.92%、109.98%，携带污染率分别为-1.13%、-3.27%。Lys的检测限和定量限分别为0.075、0.248 nmol/g，DOF-Lys的检测限和定量限分别为0.007、0.024 nmol/g。方法 的相对扩展不确定度为1.60%~2.03%。与常规方法的拟合回归曲线R2为0.970 7。结论建立了一种基于ID-LC/MS/MS法检测血清GA的方法，方法学评价准确可靠，有望作为血清GA检测的候选参考方法。

简介：摘要免疫球蛋白G4（IgG4）相关性疾病（IgG4-RD）是一种全身系统免疫性疾病，以器官组织无痛性肿胀为临床特征，病理学、血液学、影像学等诊断方式均有参考意义。其在眼部的表现称为IgG4相关性眼病（IgG4-ROD）。此病发病机制尚不明确，目前主要假说为T细胞及肥大细胞参与机制。糖皮质激素仍为治疗一线用药，利妥昔单抗、手术等治疗方式远期效果需进一步评估。本文就IgG4-ROD的诊断方式和IgG4-RD的发病机制、治疗进展进行总结和分析，以期为相关研究提供参考。

简介：

简介：摘要：随着互联网和新媒体技术的发展，职业院校学生利益诉求表达机制和诉求表达、情绪宣泄的渠道发生了重大变化，特别是在疫情防控形势下，学生利益诉求表达出现了个性化、盲从化、情绪化等问题。基于此，本文在分析疫情防控形势下职业院校学生利益诉求表达特点的基础上，从提升网络德育实效性，建构网络舆情监控体系，提高校园主流媒体话语权，提高学生利益诉求表达研习力等方面，建构疫情防控形势下职业院校学生利益诉求表达机制，旨在提高，学生利益诉求表达能力，筑牢职业院校意识形态防线。

简介：摘要目的构建人降钙素原（hPCT）原核表达载体，低成本、快速、高浓度、高纯度获取hPCT纯化蛋白，为临床实验室检测制备质控品和参考物质奠定基础。方法将GenBank提供的hPCT编码序列经大肠杆菌密码子优化后，人工合成DNA片段克隆至pET-28a(+)原核表达载体以构建重组hPCT表达质粒。转化至大肠杆菌E. coli BL21感受态中，优化诱导表达条件、诱导质粒表达并对重组蛋白进行His融合标签纯化。结果成功构建重组hPCT原核表达质粒，优化异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组蛋白表达浓度及诱导温度，最适IPTG浓度为0.2 mmol/L，最佳诱导温度为37 ℃。纯化后hPCT蛋白可通过临床检测，且稀释倍数与检测浓度间呈现良好线性关系，回归方程为y=-0.0085x+112.63，R2值为0.9975。结论成功构建重组hPCT的高效表达系统，重组hPCT蛋白纯度大、浓度高、生产周期短，有成为候选室间质量评价参考物质的潜力。

简介：摘要目的运用分子生物学方法观察小泛素样修饰蛋白（small ubiquitin-related modifier，SUMO）通路成员在骨肉瘤中的表达特点，为基于蛋白质SUMO化修饰的靶向治疗提供理论依据。方法收集2017年1月至2019年6月于我院就诊并手术的新鲜骨肉瘤组织样本18例，经Western blot及免疫组织化学方法检测癌灶及癌旁SUMO通路核心成员SUMO1、SAE1、Ubc9、SENP1的蛋白表达水平。分别干涉SUMO1、干涉UBC9及过表达SENP1，进行如下分组：空白对照组、对照组、siR-SUMO1组、siR-Ubc9组和SENP1组。Western blot验证基因转染效率，细胞增殖检测试剂盒检测EdU的阳性表达率，划痕实验及Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力，流式细胞术检测细胞凋亡率。以骨髓间充质干细胞（BMSCs）为研究对象，评估三种治疗方案的副作用。结果Western blot及免疫组织化学结果均显示，骨肉瘤组织中SUMO1、SAE1、Ubc9的蛋白表达水平均明显高于癌旁组织（P<0.05），但SENP1明显低于癌旁组织。基于143B骨肉瘤细胞的实验结果表明，siR-SUMO1组、siR-Ubc9组、SENP1组均能够明显抑制骨肉瘤细胞中SUMO通路的活化，表现为较对照组和无义组更低的肿瘤细胞增殖率（P<0.05），更低的细胞迁移和侵袭能力（P<0.05），以及更高的细胞凋亡率（P<0.05）；然而基于BMSCs的实验结果表明，siR-SUMO1组和siR-Ubc9组能够明显抑制BMSCs的增殖，诱导细胞凋亡，表现出极大的治疗副作用，但SENP1组对BMSCs的增殖和凋亡几乎没有影响（P>0.05）。结论SUMO通路在骨肉瘤中被异常激活，外源性补充或内源性激活SENP1是靶向治疗的备选方案之一。

