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  • 简介:摘要:PCR(聚合酶链式反应,polymerase chain reaction)在现代分子生物学分析和遗传学中具有不可撼动的根本性基石地位。它与分子克隆和DNA序列分析几乎构成了整个分子生物学的基础部分。在现代生物科技中,它的应用领域涵盖了方方面面,包括农业、医学、法学与食品科学等。现有PCR扩增技术受限于空间与成本,无法真正流水线处理,现提出一种集自动清洗,扩增与检测于一体的流路装置。

  • 标签: PCR扩增 流路装置 自动清洗
  • 简介:采用PCR扩增皖南花猪ESR基因140bp的特异片段,对ESR基因PCR扩增的相关因素进行研究,以提高扩增的效率,通过多次实验确定皖南花猪ESR基因的PCR反应条件。

  • 标签: 皖南花猪 ESR基因 PCR
  • 简介:摘要目的研究抵抗素基因-420C/G位点多态性PCR扩增体系优化的实验条件。方法对实验研究中的主要影响因素设置各系列浓度和梯度,进行PCR反应后观察电泳结果,选取最适条件。结果最适温度为55°C,最适Mg2+浓度为1.5mmol/L,最适dNTP浓度为2.5mmol/L。最适扩增循环为35个循环。结论探索抵抗素基因多态性检测的最适实验条件,优化抵抗素基因多态性PCR扩增体系,使其扩增获得最高产物率。

  • 标签: PCR 扩增体系 抵抗素基因多态性
  • 简介:采用PCR法获得拟南芥叶绿体核糖体psrp-3基因序列并进行生物信息学分析.根据psrp-3基因序列保守区设计2对引物,通过RT-PCR获得预期大小的基因序列,琼脂糖凝胶电泳鉴定目的片段.利用生物信息学软件对拟南芥psrp-3基因序列进行同源比对、氨基酸组成、功能域、二级结构、疏水性、蛋白质功能及系统进化分析和预测.结果表明,RT-PCR获得了一段753bp的序列,psrp-3蛋白是等电点为9.27的亲水性稳定蛋白,包含一个结构域和一个区域,α螺旋和不规则卷曲是其蛋白质二级结构的主要结构元件,β折叠和伸展链散布其中,和菠菜、葡萄、蓖麻、大豆等的psrp-3蛋白有较高的同源性.为进一步了解psrp-3基因的功能和作用机制打下基础.

  • 标签: 拟南芥 叶绿体 psrp-3基因
  • 简介:【摘要】目的 探讨聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction ._PCR)基因扩增法检测孕妇滋养细胞中沙眼衣原体感染效果。方法 选取2021年1月-2022年12月本院80例孕妇,冲洗所有孕妇宫颈内口并获得滋养细胞,同时采用PCR基因扩增法检测滋养细胞,加强对沙眼衣原体感染情况的检测,并分析不同孕期阳性率、孕妇产次、年龄与沙眼衣原体感染的相关性。结果 80例孕妇中,经检测阳性者23例,阳性率是29.00%,其中包含孕早期感染、孕中期感染、孕晚期感染分别有5例、6例、12例,占比分别是21.74%、26.08%、52.17%。23例检测为阳性孕妇中,低于25岁感染孕妇5例,25-30岁感染孕妇7例,31-35岁感染孕妇5例,35岁以上6例,占比分别是21.74%、30.43%、21.47%和26.09%。23例检测为阳性的孕妇中,产次为1次者7例,感染率是30.43%,产次为2次者8例,感染率是34.78%,产次为三次者8例,感染率是34.78%。孕妇滋养细胞中沙眼衣原体感染与孕妇孕期有关,与孕妇年龄及产次无关。结论 孕妇滋养细胞沙眼衣原体感染临床检测过程中,PCR基因扩增法的应用可明显提高诊断准确率,而且操作便捷、简单,值得采纳、推广。

  • 标签: 孕妇 滋养细胞 PCR基因扩增法 沙眼衣原体感染
  • 简介:本研究以双单倍体马铃薯DM的突变体为材料,利用PCR-walking的方法扩增其突变体的侧翼序列。在试验中,以60个鉴定过的阳性突变体样品为材料扩增后,有28个样品扩增出有效条带。PCR胶回收后测序,有2个样品测序无信号,其他26个样品,将测序与载体序列和马铃薯基因组序列用BLASTN比对,发现有6个样品分别插入到了马铃薯1、3或7号染色体上。通过进一步比对,发现编号为TDM90的突变体中,载体插入了PREDICTED:Solanumtuberosumtrans-resveratroldi-O-methyltransferase-like(LOC102590422),mRNA马铃薯反式白藜芦醇基因中。试验说明了PCR-walking法扩增马铃薯侧翼序列是可行的。且载体插入马铃薯反式白藜芦醇基因中对马铃薯白藜芦醇基因的表达有何影响,有进一步研究下去的重要意义。

