简介：目的构建含有小鼠Smad4基因和增强型绿色荧光蛋白基因（EGFP）的慢病毒病毒表达载体,为今后应用该重组慢病毒介导的内耳基因导入和相关的聋病基因治疗奠定实验基础.方法利用基因重组、限制性内切酶酶切及基因测序的方法,构建并鉴定pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP真核表达质粒;利用脂质体介导转染的方法,将pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP转染导入293T细胞,荧光显微镜下观察EGFP基因表达情况,利用实时荧光PCR的方法检测小鼠Smad4基因mRNA水平的表达情况.结果经PCR鉴定和基因测序证实了小鼠Smad4基因序列与基因bank中的序列相一致.pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP质粒转入293T细胞后,荧光显微镜下可见有绿色荧光蛋白表达.293T细胞经慢病毒感染后,其小鼠Smad4基因mRNA表达量增加了66427倍.病毒滴度经测定为2.5×108TU/ml.结论成功地构建了含有小鼠Smad4基因的慢病毒表达载体,并能在293T细胞中表达.

简介：目的比较腺病毒、脂质体、纳米材料三种不同类型的载体携带目的基因对293T细胞的转染效率及细胞毒性的大小,筛选理想的基因载体。方法用重组腺病毒、Lipofectamine^TM2000、Entranster^TM—D纳米材料为转染载体,携带含有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因的Math1-EGFP基因及真核表达质粒pRK5-Math1—EGFP，按照转染试剂盒说明优化其转染条件，分别转染293T细胞。24小时后在共聚焦显微镜下观察转染结果并计数阳性细胞率，采用RT—PCR法检测转染细胞中Math1基因mRNA的表达，用MTT法检测不同转染条件下，不同转染载体对293T细胞的细胞毒性。结果经优化转染条件，重组腺病毒载体转导的细胞中荧光蛋白表达几乎为95％以上,Lipofectamine^TM2000、Entranste^TM-D纳米材料载体转染的细胞中荧光蛋白表达也分别达到70％和80％以上，而Entranste^rTM-D纳米材料载体在最高转染效率的剂量下仍然保持80％以上的细胞生存率。RT-PCR进一步证实，三种载体转染细胞均有Math1基因mRNA的表达。结论Entranster^TM—D纳米载体作为一种新型纳米聚合物转染试剂，能成功携带内耳基因治疗关键基因Math1基因转染293T细胞，并表现了低毒、高效性能。

简介：目的：构建大鼠Uqcrfs1的重组质粒并检测其在人胚胎肾293T细胞中的表达。方法：应用RT-PCR方法从大鼠肾脏组织总RNA中扩增出编码Uqcrfs1的cDNA,克隆至pUM-T载体并测序,然后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,酶切鉴定及测序正确后以磷酸钙共沉淀法瞬时转染HEK293T细胞,使用RT-PCR、WesternBlot方法检测重组质粒在转录及蛋白水平的表达。结果：测序结果证实PCR扩增得到编码Uqcrfs1的cDNA序列正确;磷酸钙共沉淀法转染HEK293T细胞后,在基因转录与蛋白表达水平,结果达到预期。结论：成功构建大鼠Uqcrfs1的重组质粒,该重组质粒可在HEK293T中过表达。

简介：目的：作为一种新型生物亲和色谱技术，细胞膜色谱（Cellmembranechromatography，CMC）始创于1996年。细胞膜固定相（Thecellmembranestationaryphase，CMSP）由多孔硅胶包被生物活性细胞膜组成。本文研究了细胞膜色谱系统中受体和配体之间的相互作用，尤其是评价了细胞膜色谱法用于亚型受体研究的精确性和可行性。提供受体高表达HEK293α1A、HEK293α1B。细胞膜色谱系统和技术路线，为肾上腺素受体亚型高选择性配体的研究提供新的方法。

简介：目的：融合表达表皮生长因子受体（EGFR）胞外功能区,为制备针对该分子的特异性抗体提供可用的靶标抗原。方法：通过PCR扩增EGFR胞外区基因,将其克隆入真核表达载体pABhFc中,重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,进行EGFR的瞬时分泌表达,纯化获得电泳纯级的分泌蛋白,并通过ELISA、Western印迹、Biacore3000系统对融合蛋白进行鉴定。结果：经测序证实扩增得到了正确的EGFR胞外区基因序列,SDS-PAGE初步确认获得了单、双体的EGFR胞外区,ELISA检测证实双体融合蛋白hFc-EGFR可与商业化的EGF特异性结合,Western印迹检测证实单体融合蛋白His-EGFR可与商业化抗体特异性结合;经Biacore3000蛋白分子相互作用系统测定,双体融合蛋白hFc-EGFR与商业化抗体爱必妥的亲和力达0.5nmol/L。结论：利用哺乳动物细胞HEK293T分泌表达系统获得了结构正确的单、双体2种类型的EGFR胞外区融合蛋白纯品,将用于抗EGFR特异性抗体的筛选。