简介：摘要目的探讨circABCB10在结直肠癌组织和细胞中的表达及其对细胞生物学行为、放射敏感性和裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法收集2018年1月至2018年12月于河南省人民医院治疗的结直肠癌患者的结直肠癌组织和癌旁正常组织。采用定量聚合酶链反应(qPCR)检测结直肠癌组织、癌旁正常组织和结直肠癌细胞SW480、HCT116、HT29中circABCB10和miR-217的表达；四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡情况，Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力，克隆形成实验检测放射敏感性，Circular RNA Interactome预测circABCB10下游miRNAs的表达，双荧光素酶报告基因实验进一步验证，裸鼠皮下移植瘤实验检测circABCB10对移植瘤生长的影响。结果结直肠癌组织中circABCB10 mRNA的表达水平(3.97±2.12)高于癌旁组织(1.13±0.64，P<0.05)。正常结肠上皮细胞FHC中circABCB10 mRNA的表达水平(1.00±0.09)低于结直肠癌细胞SW480、HCT116、HT29(分别为4.53±0.44、3.12±0.32和3.51±0.36，均P<0.05)。MTT检测结果显示，转染48、72 h，si-circABCB10-1组SW480细胞的吸光度值分别为0.36±0.04和0.43±0.04，低于circ-NC组(分别为0.48±0.05和0.82±0.08，均P<0.05)。si-circABCB10-1组SW480细胞的迁移细胞数[(45±8)个]和侵袭细胞数[(34±7)个]均低于circ-NC组[分别为(106±21)个和(84±15)个，均P<0.01]，放射增敏比为1.632。裸鼠皮下移植瘤实验结果显示，8 d后，si-circABCB10-1组肿瘤体积和重量低于circ-NC组(P<0.05)。miR-217是circABCB10的靶基因，抑制miR-217的表达可逆转抑制circABCB10对细胞增殖、迁移、侵袭和裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及放射增敏作用。结论抑制circABCB10的表达可通过上调miR-217的表达来抑制结直肠癌SW480细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及裸鼠皮下移植瘤的生长，并增加细胞的放射敏感性，揭示了结直肠癌进展的潜在分子机制，可为临床结直肠癌放射治疗提供一个新的增敏靶点。

简介：摘要目的探讨circABCB10在结直肠癌组织和细胞中的表达及其对细胞生物学行为、放射敏感性和裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法收集2018年1月至2018年12月于河南省人民医院治疗的结直肠癌患者的结直肠癌组织和癌旁正常组织。采用定量聚合酶链反应(qPCR)检测结直肠癌组织、癌旁正常组织和结直肠癌细胞SW480、HCT116、HT29中circABCB10和miR-217的表达；四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡情况，Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力，克隆形成实验检测放射敏感性，Circular RNA Interactome预测circABCB10下游miRNAs的表达，双荧光素酶报告基因实验进一步验证，裸鼠皮下移植瘤实验检测circABCB10对移植瘤生长的影响。结果结直肠癌组织中circABCB10 mRNA的表达水平(3.97±2.12)高于癌旁组织(1.13±0.64，P<0.05)。正常结肠上皮细胞FHC中circABCB10 mRNA的表达水平(1.00±0.09)低于结直肠癌细胞SW480、HCT116、HT29(分别为4.53±0.44、3.12±0.32和3.51±0.36，均P<0.05)。MTT检测结果显示，转染48、72 h，si-circABCB10-1组SW480细胞的吸光度值分别为0.36±0.04和0.43±0.04，低于circ-NC组(分别为0.48±0.05和0.82±0.08，均P<0.05)。si-circABCB10-1组SW480细胞的迁移细胞数[(45±8)个]和侵袭细胞数[(34±7)个]均低于circ-NC组[分别为(106±21)个和(84±15)个，均P<0.01]，放射增敏比为1.632。裸鼠皮下移植瘤实验结果显示，8 d后，si-circABCB10-1组肿瘤体积和重量低于circ-NC组(P<0.05)。miR-217是circABCB10的靶基因，抑制miR-217的表达可逆转抑制circABCB10对细胞增殖、迁移、侵袭和裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及放射增敏作用。结论抑制circABCB10的表达可通过上调miR-217的表达来抑制结直肠癌SW480细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及裸鼠皮下移植瘤的生长，并增加细胞的放射敏感性，揭示了结直肠癌进展的潜在分子机制，可为临床结直肠癌放射治疗提供一个新的增敏靶点。