  • 标签: 马铃薯DM突变体 PCR-walking 侧翼序列扩增 白藜芦醇
  • 简介:摘要目的探讨肾综合征出血热患者血清中HV-RNA的RT-PCR检测的可行性,以及扩增的部分HV靶基因的测序分析。方法设计并合成了两套分别互补于HVM基因片段和S基因片段的引物,建立检测肾综合征出血热患者临床血清标本中HV基因的RT-PCR方法,并对扩增的部分HV靶基因进行测序分析和比较。结果206份HFRS患者血清经RT-PCR扩增后,得到特异性的M和S靶基因片段,对急性期HFRS患者血清经RT-PCR检测,结果显示,S基因片段引物对HV靶基因检出率为60.93%,M基因片段引物检出率为40.63%,S基因片段引物的扩增效果显著优于M基因片段,两者相比具有统计学意义(x2=3.67,P<0.05)。结论S基因片段引物的扩增效果优于M基因片段引物。

  • 标签: 汉坦病毒 肾综合征出血热 聚合酶链式反应
  • 简介:摘要为确定PCR(聚合酶链反应)扩增葡萄糖激酶基因启动子区,对影响PCR的实验因素进行了系统研究。研究结果表明最佳引物浓度为0.3μmol/L;以1U酶量效果最满意;最适dNTP浓度为167μmol/L;最适Mg2+浓度为1.5mmol/L。以上参数偏离最适条件将会导致实验失败。

  • 标签: 聚合酶链反应 基因 扩增条件
  • 简介:目的为了提高输血安全性,探讨国产核酸扩增试剂在血站血液乙型肝炎病毒(HBV)筛查中应用的可行性。方法在酶联免疫吸附试验(EUSA)常规筛查血液乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的基础上,采用荧光聚合酶链反应(PCR)技术(国产核酸扩增试剂)对初、复检合格的献血者的血清汇集标本(8人份×150μL)进行HBVDNA检测,对初始反应阳性的汇集标本拆分后再进行单份检测,用国家标准质控品考评检测限量,用已知HBVDNA阳性血样评估检出情况。结果应用国家HBVDNA标准品考评,本方法的95%检测限量为98.0IU/mL,可信限范围为[55.8,5487。对9611份标本共1208个汇集池进行检测,初始检测阳性池7个,阳性率为0.58%,进一步拆分检测,未检出HBVDNA阳性标本;对检测阴性的汇集标本随机进行234份单份检测(1400μL上样浓缩),亦未检出HBVDNA阳性标本。结论同国际知名核酸检测试剂相比,国产核酸扩增试剂的灵敏度和特异性有待进一步提高。

  • 标签: 核酸扩增技术 荧光聚合酶链反应 肝炎病毒 乙型 血液筛查
  • 简介:目的通过改进和优化多重扩增阻滞突变系统-PCR(multi-ARMS-PCR)条件,建立载脂蛋白E(ApoE)基因的简易分型方法。方法基于multi-ARMS-PCR的原理和特点,针对文献报道方法中存在的缺陷和错误,重新设计或改进引物。以外周血白细胞基因组DNA为模板,应用4个等位基因特异性寡核酸上游引物、1个通用下游引物和一对内参引物,分A,B两个管同步进行多重PCR反应。PCR扩增产物经过琼脂糖凝胶电泳分离-EB染色,根据电泳带型的差异,实现对ApoE6种基因型的判定。结果新引物显著提高了扩增效率和反应特异性,排除了非特异条带的干扰,减少了ApoE基因分型的错判。结论采用优化后的multi-ARMS-PCR方法对ApoE基因型进行鉴定,具有操作简便、时间短、效率高、成本低的优点,值得推广。

  • 标签: 载脂蛋白E 多重扩增阻滞突变系统-PCR 基因分型
  • 简介:目的核酸序列依赖性扩增(nucleicacidsequence-basedamplification,NASBA)、Real-timePCR及GM试验在侵袭性曲霉菌感染中的诊断价值。方法收集2013年11月~2014年6月临床上曲霉菌感染高危病患的血液标本80例,并根据EORTC/MSG诊断标准分为确诊组8例,拟诊组26例,非感染组46例,分别利用NASBA、real-timePCR及GM试验进行检测,计算3种方法的诊断指标并分析评价。结果NASBA、real-timePCR及GM试验3种方法的灵敏度分别为76.47%、67.65%、52.94%,特异度分别为80.43%、89.13%、80.43%。联合诊断结果显示,NASBA与real-timePCR串联方案有最好的特异度(100%)及阳性预测值(100%);NASBA与real-timePCR并联方案则最为灵敏(94.12%)。结论NASBA用于诊断IA最为敏感,而real-timePCR则最为特异,GM试验的表现差于前两者。联合应用的诊断策略,在特定情况下提高临床早期诊断IA的准确性。

