简介:以大连虾蛄为原料,从肌肉及消化腺中提取消化酶(蛋白酶和淀粉酶),研究其酶学特性。结果表明,大连虾蛄肌肉中蛋白酶最适温度为50℃,最适pH为8,反应激活剂为Mg2+、Ca2+和Mn2+,抑制剂为Pb2+、Cu2+、Zn2+、Fe2+;消化腺中蛋白酶最适温度为40℃,最适pH为6,EDTA对其有抑制作用,反应激活剂为Ca2+和Mn2+,抑制剂为Pb2+、Mg2+、Cu2+、Zn2+、Fe2+;大连虾蛄肌肉中淀粉酶最适温度为30℃,最适pH为7,反应激活剂为Mn2+,在浓度为20mmol/L时,激活作用最大,抑制剂为Pb2+、Mg2+、Ca2+、Cu2+、Zn2+和Fe2+;消化腺中淀粉酶最适温度为30℃,最适pH为7,EDTA对消化腺淀粉酶有抑制作用,反应激活剂为Mn2+和高浓度Ca2+,抑制剂为Pb2+、Mg2+、Cu2+、Zn2+、Fe2+。
简介:选择毕赤酵母GS115作为表达宿主,对抗菌肽Spinigerinα的突变体Spinigerinα′的基因进行胞外分泌表达,并选用致病性大肠杆菌、致病性的肠炎沙门氏菌、金黄色葡萄球菌作为敏感菌株,采用琼脂空穴扩散法对表达液进行抑菌效果的研究,并将其抑菌效果与突变前的抗菌肽Spinigerinα进行对比。结果表明,抗菌肽Spinigerinα′-1的抑菌活性降低,Spinigerinα′-2抑菌活性稍有增加,Spinigerinα′-3的抑菌活性最强,而Spinigerinα′-4和5酵母表达的蛋白无抑菌活性。为抗菌肽抑菌效果提高的研究奠定重要的基础。
简介:采用pGAPZαA为表达载体,SMD1168毕赤酵母为受体系统,构建分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌。按照毕赤酵母偏爱密码子设计Brazzein基因,共设计4对引物,采用SOE—PCR法合成Brazzein基因,构建克隆载体pUC57-Bra与酵母表达载体pGAPZαA—Bra。将重组质粒线性化,电转导人Pichia.pastorisSMD1168中,用高浓度的Zeocin筛选高拷贝转化子。将重组菌株接种于YPD培养基诱导表达,进行SDS—PAGE分析。成功构建了分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌,SDS—PAGE表明,目标蛋白的相对分子量与理论值一致,诱导72h后的目的蛋白表达量达0.12dE。
简介:以柚子皮为原料,采用超声辅助酶法提取柚子皮中水溶性膳食纤维,探讨料液比、加酶量、超声时间对提取率的影响。在单因素试验的基础上,通过正交试验优化工艺条件,并对其抗氧化活性进行研究。结果表明,超声辅助酶法提取柚子皮水溶性膳食纤维的最佳工艺条件为:加酶量400μL,料液比1∶16(g/mL),超声时间25min,在该工艺条件下的平均提取率为4.67%。浓度为2mg/mL的柚子皮水溶性膳食纤维对超氧阴离子自由基和羟自由基的清除率分别为(11.72±1.41)%和(40.79±4.06)%,对铁的还原能力为(0.1283±0.0047)mmol/g,表现出较好的抗氧化活性。
简介:建立了冰冻保存鱿鱼体内氧化三甲胺脱甲基酶(TMAOase)活性的测定方法,初步探索了鱿鱼体内甲醛的产生机理。根据TMAOase可在体外催化TMAO生成甲醛,后者可用乙酰丙酮法定量,并结合酶促反应动力学的原理,建立针对冰冻保存鱿鱼体内TMAOase活性的检测方法。建立的活性检测方法可用于检测冰冻保存的鱿鱼体内TMAOase的活性;冰冻鱿鱼体内TMAOase的活性随保存时间延长而增高。该方法简便易行,重复性较好,对深入研究TMAOase生物学特性具有一定的应用价值;在冰冻保存过程中,鱿鱼体内TMAOase活性是造成甲醛含量增高的重要原因。
简介:以"波兰2号"樱桃果实为试材,研究不同处理方式(裸果处理相对湿度70%-75%,挽口处理相对湿度90%-95%)和不同温度贮藏条件下(0、10、20、30℃)果实衰老和抗氧化酶活性的变化规律。结果表明,随着贮藏时间的延长,樱桃果实的失重率、腐烂率、乙醇和丙二醛(MDA)含量在两种处理中均呈逐渐上升的趋势,但挽口处理果实的上述指标明显低于相同温度条件下的裸果处理,与20℃和30℃高温贮藏相比,0℃和10℃低温贮藏明显降低了果实的失重率和腐烂率,抑制了乙醇和MDA含量的上升;樱桃果实的过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)及超氧化物歧化酶(SOD)活性均在贮藏期间先上升后下降,与裸果相比,挽口处理有效地延迟POD、SOD活性峰值的出现时间,无论裸果还是挽口,0℃和10℃低温在一定程度上均维持了较高的POD和SOD活性。与裸果处理相比,挽口处理樱桃果实保鲜效果相对较好,而且在0-30℃范围内,温度越低,保鲜效果越好。
简介:褐变一直困扰着马铃薯的加工开发利用,而多酚氧化酶是马铃薯酶促褐变的关键酶。为筛选安全无毒、处理简单的多酚氧化酶抑制剂,本研究以苦荞茎叶磷酸盐缓冲液提取物、乙醇提取物和水提取物为褐变抑制剂,研究其对红宝石马铃薯多酚氧化酶的抑制效果。结果显示,3种提取物对马铃薯多酚氧化酶均具有显著地抑制效果,使该酶活力下降50%所需的浓度(IC50)分别为0.21、0.28、0.41mg/mL。磷酸盐提取物的作用效果最强,乙醇提取物的作用效果次之,水提取物的作用效果最弱,3种苦荞茎叶提取物对酶的抑制作用均为非竞争性可逆抑制,其抑制常数(KI=KIS)分别为0.21、0.33、0.56mg/mL。对3种提取物中总黄酮、蛋白质含量进行定量测定,结果表明,磷酸盐提取物中不仅含有较高含量的黄酮类物质,同时蛋白质含量也较高,推测这可能是磷酸盐缓冲液提取物抑制效果最好的原因。研究结果可为探寻马铃薯多酚氧化酶新的天然抑制剂和马铃薯深加工过程中褐变的控制提供新的思路和参考依据。