简介：摘要目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血初始T细胞及记忆T细胞亚群分布情况。方法选取2018年6月至12月天津中医药大学第一附属医院肿瘤科NSCLC患者25例，同期健康志愿者20例作为对照，应用流式细胞仪分析外周血初始T细胞及记忆T细胞亚群含量，所得结果应用SPSS 16.0进行统计分析。结果NSCLC患者初始T细胞/干细胞样中央记忆T细胞(TN/SCM)百分率及绝对数均明显低于对照组[(7.71±1.11)% vs. (15.84±2.00)%，t＝3.685，P＝0.001；(8.38±1.23)×107/L vs. (3.40±0.43)×108/L，t＝6.130，P<0.001]，中央记忆T细胞(TCM)百分率及绝对数均明显低于对照组[(6.62±1.16)% vs. (17.88±0.83)%，t＝7.641，P<0.001；(7.98±1.78)×107/L vs. (3.40±0.31)×108/L，t＝9.028，P<0.001]，CD8＋TCM细胞绝对数明显低于对照组[(5.19±1.04)×106/L vs. (1.49±0.15)×107/L，t＝5.561，P<0.001]。NSCLC患者效应记忆T细胞(TEM)百分率明显高于对照组[(38.27±2.01)% vs. (17.37±1.06)%，t＝8.776，P<0.001]，CD8＋TEM细胞百分率及绝对数均明显高于对照组[(13.93±1.55)% vs. (4.65±0.52)%，t＝5.310，P<0.001；(1.48±0.14)×108/L vs. (9.97±1.14)×107/L，t＝2.584，P＝0.014]，终末分化效应记忆T细胞(TEMRA)百分率明显高于对照组[(17.33±1.86)% vs.(8.48±1.01)%，t＝3.989，P<0.001]。Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者CD8＋TCM细胞百分率及绝对数均明显低于Ⅲ～Ⅳ期患者[(0.33±0.06)% vs. (0.89±0.34)%，t＝2.600，P＝0.020；(3.99±0.84)×106/L vs. (9.03±3.07)×106/L，t＝2.270，P＝0.040]。不同病理类型NSCLC患者的初始T细胞及记忆T细胞亚群差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论NSCLC患者初始/记忆T细胞亚群较健康志愿者发生变化，具有分化能力和长期存活特性的TN/SCM及TCM降低，而且Ⅰ～Ⅱ期患者降低更为明显，以发挥免疫效应为主的TEM及TEMRA明显升高。

简介：【摘要】T细胞治疗成为癌症的重要疗法之一，过继T细胞转移治疗、嵌合抗原受体T细胞（CART）和T细胞受体嵌合型T细胞（TCRT）取得了一定的效果。过继T细胞转移治疗的适应症较广，有效率偏低，CART中效果较好的是CART-CD19，主要应用于B细胞白血病和淋巴瘤的治疗，TCRT可应用于实体瘤治疗，但一旦肿瘤抗原突变就会造成“脱靶”。本文概括了CART和TCRT的原理和作用特点，并对它们存在的不足之处进行了分析。

简介：目的构建含有人髓细胞白血病基因-1（myeloidcellleukemia-1,MCL1）和绿色荧光蛋白基因（pEGFP）的真核共表达载体,为聋病的基因治疗奠定实验基础。方法应用基因重组技术和限制性内切酶酶切,及基因测序方法,构建并鉴定pEGFP-MCL1真核表达质粒。经脂质体介导转染293细胞系,荧光显微镜下观察pEGFP-MCL1真核表达质粒在293细胞系中的表达,利用逆转录-聚合酶链反应（Reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RT-PCR）检测MCL1mRNA的表达,WesternBlot（蛋白质印迹）方法检测MCL1蛋白的表达。结果阳性重组子经酶切鉴定含有MCL1基因片段,基因测序结果与GenBank中MCL1序列相同。重组pEGFP-MCL1真核表达质粒转入293细胞系后24小时,荧光显微镜下可见绿色荧光表达,RT-PCR能够扩增出MCL1的条带,WesternBlot检测出40kDa大小的蛋白。结论成功地构建了含有人全长MCL1基因和pEGFP基因的真核共表达载体,且能在哺乳动物293细胞系中表达。