  • 标签: 侵袭性曲霉菌感染 核酸序列依赖性扩增 实时PCR GM试验
  • 简介:摘要:目的  探索新型冠状病毒核酸检测PCR扩增试剂配制后于不同条件下保存对检测结果的影响。方法  按照新型冠状病毒2019-nCOV核酸检测试剂说明书反应体系的配制方法配制一批PCR扩增试剂并根据使用量进行分装至PCR反应管中,于当日检测一批样本(第1天),剩余试剂分为两组A和B,A组置于4℃冷藏保存,B组置于-20℃冷冻保存备用;以后每天分别对第1天检测的样本使用两组试剂同时检测,记录检测结果,连续检测5天,计算内标(RNP)CT值的CV及每日检测结果与第1次检测结果的差异,评价其稳定性及结果符合率。结果  从第1天至第6天A组试剂检测样本RNP CT值CV-A为3.32%;从第1天至第6天B组试剂检测样本RNP CT值CV-B为2.62%;A组试剂第2天至第5天检测结果与第1天比较,符合率-A分别为:82.61%、75.36%、78.26%、78.26%、73.91%,平均值为77.68;B组试剂第2天至第5天检测结果与第1天比较,符合率-B分别为:78.26%、94.20%、94.20%、81.16%、71.01%,平均值为83.77%。结论  样本分装-70℃超低温保存后使用A、B两组试剂检测,内标CT值CV均小于5%,对检测结果无影响;A、B两组试剂检测样本符合率B组优于A组,但符合率均未达到100%,证实新型冠状病毒核酸检测PCR扩增试剂应根据当批检测样本量进行现配现用,若因提前配制未使用完的试剂,无论置于4℃冷藏保存还是置于-20℃冷冻保存,均有可能对检验结果产生假阴性或假阳性。

  • 标签: 新型冠状病毒 核酸检测 试剂保存 结果影响。
  • 简介:目的:建立一种适合以红花cDNA为模板进行相关序列扩增多态性(SRAP)扩增的体系,筛选最佳的SRAP-PCR反应条件。方法:提取红花RNA并反转录成cDNA,以此为模板,使用正交设计表设计PCR反应中的3个重要因素Taq酶、三磷酸脱氧核苷(dNTPs)、引物的反应浓度。随后设计Mg^2+的反应浓度以及模板含量,分别进行单因素试验。结果:本研究建立的红花cDNA-SRAP扩增条件为:25μL反应体系中含模板cDNA20ng,1×PCR缓冲液2.5mmol/L,Mg^2+2.0mmol/L,TaqDNA聚合酶0.04U/μL,dNTPs0.2mmol/L,引物0.2μmol/L。优化后扩增结果稳定性好,条带清晰,多态性好。结论:该体系为红花功能基因的研究奠定了基础。

  • 标签: 红花 CDNA 相关序列扩增多态性 分子标记 逆转录聚合酶链反应
  • 简介:在人教版高中《生物·选修3·现代生物科技专题》关于PCR的教学中,有几个问题会经常困扰教师和学生。下面就列举这些问题并作以解答。

  • 标签: PCR 生物科技 人教版
  • 简介:摘要:在现代生物医学研究中,PCR扩增和毛细血管电泳分析是常用的分子生物学技术和分析方法。PCR扩增用于复制特定DNA片段,而毛细血管电泳分析则用于分离和检测DNA片段。然而,传统的PCR扩增和毛细血管电泳分析分别需要使用不同的设备和步骤,带来一些不便和时间耗损。因此本文旨在提供一种与集PCR扩增与毛细血管电泳分析于一体的卡夹装置和检测方法,利用微流控芯片技术,通过集成PCR扩增反应体系和毛细血管电泳分析通道,实现高效整合。同时,该装置还结合了温度控制和电流控制等关键技术,以确保PCR反应和电泳分析的准确性和高效性。

  • 标签: PCR扩增 毛细管电泳 一体式卡夹
  • 简介:德国Vinnolit公司日前完成位于德国BurgShausen的PVC糊树脂装置扩能项目。据悉,此次扩能投资1600万欧元,扩能后该装置年产能达8万吨,Vinnolit公司PVC糊树脂总年产能将达23万吨。此次新增产能将主要服务西欧和东欧市场。

  • 标签: PVC糊树脂 产能 糊树脂装置 it公司 扩能 德国
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  • 简介:俄罗斯聚合物生产商Polief公司于2008年5月底宣布,扩增其联合生产装置中的PET聚酯和PTA(精对苯二甲酸)能力,至2011年分别达到400kt/a和600kt/a,以保持其在俄罗斯的PET和PTA领先地位。

  • 标签: PET聚酯 PTA 俄罗斯 能力 精对苯二甲酸 联合生产装置