简介：天府之国的成都,城市历史悠久,文化底蕴深厚。成都市第十三次党代会明确提出传承巴蜀文明发展天府文化,努力建设世界文化名城,让天府文化成为彰显成都魅力的一面旗帜。发展天府文化,就是要根植于天府、魂系于天府,充分展现成都元素和原创,形成与其他地域文化有鲜明识别度的文化个性——创新创造、优雅时尚、乐观包容、友善公益。要塑造'天府个性',建议做好两件事:一是实施成都天府记忆工程,二是打造成都故事展播品牌。

简介：摘要目的构建miR-7-1启动子核心序列的真核表达载体，并初步探讨其意义。方法根据5’端缺失实验原理，设计引物，PCR法分别扩增含不同长度启动子序列和相同miR-7-1成熟体序列的产物；纯化、经KPNI和XHOI双酶切后将它们分别亚克隆入pGL3.0-Basic真核表达载体，并进行酶切及测序鉴定；将三个构建成功的pGL3.0-miR-7载体（分别命名为p-1189-miR-7，p-1731-miR-7，p-2192-miR-7）体外瞬时转染小鼠乳腺癌4T1细胞；用Real-timePCR检测各组中miR-7成熟体的表达水平；CCK-8法检测细胞生长的变化；最后，利用TRANSFAC数据库预测结合miR-7-1启动子核心序列的潜在转录因子。结果酶切和测序验证成功构建了p-1189-miR-7、p-1731-miR-7、p-2192-miR-7三个miR-7-1启动子真核表达载体；与表达载体p-1189-miR-7、p-1731-miR-7转染组相比，表达载体p-2192-miR-7瞬时转染4T1细胞后可有效表达miR-7成熟体，并显著抑制4T1细胞的体外生长（p＜0.05），提示miR-7启动子序列-1593位点到-2024位点为核心序列；最后，预测结果显示NK2-同源盒-5（NK2-Homebox-5，NKX2-5）和肝细胞核因子4（hepatocytenuclearfactor4homeobox，HNF-4）可能是结合该核心序列的转录因子。结论成功构建了p-1189-miR-7，p-1731-miR-7，p-2192-miR-7三个miR-7-1启动子真核表达载体，并筛选到miR-7-1启动子的核心序列（-1593位点到-2024位点），为后续深入研究miR-7-1在乳腺癌发生中的作用及机制提供了前期实验基础。

简介：目的本研究构建含绿色荧光蛋白基因的重组慢病毒，并观察其在人椎间盘髓核细胞中的表达情况。方法应用分子克隆技术将绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein，GFP）基因导人慢病毒载体质粒pLenti6／V5TOPO，应用磷酸钙沉淀法将慢病毒载体三质粒系统（包括包装质粒、包膜蛋白质粒等）共转染入293细胞进行包装，48h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况，72h收集病毒上清并感染髓核细胞，在荧光显微镜下感染情况。结果重组慢病毒滴度测定约为10^7U／mL。感染人椎间盘髓核细胞后，荧光显微镜下观察到GFP的表达。结论成功构建了含GFP的慢病毒载体，且能成功将目的基因转入椎间盘髓核细胞并表达。

简介：摘要：在幼儿教学中传统的教学方式不能让儿童进入学习的氛围，但语言表达与游戏活动结合后，这种游戏活动教学方法不仅能提升幼儿的学习积极性，同时能让幼儿在学习过程中感受到游戏的乐趣。基于幼儿的语言能力现状与游戏产生的积极作用，本文主要是从创设轻松的游戏活动氛围、深入游戏内容、创设情境、自制游戏活动等方面进行对中班幼儿语言表达能力的实践研究。

简介：摘要：在幼儿教学中为他们创造良好的语言环境，不断地激发幼儿对学习的积极性，在直接感受中去丰富知识和发展语言，为幼儿创设多看、多听、多说以及多练的语言环境，在潜移默化中帮助幼儿成长，获得丰富的语言词汇和练习的机会，不断地发展幼儿的语言表达能力。

