简介:摘要显性教学对英语的促进作用,成为学术界主要关心的话题,研究显性的问题对应于能否起到促进的作用,假设对高中的英语是有积极影响的,就以道歉为研究做辅助,进行数据收集的方式,进行实验结果的对比,并且进行假设验证。研究的结果发现显性英语教学对应于的影响效果是非常明显的促进英语的学习。
简介:摘要目的探讨克尔斯滕大鼠肉瘤病毒致癌基因同源物(KRAS)突变亚型对非小细胞肺癌细胞程序性细胞死亡配体1(PD-L1)和2(PD-L2)的表达影响。方法纳入2018年1月至2021年1月甘肃省肿瘤医院收治的KRAS阳性非小细胞肺癌患者95例,通过测序检测KRAS基因组序列,通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和免疫印迹检测PD-L1和PD-L2的表达。使用成簇的规则间隔的短回文重复基因编辑(CRISPR/CAS9)技术构建KRAS缺失型A549细胞,在敲除株中过表达KRAS野生型和突变型,检测其对PD-L1和PD-L2的表达影响。将KRAS野生型和突变型过表达的KRAS敲除人肺泡上皮细胞549(A549)细胞株与树突状细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK),通过流式细胞术检测群集行列式蛋白3阳性(CD3+)细胞的凋亡水平。使用t检验比较连续变量。使用Mann-Whitney检验分析KRAS突变型患者PD-L1和PD-L2。Chi-square检验分析非小细胞肺癌患者KRAS突变型和KRAS野生型的临床特征。结果纳入KRAS阳性非小细胞肺癌患者95例,KRAS野生型31例、KRAS突变型64例;其中KRAS第12位甘氨酸突变为天冬氨酸(G12D)13例、突变为缬氨酸(G12V)12例、突变为半胱氨酸(G12C)25例、突变为丙氨酸(G12A)14例。KRAS突变型患者PD-L1和PD-L2的mRNA表达水平(1.062比1.834,U=38;1.062比1.668,U=70;1.062比1.544,U=111;1.062比1.479,U=89,P<0.05;1.067比1.798,U=68;1.067比1.595,U=86;1.067比1.527,U=171;1.067比1.680,U=34,P<0.05)和蛋白表达水平均高于KRAS野生型患者,差异有统计学意义。在KRAS敲除A549细胞株中,相较于KRAS野生型,KRAS突变型更能够促进PD-1配体PD-L1和PD-L2的表达同时,将KRAS-G12D,KRAS-G12V,KRAS-G12C,KRAS-G12A质粒混合在一起作为RAS野生型(KRAS-MT)与KRAS突变型(KRAS-WT)分别转染KRAS敲除A549细胞株,KRAS-MT依旧可以促进PD-1配体PD-L1和PD-L2的表达。在KRAS敲除A549细胞株中过表达KRAS-MT与KRAS-WT后,KRAS突变亚型不能激活细胞外信号调节激酶(ERK)通路,但是可以激活丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)通路。AKT抑制剂处理后,KRAS-MT与KRAS-WT转染KRAS敲除A549细胞株的PD-L1和PD-L2的表达差异无统计学意义。将转染了KRAS-MT或KRAS-WT的KRAS KO A549细胞株与DC-CIK以1∶1的比例共培养,随后检测DC-CIK细胞的凋亡水平,发现KRAS-MT能够显著增加DC-CIK细胞中CD3+细胞亚群的凋亡(F=12.5,P<0.05),差异有统计学意义。结论KRAS突变亚型能够显著增强非小细胞肺癌细胞PD-1配体PD-L1和PD-L2的表达,并且能够促进免疫细胞DC-CIK细胞中CD3+细胞亚群的凋亡。
简介:摘要目的观察胶质瘤相关癌基因1特异性阻断剂(GANT-61)对结直肠癌肿瘤干细胞(CRC-CSCs)分化及对Hedgehog信号通路的调控作用的影响。方法磁珠分选法获得CD133+ CRC-CSCs,用含不同浓度(0、10、20、40 μmol/L)的GANT-61的干细胞培养液干预,设为对照组、低、中、高剂量组,测定干预不同时刻细胞活性、CRC-CSCs球形成率、CD133+占比、核转录因子1(Gli1)、Hh受体蛋白(Ptch1)、c-Myc、细胞角蛋白20(CK20) mRNA和蛋白表达。多样本计量资料比较采用单因素方差分析,两两样本比较采用SNK-q检验。结果与对照组比较,GANT-61各剂量组不同时刻CCK-8试验吸光度(A)值均降低(24 h:t=2.445、4.985、6.903;48 h:t=2.859、5.270、7.488;72 h:t=3.324、8.053、12.042,P<0.05),且随GANT-61干预剂量升高而降低(F=13.382、16.842、41.053,P<0.05),差异有统计学意义;对照组、低、中剂量组CCK-8试验A值随干预时间延长升高,且干预不同时刻CCK-8试验A值比较差异均有统计学意义(F=44.598、31.844,P<0.05),而高剂量组随干预时间延长无明显变化(F=1.585,P>0.05),差异无统计学意义。对照组、GANT-61低、中、高剂量组CRC-CSCs球形成率分别为(13.57±1.55)%、(11.22±1.01)%、(5.46±0.67)%、(1.60±0.30)%,CD133+占比分别为(96.20±3.07)%、(81.34±5.84)%、(62.01±5.03)%、(45.38±4.21)%;与对照组比较,GANT-61各剂量组CRC-CSCs球形成率及CD133+占比均降低(CRC-CSCs球形成率:t=2.840、10.739、16.954,P<0.05;CD133+占比:t=5.036、12.974、21.809,P<0.05),且随GANT-61干预剂量升高而降低,各剂量组组间比较差异均有统计学意义(CRC-CSCs球形成率:F=225.500,P<0.05;CD133+占比:F=62.988,P<0.05)。与对照组比较,GANT-61各剂量组Gli1、Ptch1、c-Myc、CK20 mRNA和蛋白相对表达量均降低(mRNA:低剂量组t=2.577、2.659、2.524、4.031;中剂量组t=5.271、5.587、6.163、6.500;高剂量组t=7.442、8.976、8.750、9.632,P<0.05;蛋白:低剂量组t=3.008、2.517、2.385、2.981;中剂量组t=5.664、8.923、9.500、11.180;高剂量组t=14.435、14.137、15.727、14.142,P<0.05),且随GANT-61干预剂量升高而降低(mRNA:F=14.825、21.057、22.389、27.160,P<0.05;蛋白:F=65.340、95.789、151.230、119.877,P<0.05),差异有统计学意义。结论GANT-61可能通过下调Hedgehog信号通路基因Gli1、Ptch1、靶基因c-Myc、分化基因CK20 mRNA和蛋白的表达,从而起到抑制CRC-CSCs细胞自我更新能力、促进细胞分化作用。