简介：随着现代分子生物学技术的发展,反转录聚合酶链式反应技术在甘薯病毒检测上的应用越来越广泛。采用该技术可检测出甘薯组织中含量极低的病毒RNA,具有灵敏度高、特异性强等优点。在本研究中根据NCBIGenBank中收录的SPCSV病毒外壳蛋白（CP）基因核苷酸序列的保守区域设计了3对特异性引物,使用天根生化科技（北京）有限公司生产的QuantOneStepRT-PCRkit试剂盒,针对影响扩增产物的影响因素退火温度进行优化,建立了甘薯退绿矮化病毒的RT-PCR检测方法。该方法使RT-PCR在一管内完成,大大降低了外源物质的污染及RNA降解的几率,可作为甘薯SPCSV病毒的快速检测方法。

简介：

简介：目的：对比分析酶联免疫吸附试验（ELISA）法和实时荧光定量PCR（RT-PCR）法在麻疹病毒检测中的应用。方法：由本市各医院采集并送至本中心接受麻疹病毒检测的50例疑似麻疹患者为研究对象，所有患者标本均采用ELISA法和RT-PCR法进行麻疹病毒检测。对比两种检测方式在不同出疹时间段所取标本的阳性率、检测水平。结果：在50例疑似麻疹患者中，ELISA法检测麻疹病毒IgM抗体阳性22例，IgM抗体阴性28例，阳性率为44.00%；RT-PCR法检测，麻疹病毒IgM抗体阳性26例，IgM抗体阴性24例，阳性率为52.00%，两种检测方式阳性率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。患者出疹第1天收集的标本，采用ELISA法检测阳性率为60.00%，采用RT-PCR法检测阳性率为80.00%。随着患者采样时间不断改变，两种检测方式的阳性率均逐渐降低，两种方法检测的阳性率比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。50例麻疹疑似患者同一时间段采集血清和咽拭子标本，24例患有免疫史，不伴随有免疫史亦或者是不详的共26例。结论：RT-PCR法适用于出疹时间在2d之内疑似麻疹患者的临床诊断中，而ELISA法则适合使用在出疹时间在2d或以上疑似麻疹患者的临床检测中。

简介：摘要目的探讨非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer，NSCLC)患者胸水标本不同预处理方式对EML4_ALK融合基因RT-PCR法检测的影响，以提高肺癌患者EML4_ALK融合基因的阳性检出率。方法收集本院非小细胞肺癌恶性胸水标本20例，同时采用2种不同的标本预处理方法提取RNA后采用突变扩增系统PCR(ARMS-PCR)法检测EML4_ALK融合基因，一种为直接离心提取法，另一种为制备细胞蜡块后切片提取法，对比两种预处理方式对检测结果的影响。结果50例非小细胞肺癌标本中，细胞蜡块切片提取法检测到的阳性样本数也同样为3例且与石蜡包埋提取法的阳性样本一致，直接沉淀提取法检测到的阳性标本数为1例，占总数的2%。结论制备细胞蜡块后切片提取法无论在检测成功率还是阳性检出率方面均显著优于直接离心提取法。

简介：【目的】谷斑皮蠹是一种重要的检疫性害虫,在新疆周边多个国家分布,口岸检疫人员多次从进境货物中截获谷斑皮蠹,该虫对新疆的农业生产极具威胁。【方法】以谷斑皮蠹的16SrDNA基因为靶序列,用昆虫通用引物对4种供试皮蠹进行PCR扩增,将扩增产物进行克隆和测序,用生物软件设计检测谷斑皮蠹的特异性引物与探针。【结果】设计的特异性引物（TG-SNP-F/TG-SNP-R）及所建立的常规PCR方法能有效检测出谷斑皮蠹,其扩增产物的片段大小为250bp,灵敏度为3ng·μL^-1设计的特异性引物（TG-F/TG-R）和探针（TG-probe）,以及所建立的实时荧光PCR方法,对谷斑皮蠹的检测特异性强,灵敏度达0.8fg·μL^-1【结论】建立的常规PCR方法和实时荧光PCR检测方法能够对谷斑皮蠹进行准确鉴定,为口岸检疫人员检测进境货物中携带的谷斑皮蠹提供技术支持。