简介：摘要目的探讨N-Myc下游调节基因2(NDRG2)在膀胱癌(BCa)细胞中放射抗性中的表达情况及作用。方法体外培养T24细胞，采用不同剂量的X射线(0、2、4、8、10和20 Gy)照射T24细胞，筛选最佳的X射线剂量作后续处理，建立放射抗性BCa细胞系T24/R，使用CCK-8法检测细胞毒性，分别采用流式细胞仪、transwell测定T24/R细胞和T24细胞增殖、侵袭能力的差异。Western blot检测细胞中上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达。在T24/R细胞中过表达NDRG2，X射线放射剂量逐渐递增的情况下处理两组细胞，检测T24/R组(control组)和T24/R-NDRG2组中细胞生存比例，2 Gy剂量处理后检测细胞迁移能力的变化。结果X射线剂量≥2 Gy时可显著抑制细胞活力，因此选择2 Gy X射线照射作为BCa细胞毒性的最佳条件并成功建立T24/R放射抗性细胞系；凋亡检测发现在T24/R组中S期细胞数量较T24组增加[(26.49±4.5)% vs (14±2.6)%，P<0.05]；transwell检测发现，T24/R较对照组T24细胞显示出更强的迁移能力(P<0.05)，但两组细胞EMT相关蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05)。在放射剂量逐渐递增的情况下处理两组细胞，发现NDRG2的过表达降低了T24/R细胞放射抗性的存活率(P<0.05)和迁移能力(P<0.05)。结论BCa细胞的放射抗性是肿瘤局部复发的原因之一，上调NDRG2的表达可抑制T24细胞的放射抗性，因此可作为放射抗性BCa患者的治疗候选方案。

简介：摘要目的探讨N-Myc下游调节基因2(NDRG2)在膀胱癌(BCa)细胞中放射抗性中的表达情况及作用。方法体外培养T24细胞，采用不同剂量的X射线(0、2、4、8、10和20 Gy)照射T24细胞，筛选最佳的X射线剂量作后续处理，建立放射抗性BCa细胞系T24/R，使用CCK-8法检测细胞毒性，分别采用流式细胞仪、transwell测定T24/R细胞和T24细胞增殖、侵袭能力的差异。Western blot检测细胞中上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达。在T24/R细胞中过表达NDRG2，X射线放射剂量逐渐递增的情况下处理两组细胞，检测T24/R组(control组)和T24/R-NDRG2组中细胞生存比例，2 Gy剂量处理后检测细胞迁移能力的变化。结果X射线剂量≥2 Gy时可显著抑制细胞活力，因此选择2 Gy X射线照射作为BCa细胞毒性的最佳条件并成功建立T24/R放射抗性细胞系；凋亡检测发现在T24/R组中S期细胞数量较T24组增加[(26.49±4.5)% vs (14±2.6)%，P<0.05]；transwell检测发现，T24/R较对照组T24细胞显示出更强的迁移能力(P<0.05)，但两组细胞EMT相关蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05)。在放射剂量逐渐递增的情况下处理两组细胞，发现NDRG2的过表达降低了T24/R细胞放射抗性的存活率(P<0.05)和迁移能力(P<0.05)。结论BCa细胞的放射抗性是肿瘤局部复发的原因之一，上调NDRG2的表达可抑制T24细胞的放射抗性，因此可作为放射抗性BCa患者的治疗候选方案。

简介：摘要目的构建DNAJA1(DnaJheatshockproteinfamily(Hsp40)memberA1)基因过表达质粒，转染结肠癌细胞株，并对其是否转染成功进行鉴定。方法Real-time聚合酶链反应(PCR)及Westernblot检测6株结肠癌细胞及瞬时转染DNAJA1质粒的细胞中DNAJA1mRNA水平。采用全基因合成法合成DNAJA1编码区序列并克隆入pEGFP-C1载体末端，构建重组质粒pEGFP-C-DNAJA1并进行测序及凝胶电泳鉴定。结果6株结直肠癌细胞中，DNAJA1在HT29和HCT116中的mRNA和蛋白水平最较低，在LOVO和SW620细胞中较高。测序及凝胶电泳结果表明DNAJA1重组质粒构建成功。瞬时转染HT29和HCT116细胞后，与对照组相比，DNAJA1mRNA分别升高约50倍，蛋白表达也明显升高。结论成功构建DNAJA1基因过表达重组质粒，并有较高的转染水平，为进一步的研究提供了条件。