简介：摘要：

简介：目的：探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Treg）对脓毒症过程中效应性T细胞（Teff）凋亡的影响。方法：应用SPF级健康雄性BALB/C小鼠制备盲肠结扎穿孔术（CLP）脓毒症模型。小鼠随机分为正常对照组、假伤组、CLP组、CLP＋PC61（Treg特异性抑制剂）组、CLP＋HRPN（PC61的同型对照蛋白IgG）组。免疫磁珠法分选小鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Treg。采用流式细胞术观察T淋巴细胞毒性相关抗原（CTLA）-4及转录因子叉头翼状螺旋转录因子（Foxp3）表达以及CD25比例的变化,并检测各组小鼠CD4＋CD25-T细胞的凋亡率。ELISA法检测外周血中白细胞介素（IL）-10、IL-2、IL-4和干扰素（IFN）-γ的含量变化。结果：CLP＋PC61组术后48h小鼠生存率（90%）较CLP组（60%）明显升高;CLP＋PC61组CD4^＋CD25^＋Treg中Foxp3及CTLA-4表达恢复至正常对照组水平,与CLP组差异有统计学意义（P〈0.05）,并且CLP＋PC61组CD25表达水平最低。CLP＋PC61组IL-2、IFN-γ水平显著升高,与CLP组差异明显（P〈0.05）,但IL-4、IL-10水平较CLP组出现不同程度地下降（P〈0.05）。此外,CLP＋PC61组效应性T细胞凋亡率明显低于CLP组（P〈0.05）。结论：拮抗小鼠体内调节性T细胞活性可有效地减轻脓毒症状态下效应性T细胞凋亡,提高小鼠生存率。

简介：摘要：目的：探讨外周血记忆T细胞和调节性T细胞检测对胃癌的临床价值，同时分析两种T细胞对胃癌临床病理的关系。方法：本次研究将通过对照实验的形式实施，将纳入32例胃癌患者参与实验，将其命名为患者组，于同期再次选取32例健康者进行对照实验，命名为对照组。实验开始后抽取2组研究对象外周血样本，通过荧光标记对两组研究对象的抗CD4、抗CD8、抗CD45RO、抗CD62L进行染色，随后分别检测记忆T细胞和调节性T细胞，并探析记忆T细胞和调节T细胞与胃癌病理之间的关系。结果：对两组患者的外周血记忆性T细胞分布情况进行了分析，从数据显示可见，患者组与对照组的CD8+T、CD8+TCM、CD8+TCM/CD8+T、CD8+TEM/CD8+T存在明显差异（P＜0.05），其余指标差异不大（P＞0.05）。其次，针对患者组的CD4+T细胞、CD4+TCM、CD4+TEM与临床病理特征关系进行了分析，在CD4+T细胞方面，患者组性别、TNM分期差异明显（P＜0.05），CD4+TEM方面性别方面男性高于女性，（P＜0.05），其余指标差异均不大（P＞0.05）。结论：胃癌患者外周血记忆性T细胞、调节性T细胞与健康者之间存在较大差异，有利于提升为胃癌病理情况的检测，有助于提高对胃癌的预后治疗。

简介：参照人的T细胞分离方法用于猪T细胞分离，经二次绵羊红细胞分离的T细胞，用PHA从功能上鉴定获得纯度很高的T细胞，能进一步用于有关T细胞方面研究。

简介：解析我认为这是一道错题。大纲版选修教材在2007年修订时，删除了“T细胞呈递抗原”的说法，并做了相应修改。

简介：摘要炎症免疫反应贯穿缺血性卒中病程的始终。不同亚群CD4+ T细胞在缺血性卒中病程中起着复杂而重要的作用。其中，辅助性T细胞17(T helper cell 17, Th17)与调节性T细胞(regulatory T cell, Treg)的促炎与抑炎作用的平衡与卒中转归密切相关。文章就Th17/Treg平衡在缺血性卒中中的作用进行了综述，旨在加深对缺血性卒中后免疫炎症机制的认识，同时探究缺血性卒中病程中可能的治疗靶点。

简介：摘要滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cells，Tfh)在维持生发中心功能、调控B细胞亲和力成熟、浆细胞分化及记忆B细胞产生等发挥重要作用。初始CD4+T细胞分化成Tfh细胞的过程较复杂，不仅受抗原的性质和细胞因子等因素的调控，还需要转录因子及RNA结合蛋白等共同参与其分化过程。文章总结了诱导初始CD4+T细胞分化成Tfh细胞过程中的调控机制，以及Tfh细胞具有向其他亚群分化潜能的可能机制，以便为疫苗研制及免疫疾病治疗等提供依据。