简介：摘要目的对于痰液中结核分枝杆菌采用荧光PCR技术进行检测的检测结果进行研究。方法将120例结核患者作为研究对象，分别进行荧光PCR技术检测和痰涂片检查，分析荧光PCR技术检出的阳性率，然后分别进行荧光PCR技术和固体培养检查，以固体培养检查为金标准，检验荧光PCR技术的敏感度和特异度。结果在进行荧光PCR技术和痰涂片培养检查中，荧光PCR技术检出的阳性率为51.67%明显高于痰涂片培养检查35.83%，组间数据对比差异显著P<0.05。在和固体检查培养中比较，荧光PCR技术敏感性和特异性分别为93.33%和95%。结论荧光PCR技术在结核分枝杆菌的诊断中具有较高的敏感性和特异性，且诊断阳性率较高，效果明显，值得临床推广。

简介：摘要目的探讨荧光定量PCR技术在临床微生物检测中的应用价值。方法随机选取来我院进行治疗的80名患者，采用荧光定量PCR技术在临床微生物检测技术进行检测，观察临床微生物的情况。结果荧光定量PCR技术在临床微生物检测技术的精确度高，特异性好、效果好。结论荧光定量PCR技术在临床微生物检测中敏感度好，精准度高。

简介：摘要转基因技术给全球的食品行业带来了巨大的经济效益，随着世界上各国不断对转基因技术和转基因农产品的开发利用，人们开始广泛关注食用转基因产品对人类健康的影响以及种植转基因农产品对生态环境的影响。各国政府和国际机构都十分重视对转基因作物及转基因食品进行综合评价，对转基因作物及转基因食品的综合评价需要一套科学合理的安全评价体系，也应该建立一套完善、严格的法律法规。本文分析了实时荧光定量PCR技术在转基因食品检测领域中的应用。

简介：摘要目的研究实时荧光定量PCR对乙肝DNA检测的影响因素。方法本研究所有研究对象均选择我院在2016年6月到2016年7月收治的乙肝病毒感染患者，共计涉及到150例。对所有患者的血标本进行收集，然后采用荧光定量PCR检测方法对乙肝DNA进行检测，分析检验结果和临床的诊断结果的符合情况，并且研究对影响检验结果的相关因素。结果本研究150例乙肝病毒感染患者的血液标本当中，选择实时荧光定量PCR进行乙肝DNA的检测，检测结果和临床的诊断结果相同的144例，存在误诊和漏诊共计6例。对主要影响因素进行分析，主要涉及到了标本因素、实验室检验因素以及核酸提取方法因素等。结论选择实时荧光定量PCR对乙肝DNA进行检测，能够有效提升检测的确诊率，但是对于误诊和漏诊的原因进行分析，其主要涉及到的因素是多方面的，因此临床需要加以注意，只有这样才能降低误诊和漏诊率，为临床的治疗提供便利和支持。

简介：摘要目的对阴道细菌检测采用聚合酶链式反应（PCR）法及细菌培养法的应用价值进行分析探讨。方法以我院2014年1月～2016年12月收治的144例患者作为研究对象，对患者分别行PCR检测及细菌培养法，对比两种检测方法的检测率。结果PCR检测法的阳性检出率为83.33%，明显高于细菌培养法的61.81%（P<0.05），PCR检测法的加特纳菌检出率为75.69%，显著高于细菌细菌培养法的46.53%（P<0.05）。结论在阴道细菌检测中采用PCR法具有检出率高、操作简便等优点，值得临床推广应用。