简介：摘要目的探讨核因子(NF-κB)配体的受体在Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路促成骨样细胞转化中的作用及其意义。方法分离健康雄性远交群(SD)大鼠主动脉平滑肌细胞(SMC)并诱导为成骨样细胞，分别用LiCl、LiCl+OPG(0.1 ng/ml)、LiCl+OPG(1.0 ng/ml)、LiCl+OPG(10.0 ng/ml)、LiCl+OPG(100.0 ng/ml)处理成骨样细胞，对照组未行LiCl及OPG处理，LiCl浓度均为20 mmol/L。RT-qPCR检测各组细胞OPG、RANKL转录水平；Von Kossa染色，钙离子含量测定，碱性磷酸酶(ALP)活性测定，骨钙素蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞钙化程度；免疫组织化学和Western blot检测Wnt/β-catenin通路激活情况。采用单因素方差分析，组内进一步两两比较采用LSD-t检验，两两比较采用t检验。结果LiCl组OPG的表达(4.35±0.88)稍高于成骨样细胞组(4.12±0.82，t＝0.603，P>0.05)，RANKL表达则LiCl组(2.61±0.42)显著高于成骨样细胞组(1.52±0.35，t＝2.317，P<0.05)；OPG/RANKL的比值LiCl(1.67±0.41)组显著低于成骨样细胞组(2.71±0.48，t＝2.542，P<0.05)。成骨样细胞的转化实验中，成骨样细胞组及加LiCl+OPG的4组钙离子含量、ALP活性、骨钙素的水平(25.2±5.8、68.5±13.3、61.1±12.8、57.6±11.3、56.3±11.4)、(80.4±10.2、141.2±17.6、125.7±15.3、123.5±15.9、122.7±15.1)、(0.61±0.10、0.82±0.14、0.79±0.13、0.72±0.12、0.73±0.13)均低于LiCl组(99.5±16.5)、(186.0±39.3)、(0.98±0.15)，(t＝5.971、2.795、2.810、2.829、2.831，P<0.05)、(t＝5.623、2.597、2.765、2.791、2.793，P<0.05)(t＝4.931、2.379、2.384、2.391、2.392，P<0.05)；加LiCl+OPG的4组中钙离子含量、ALP活性、骨钙素的水平差异无统计学意义(P>0.05)，均高于成骨样细胞组水平(t＝5.362、2.769、2.635、2.633，P<0.05)、(t＝5.105、2.758、2.732、2.733，P<0.05)、(t＝2.762、2.569、2.566、2.563，P<0.05)。Wnt/β-catenin通路的激活程度检测中，β-catenin的表达水平β-catenin表达水平LiCl组(1.75±0.26)高于成骨样细胞组及加LiCl+OPG的4组(1.32±0.18、1.25±0.17、1.25±0.16、1.22±0.16)，(t＝4.442、2.650、2.654、2.712、2.709，P<0.05)、加LiCl+OPG的4组高于成骨样细胞组(t＝2.492、2.455、2.439、2.437，P<0.05)，加LiCl+OPG的4组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论激活Wnt/β-catenin通路促进成骨样细胞转化的机制，有RANKL依赖性，也有非RANKL依赖性。