简介：摘要目的观察不同砷化合物对体外培养的的人胚肾细胞系HEK-293细胞毒性。方法培养的HEK-293分别暴露于三氧化二砷（As2O3,iAsⅢ，0～50μmol/L）、砷酸氢二纳（Na2HAsO4•7H2O，iAsⅤ，25～500μmol/L）、二甲基砷酸钠（C2H6ASO2Na﹒3H2O，DMA，25～500μmol/L）24h，应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞生存率。结果不同剂量范围内的iAsⅢ、iAsⅤ除了50，100，300μmol/LC2H6ASO2Na﹒3H2O均能够显著降低HEK-293的细胞生存率(P<0.05);对细胞的毒性从从大到小依次为iAsⅢ>iAsⅤ>DMA。结论通过氧化应激损伤，三种形态砷化物在一定剂量范围内对人胚肾细胞系HEK-293细胞有毒性作用。

简介：摘要目的利用超声靶向微泡破裂(UTMD)技术介导T细胞Itch基因沉默，观察T细胞免疫活性变化。方法磁珠分选纯化T细胞，构建靶向Itch基因的短发夹RNA(shRNA)表达质粒。实验组为超声辐照＋Itch-shRNA质粒-SonoVue微泡，对照组为超声辐照＋阴性对照shRNA质粒-SonoVue微泡，空白组未处理。转染48 h，荧光显微镜和流式细胞术评估细胞转染效率，免疫印迹(Western blot)法检测Itch基因蛋白表达水平。转染72 h,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞上清液中白介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)水平。采用单因素方差分析比较多组间差异，两两比较LSD-t检验。结果利用UTMD技术介导shRNA转染效率达到52.3%，转染后实验组、对照组和空白组Itch相对蛋白表达量分别为0.301±0.080、0.773±0.101和0.719±0.090，实验组Itch蛋白表达显著降低，差异有统计学意义(F＝24.441，P<0.01)。转染72 h，实验组、对照组和空白组IL-2浓度分别为(417.3±37.1)ng/L、(158.7±17.3)ng/L和(147.0±10.2)ng/L，差异有统计学意义(F＝118.701，P<0.001)；IFN-γ浓度分别为(168.3±12.1)ng/L、(74.3±3.7)ng/L和(74.6±7.1)ng/L，差异有统计学意义(F＝126.833，P<0.001)；实验组IL-2和IFN-γ表达水平较对照组和空白组显著升高。结论利用UTMD技术介导Itch-shRNA转染能明显降低T细胞Itch水平，增强T细胞免疫活性。

简介：摘要香菇多糖具有疗效高，剂量低，毒副作用小的特点，可用于身体情况无法进行手术或化疗的肿瘤病人，临床上大量研究显示香菇多糖对治疗肿瘤有很好的疗效，但是所有研究都是直接针对于免疫淋巴细胞的，所以我们直接研究香菇多糖对CAF细胞的作用，可以得出香菇多糖治疗肿瘤的疗效。本次通过实验，使用香菇多糖注射剂研究其对肿瘤CAF细胞、脾细胞中T细胞的影响。并分别记录了三种不同剂量对上述两种细胞的影响。希望本身实验结果能够给到大家更多的参考和帮助。

简介：目的观察健康汉族老年人群外周血调节性T细胞及辅助性T细胞表达情况。方法选择2016年春季在营口市鲅鱼圈区中心医院参加健康体检人员75例。入选对象均为汉族成年入，依照年龄进行分组：老年组（〉160岁）41例和成年组（〈60岁）34例。两组对象体检期间接受了外周血调节性T细胞（CD4CD25＋Treg和CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg）和辅助性T细胞（CD3＋，CD4＋，CD8＋，CD4＋／CD8＋）检测。结果老年组外周血辅助性T细胞CD4＋表达水平及CD4＋／CD8＋比值均明低于成年组，而CDs＋表达水平明显高于成年组（P〈0．05，P〈0．01）。老年组外周血调节性T细胞CD4CD25＋Treg和CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg表达水平均明显高于成年组（P〈0．05，P〈0．01）。结论增龄可引发健康汉族老年人群外周血调节性T细胞和辅助性T细胞异常表达变化。

简介：目的建立稳定表达肾癌G250基因与基因佐剂hGM-CSF基因编码蛋白的的HEK293细胞系。方法通过脂质体转染的方法,将表达肾癌G250基因与细胞因子GM-CSF基因的双顺反子pIG250-GM真核表达质粒导入HEK293细胞中;经持续G418压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系;用免疫组化、ELISA和WesternBlot方法,检测目的蛋白在HEK293细胞中的表达。结果经600μg/mL的G418压力筛选后,获得了抗性细胞克隆;免疫组织化学方法检测到表达G250的阳性细胞;ELISA方法检测到pIG250-GM转染组细胞培养上清中hGM-CSF的表达与空载体对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;WesternBlotting方法检测到G250蛋白的表达,分子量约54Ku,与预期大小相符。结论成功建立可稳定表达肾癌G250基因与细胞因子GM-CSF基因的HEK293细胞系,为研究防治肾癌疫苗的免疫应答机制提供了实验基础。