简介：摘要目的建立TaqManTM实时荧光pcr检测副溶血性弧菌的快速检测方法，为食物中毒快速准确的定性检测及食品中副溶血性弧菌染菌率的调查提供手段。方法通过分析，最终选择tlh基因作为目的基因，在Genebank进行中查找多条TLH基因序列，并利用DNAssist软件进行同源性分析，选取相对保守区段，用BeaconDesigner软件自行设计引物和TaqManTM探针，并利用核酸提取试剂盒煮沸法制备基因组DNA，通过对TaqManTM实时荧光PCR缓冲液浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶浓度、引物浓度和探针浓度等反应条件的优化，初步建立副溶血性弧菌的TaqManTM实时荧光PCR快速检测方法。结果选取的tlh基因同源性达到98.9%以上（13/1234），同源性好。通过对各实验条件的优化，得到副溶血性弧菌TaqManTM实时荧光PCR的最佳反应条件，初步建立TaqManTM实时荧光PCR检测副溶血性弧菌的快速检验方法。结论TaqManTM实时荧光PCR检测灵敏度高、特异性好，而且检测周期短，能提高副溶血性弧菌的检出率和检测准确性。

简介：摘要目的探讨耐药基因突变以及L型耐利福平的关系。方法对2015年8月到2016年8月期间，在我院收治的96例肺结核患者进行研究。采用PCR-SSCP法，对50株MTL型临床分离株进行测试。同时，进行常规的药敏实验。然后，对比检测的结果。结果在96例肺结核标本中，有54份被检出为MTL型，占56.3%，包括42例人型结核分支杆菌，12例牛型结核分支杆菌。在药敏试验中，将50株MTL型临床分离株作为研究对象。其中，有24株敏感，耐药率为52%。通过PCR-SSCP分析中，显示21例为阳性，检出率为42%。在恢复试验中，显示21株rpsL基因突变株中，15株依然对利福平有耐药性，占到71.4%。29株rpsL基因阴性株中，有26株恢复为细菌性，占到89.7%。结论对50株MTL型临床分离株进行测试后，有24株对利福平产生耐药性，占52%。21株显示阳性，检出率为42%。根据药敏结果，以及PCR-SSCP法，得出的两种办法的符合率为80.9%。

简介：摘要目的分析乙肝病毒DNA（HBV-DNA）的荧光定量PCR（FQ-PCR）检测对临床诊断的意义方法对我院2015年3月到2016年3月收治的420名乙肝患者作为研究对象，抽取420名患者的临床血清标本通过ELISA法进行定性检测，根据乙肝两对半定性结果进行分组，最后采用荧光定量PCR技术进行定量检查。结果95份乙肝病毒标志物HBsAg、HBeAg、HBcAb标本中有89份HBV-DNA为阳性，阳性率为93.7%，荧光定量PCR拷贝数为（4.19±1.16）×107/ml；130份乙肝病毒标志物HBsAg、HBeAb、HBcAb标本有92份HBV-DNA阳性，阳性率达到71.7%，荧光定量PCR拷贝数为（4.73±2.49）×105/ml；38份乙肝病毒标志物HBsAg、HBcAb标本中有13份HBV-DNA为阳性，阳性率为34.2%，荧光定量PCR拷贝数为（2.13±1.37）×104/ml；75份乙肝病毒标志物HBsAb的标本HBV-DNA阳性23例，阳性率为3.1%，荧光定量PCR拷贝数为（6.07±0.86）×103；82份乙肝病毒标志物全阴性的标本HBV-DNA阳性11例，阳性率为1.3%，荧光定量PCR拷贝数（2.77±0.79）×104/ml.结论荧光定量PCR测定HBVDNA在多种模式的乙肝病毒标志阳性血清或阴性血清都可查出，能较真实反映体内HBV感染、复制和病毒载量情况，具有一定的临床早期诊断的价值。

