简介:以绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,通过对比小鼠白蛋白启动子在不同来源细胞系中启动_GFP基因的转录活性,对小鼠白蛋白启动子的组织特异性进行了研究.结果发现,小鼠白蛋白启动子在小鼠肝癌细胞系Hepa1-6和人肝癌细胞系HepG2均有很强的转录起始功能,荧光显微镜下可以观察到GFP表达.Hepa1-6细胞在转染早期的48h内,CMV的启动子和增强子序列是小鼠白蛋白启动子转录活性的4倍.G418加压筛选2周后,CMV的启动子的转录活性下降到只有小鼠白蛋白启动子活性的1/2.转染入肝癌细胞系HepG22周后,荧光显微镜下可以观察到GFP表达.其他的细胞如中华仓鼠卵巢细胞系CHO和人肺癌细胞系PLA801中转染的小鼠白蛋白启动子不能启动GFP的表达,而对照CMV启动子控制下的GFP基因可在CHO和PLA801中表达.以上结果说明,小鼠白蛋白启动子仅在肝脏来源的细胞中可以起始下游基因的转录,在其他组织来源的细胞中不能起始转录,这表明小鼠白蛋白启动子具有肝脏组织特异的转录活性,但没有种属特异性.
简介:摘要目的观察低氧条件下缺氧反应元件(HRE)与肿瘤特异性细胞增殖相关核抗原Ki-67(MKI67)启动子构成的嵌合型启动子调控的溶瘤腺病毒在肾癌细胞中的增殖能力和杀伤作用。方法将HRE序列作为增强子嵌合至肿瘤特异性强的Ki-67启动子上游,同时携带报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP),构建溶瘤腺病毒Ad-HRE-Ki-67-EGFP,组织半数感染剂量法(TCID50)测定滴度;两种病毒分别在常氧(21%O2)和低氧(1%O2)条件下感染正常肾上皮细胞人肾小管上皮细胞(HK-2)和肾癌细胞人肾细胞腺癌细胞(OSRC-2)、人肾腺癌细胞(ACHN),24 h后荧光显微镜及流式细胞仪检测病毒的靶向性;蛋白质印迹法(Western blot)检测低氧条件下细胞中低氧相关蛋白缺氧诱导因子(HIF)-1α、血管内皮生长因子(VEGF)的表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测病毒对细胞的杀伤能力。应用SPSS 19.0统计软件分析,组间均数比较采用t检验。结果成功构建重组溶瘤腺病毒Ad-HRE-Ki-67-EGFP;Ad-HRE-Ki-67-EGFP感染肾癌细胞ACHN和OSRC-2,常氧条件下Ad-HRE-Ki-67-EGFP的感染效率分别为(47.5±2.6)%和(35.2±3.4)%,低氧条件下分别为(86.4±3.4)%和(73.5?±2.3)%,即低氧条件下感染效率更高(ACHN:t=15.760;OSRC-2:t=16.190;P<0.01);正常肾小管上皮细胞HK-2在常氧条件下Ad-Ki-67-EGFP、Ad-HRE-Ki-67-EGFP两种病毒的感染效率为(22.4±3.1)%和(22.9±2.2)%,与肾癌细胞ACHN、OSRC-2比较(ACHN:(68.4±3.3)%和(72.1±2.9)%;OSRC-2:(56.1±3.1)%和(61.4±2.3)%),差异有统计学意义(Ad-Ki-67-EGFP:t=17.650、13.390;Ad-HRE-Ki-67-EGFP:t=23.680、21.430,P<0.01),说明2种腺病毒对肾癌细胞具有靶向性;Western blot结果显示低氧条件下缺氧诱导因子HIF-1α、血管内皮生长因子VEGF、p53蛋白的表达增多且表现为时间依赖性,说明低氧可以调节HIF-1α、VEGF、p53蛋白的转录及翻译水平;在低氧条件下,感染Ad-HRE-Ki-67-EGFP的两种肿瘤细胞的早期区域1A(E1A)蛋白表达水平明显高于Ad-Ki-67-EGFP感染后的水平;CCK-8结果显示在感染复数(MOI)值为MOI=20、100时,ACHN和OSRC-2细胞中Ad-HRE-Ki-67-EGFP-normoxia病毒组细胞的存活率为(73.4±2.0)%、(56.4±1.5)%和(79.9±1.8)%、(61.3±2.7)%,Ad-HRE-Ki-67-EGFP-hypoxia病毒组为(63.1±2.0)%、(31.6±2.1)%和(68.1±2.6)%、(35.8±3.1)%,Ad-HRE-Ki-67-EGFP-hypoxia病毒组表现出更强的增殖抑制作用[MOI(20):t=6.328、6.441;MOI(100):t=16.410、10.790,P<0.01]。结论在低氧条件下,嵌合HRE序列的重组溶瘤腺病毒在肾癌细胞中具有更强的复制能力和细胞杀伤作用。
简介:【摘要】目的:探讨观察联合检测梅毒特异性和非特异性抗体的临床应用价值。方法:2020.8-2021.10,选取疑似梅毒血样117份进行研究,分别应用甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、酶联免疫吸附试验(TP-Ab)进行检测,以临床综合诊断结果为金标准,比较两种检测方法与联合检测方法的结果。结果:临床综合诊断显示,有42例梅毒患者。TP-Ab联合TRUST检测的准确性、敏感性、特异性均大于TP-Ab单一检测、TRUST单一检测(P<0.05)。结论:联合检测梅毒血样的特异性抗体及非特异性抗体,可提升疾病诊断准确性,值得推广。
简介:副词“时而”原本是“副词+连词”的非句法结构,先秦即已出现连用,因句法、语义等的变化跨界融合成词,清代突然成词并出现迭用格式“时而……时而”。这反映了词汇化的一般规律;但“时而”的成词同时还受到“有时而……有时而”格式的影响,而与“时……时”“有时……有时”格式没有直接关系,这是“时而”成词过程中的特异性。词汇化不都是单个、孤立、规则的现象,有的可能是一批、一类、甚至整个词汇系统间的相互系联、调整、互动和影响。
简介:摘要:生猪特异性皮疹病是一种常见的猪只传染病,目前尚无特效药物治疗。本文主要介绍了生猪特异性皮疹病的治疗原则和策略,包括提供良好的饲养环境和营养保障、加强病情观察和监测、严格隔离和生物安全措施,以及加强免疫管理。此外,针对并发感染和症状缓解,可以考虑使用抗生素和支持性治疗药物。然而,药物治疗只是治疗策略的一部分,预防措施和养殖管理是更为重要的控制手段。