简介：摘要目的探讨人脂肪来源蛋白复合物（ADPC）对人皮肤成纤维细胞（HSF）和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖和迁移能力的影响，以及含ADPC的三维生物打印墨水（Bioink）在裸鼠全层皮肤缺损创面中的修复效应。方法采用实验研究方法。收集解放军总医院2020年10月—2021年3月收治的3例行腹部皮瓣转移修补术的女性慢性创面患者（年龄29~34岁）的废弃皮下脂肪组织和同期收治的3名行腹部抽脂术的健康女性（年龄24~36岁）的废弃抽脂术脂肪组织，分别制备正常ADPC（nADPC）及抽脂术ADPC（lADPC）。采用二辛丁酸法测定2种ADPC的蛋白浓度，计算2种ADPC的提取效率，样本数均为3。取对数生长期HSF和HUVEC进行后续实验。取2种细胞均按随机数字表法（分组方法下同）分为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组、4 μg/mL nADPC组、20 μg/mL nADPC组、100 μg/mL nADPC组和200 μg/mL nADPC组，每组5孔。PBS对照组细胞采用PBS培养，余4组分别采用含相应终质量浓度的nADPC培养。常规培养24 h，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖活力。取HSF和HUVEC，分为PBS对照组、单纯nADPC组、单纯lADPC组、单纯肿瘤坏死因子α（TNF-α）组、TNF-α+nADPC组、TNF-α+lADPC组。PBS对照组与单纯TNF-α组细胞分别加入PBS，单纯nADPC组、单纯lADPC组、TNF-α+nADPC组及TNF-α+lADPC组中分别加入终质量浓度100 μg/mL的nADPC或lADPC，单纯TNF-α组、TNF-α+nADPC组及TNF-α+lADPC组再加入终质量浓度20 ng/mL的TNF-α。进行细胞划痕试验后计算划痕后24 h细胞迁移率（样本数为3），同前检测培养24 h细胞增殖活力（样本数为5）。取明胶-海藻酸钠复合Bioink（Bioink AG），制备含100 μg/mL lADPC的Bioink AG（lADPC-Bioink AG），观察二者在室温下及冷凝后的形态和三维生物打印且交联后的形态，采用流变仪检测流变性能时记录低温成胶时间（样本数为3）。取20只8~10周龄雌性BALB/c-NU裸鼠，建立背部全层皮肤缺损创面模型后，分为常规换药组、单纯lADPC组、单纯Bioink AG组和lADPC-Bioink AG组，每组5只。常规换药组裸鼠创面仅覆盖水胶体敷料和常规换药，其余3组裸鼠创面另予相应lADPC、Bioink AG、lADPC-Bioink AG处理。从治疗0 d起，行大体观察，计算治疗2、6、10 d的创面愈合率。治疗10 d，采用苏木精-伊红染色行创面组织病理学观察。对数据行独立样本t检验、单因素方差分析、重复测量方差分析、SNK-q检验及LSD-t检验。结果lADPC的蛋白浓度、提取效率分别为（1.306±0.011）mg/mL、（11.1±1.5）%，明显低于nADPC的（2.039±0.042）mg/mL、（22.2±2.0）%（t=23.83、6.38，P<0.05或P<0.01）。培养24 h，与PBS对照组比较，100 μg/mL nADPC组和200 μg/mL nADPC组HSF（q=6.943、6.375，P<0.01）和HUVEC（q=6.301、6.496，P<0.01）增殖活力均明显下降；与100 μg/mL nADPC组比较，200 μg/mL nADPC组HSF和HUVEC增殖活力无明显变化（P>0.05）。划痕后24 h，与PBS对照组比较，单纯nADPC组、单纯lADPC组、单纯TNF-α组HSF和HUVEC迁移率均明显降低（q=5.642、6.645、11.480，4.772、6.298、10.420，P<0.05或P<0.01）；与单纯nADPC组比较，单纯lADPC组HSF和HUVEC迁移率无明显变化（P>0.05）；与单纯TNF-α组比较，TNF-α+nADPC组、TNF-α+lADPC组HSF迁移率无明显变化（P>0.05），HUVEC迁移率均明显升高（q=8.585、7.253，P<0.01）；与TNF-α+nADPC组比较，TNF-α+lADPC组HSF和HUVEC迁移率无明显变化（P>0.05）。培养24 h，与PBS对照组比较，单纯nADPC组、单纯lADPC组、单纯TNF-α组HSF和HUVEC增殖活力均明显降低（q=5.803、5.371、9.136，11.580、9.493、13.510，P<0.05或P<0.01）；与单纯nADPC组比较，单纯lADPC组HSF和HUVEC增殖活力均无明显变化（P>0.05）；与单纯TNF-α组比较，TNF-α+nADPC组、TNF-α+lADPC组HSF（q=14.990、10.850，P<0.01）和HUVEC（q=7.066、8.942，P<0.01）增殖活力均明显升高；与TNF-α+nADPC组比较，TNF-α+lADPC组HSF和HUVEC增殖活力均无明显变化（P>0.05）。室温及冷凝状态下，lADPC-Bioink AG比Bioink AG外观稍显浑浊；三维生物打印且交联后lADPC-Bioink AG与Bioink AG形态类似。在10 ℃时，lADPC-Bioink AG的凝固时间为（76.6±0.4）s，明显慢于Bioink AG的（74.4±0.6）s（t=4.64，P<0.01）。治疗2 d，常规换药组裸鼠创面渗出较多，其余3组无明显渗出；治疗8 d，lADPC-Bioink AG组裸鼠残余创面面积最小，有明显上皮覆盖。治疗2 d，lADPC-Bioink AG组裸鼠创面愈合率明显高于单纯lADPC组（t=3.59，P<0.05），与常规换药组、单纯Bioink AG组相近（P>0.05）；治疗6 d，lADPC-Bioink AG组裸鼠创面愈合率明显高于常规换药组、单纯lADPC组、单纯Bioink AG组（t=18.70、15.70、3.15，P<0.05或P<0.01）；治疗10 d，lADPC-Bioink AG组裸鼠创面愈合率明显高于常规换药组、单纯lADPC组（t=12.51、4.84，P<0.01），与单纯Bioink AG组相近（P>0.05）。治疗10 d，lADPC-Bioink AG组裸鼠创面组织血管化程度适中，上皮化充分，愈合效果最好。结论抽脂术相关操作会降低ADPC蛋白浓度、提取效率等表征，但lADPC与nADPC具有相同的生物学作用，可在非炎症环境中抑制HSF与HUVEC的增殖与迁移能力，在炎症环境中提高HSF与HUVEC的增殖活力，同时提高HUVEC的迁移能力；将lADPC加入Bioink AG中后，不会明显影响Bioink AG的物理性质及打印性能，并可以提升裸鼠全层皮肤缺损创面的修复效果。