简介：甘蔗是重要的糖料作物,也是重要的能源作物。由于复杂的遗传背景、较低的可育性和缺乏优异种质资源等因素给甘蔗品种改良带来了很大的困难,通过转基因技术为甘蔗品种改良提供了有效的途径。而转基因植物的遗传稳定性是植物转基因育种过程中一项重要的研究课题。本研究通过一次多基因遗传转化,同时将四个目的基因导入甘蔗品种新台糖22号中。通过PCR检测,对转基因甘蔗T_0、T_1和T_2代的遗传稳定性进行分析;通过外源蛋白快速试纸条检测,对转基因植株四个外源基因中的基因（bar抗除草剂基因和cry1Ab抗虫基因）蛋白表达进行检测。证明一次四基因遗传转化的甘蔗转基因株系,在T_0代出现了部分基因丢失的现象,且T_0代甘蔗的主茎和分蘖可能为不同的转基因事件。但如果是四个基因均能完整整合到基因组中的株系,则四个基因可以在T_0、T_1和T_2代中得到稳定遗传,也可以稳定的检测得到外源基因蛋白的表达。

简介：

简介：[目的]全球转基因植物及其产品的数量和种类越来越多，迫切需要可同时精准高效检测多个转化载体的检测方法。[方法]针对RF1、MS8、Topas19/2、Oxy235和RF3等5个转基因油菜品系的侧翼序列及油菜内源基因cruciferinA（CruA）序列设计多重聚合酶链式反应特异性引物，通过对转基因油菜、转基因大豆、转基因玉米、转基因水稻、转基因棉花等不同作物进行PCR扩增来测试所选择的引物特异性，优化多重PCR反应引物的浓度，用所建立的检测体系对不同混合比例的转基因油菜进行多重PCR扩增来测试所建立的检测方法的灵敏度。[结果]通过测试，仅在含有目标样品中检测出阳性结果，灵敏度达0.05%，表明所建立的6重PCR检测方法可同时精准检测RF1、MS8、Topas19/2、Oxy235和RF3等5种转基因油菜转化载体。[结论]所建立的6重转基因油菜转化体特异性PCR检测方法通量高、特异性好、灵敏度高，符合有关转基因产品检测的要求，可作为转基因油菜检测的有效方法。

简介：摘要目的探讨乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒(HBV)的实时荧光PCR定量方法及临床意义。方法对60例临床血清标本用荧光PCR定量检测的操作方法及临床意义。结果乙型肝炎大三阳患者血清HBVDNA检出率为100%,HBVDNA的对数值为7.2±1.8;小三阳患者血清HBVDNA检出率为64.5%,HBVDNA的对数值为4.9±1.3。结论HBVDNA是HBV感染后病毒血症最直接的标志，是判断病毒复制最灵敏的指标，同时也是判断慢性乙型肝炎是否具有活动性的重要指标。

简介：【摘要】：实时荧光定量 PCR 技术是普通聚合酶链式反应技术基础上演变起来，一种灵敏度较高的核算定量技术。与常规 PCR 相比，它的不同之处在于其根据 PCR 产物中莹光信号的强度定量 , 不仅提高了反应的特异性和自动化程度，而且有效解决 PCR 污染等问题，实现了检测质量的飞跃 . 当前已经被广泛应用于医学诊断和环境监测多种领域的研究，本文对实时荧光定量 PCR 的原理，分类以及应用做一系统性综述。

简介：目的：建立一种基于qRT—PCR的微量细胞中和实验改良法，快速、定量检测汉滩病毒感染中的中和抗体活性。方法：将本室前期制备的抗汉滩病毒高中和活性鼠源性单抗3G1、鼠/人嵌合单抗1D9和感染剂量为100TCIDso的病毒混合液于37℃孵育1h后感染Vero—E6细胞，提取细胞总RNA。根据GenBank数据库中汉滩病毒76—118株S基因序列设计特异性引物，在上述实验基础上以细胞总RNA为检测样品，建立qRT—PCR快速、定量检测汉滩病毒感染中中和抗体活性的实验方法。结果和结论：建立了一种基于qRT—PCR的微量细胞中和实验改良法，可定量测定汉滩病毒感染中的中和抗体活性，该法具有快速、灵敏、特异和重复性好等优点。

简介：