简介：摘要目的探讨lncRNA LINC00958对结直肠癌细胞凋亡及放射敏感性的影响以及其作用机制。方法将pcDNA、pcDNA-LINC00958、si-NC、si-LINC00958、miR-NC和miR-422a质粒分别转染到SW480细胞中，并分别记为pcDNA组、pcDNA-LINC00958组、si-NC组、si-LINC00958组、miR-NC组和miR-422a组；将anti-miR-NC和anti-miR-422a质粒分别与si-LINC00958共转染到SW480细胞中，并分别记为si-LINC00958＋anti-miR-NC组和si-LINC00958＋anti-miR-422a组；分别将miR-NC和miR-422a分别转染到WT-LINC00958和MUT-LINC00958组细胞中，检测荧光活性；转染均用脂质体法。采用qRT-PCR检测miR-422a和LINC00958的表达；Western blot检测蛋白表达；流式细胞术检测细胞凋亡；细胞克隆形成实验检测对结直肠癌细胞放射敏感性的影响；双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果结直肠癌细胞中LINC00958高表达，miR-422a低表达；抑制LINC00958表达和过表达miR-422a，可促进结直肠癌细胞凋亡，并增加细胞放射敏感性。LINC00958可靶向调节miR-422a表达；抑制miR-422a，逆转了抑制LINC00958表达对结直肠癌细胞的放射增敏和细胞凋亡促进的作用。结论抑制LINC00958表达，增加结直肠癌细胞的放射敏感性，并促细胞凋亡，其机制可能与调控miR-422a有关，将为结直肠癌治疗提供新靶点和新思路。