简介：【目的】内皮祖细胞（endothelialprogenitorcells,EPCs）参与血管内皮修复及血管新生,EPCs分化受多种转录因子调控网络的影响,本实验旨在研究新型C2H2锌指蛋白基因ZFP580对EPCs分化作用的影响。【方法】密度梯度离心法,分离培养大鼠骨髓源性EPCs,免疫荧光染色鉴定EPCs;腺病毒转染过表达ZFP580的EPCs,QPCR及Westernblotting检测ZFP580对EPCs分化的影响。【结果】细胞培养至7d时,Dil-acLDL/FITC-UEA-I双阳性细胞约占87.39%±2.98%。证实所培养细胞为EPCs。腺病毒转染技术获得过表达ZFP580的EPCs,ZFP580基因过表达促进成熟内皮表型CD31和vWF的表达。【结论】ZFP580基因过表达促进EPCs向成熟血管内皮细胞分化,提示ZFP580基因在EPCs分化过程中起重要的调控作用。

简介：【目的】神经干细胞（neuralstemcells,NSCs）是一群能自我更新并具有多种分化潜能的细胞,可分化成神经元、少突胶质细胞和星形细胞。NSCs分化受多种转录因子调控网络的影响,本实验旨在研究神经分化因子1（neuronaldifferentiation1,NeuroD1）过表达对NSCs增殖和分化的影响。【方法】分离培养原代大鼠NSCs,免疫荧光染色鉴定NSCs。将携带NeuroD1基因的逆转录病毒转染NSCs,QPCR检测NeuroD1过表达神经干细胞系的构建。QPCR和MTT检测过表达NeuroD1对NSCs增殖和分化的影响;光镜下观察分化细胞形态变化。【结果】第3代NSCs经免疫荧光染色证实所培养细胞为NSCs,可分化为神经元和星形胶质细胞。QPCR结果显示NeuroD1mRNA在NSCs-NeuroD1组表达最高,与其他两组有统计学差异（P〈0.05）。QPCR结果显示MAP2在NSCs-NeuroD1组表达最高,与其他两组有统计学差异（P〈0.05）。MTT结果显示NSCs-NeuroD1组细胞增殖水平最高,与其他两组有统计学差异（P〈0.05）。光镜下可见NSCs-NeuroD1组细胞多分化为神经元细胞。【结论】成功构建NeuroD1过表达神经干细胞系。NeuroD1可促进NSCs增殖和向神经元方向分化。

简介：为了阐明提高谷氨酰胺合成酶（GS）活性是否可以提高烟草的耐盐能力,本试验以烟草栽培品种K326为对照,研究TaGS1/TaGS2转基因烟草抗盐能力及其机制。结果表明,盐胁迫条件下,过表达TaGS1/TaGS2烟草与对照相比,根系较发达,烟株生物量较高,TaGS2转基因烟草尤为显著;转基因烟草的叶绿素含量、气孔导度、净光合速率、GS活性、可溶蛋白含量等碳氮代谢功能均显著优于野生型K326;且转基因株系脯氨酸含量及含水量较高,MDA含量较低,叶片渗透调节能力和质膜保护能力比K326强。研究表明TaGS1/TaGS2的过表达提高了烟草的耐盐能力,其高GS活性是维持碳氮代谢抵抗盐胁迫的生理基础。

简介：目的为从整体动物水平研究碱性调宁蛋白（h1-calponin）在骨形成过程中的直接作用，我们构建了成骨细胞中特异性过表达h1—calponin的转基因小鼠模型，并对其表型进行了初步分析。方法构建在成骨细胞特异性启动子（collagenIpromoter）驱动下表达h1—calponin的载体（pColl-calponin），纯化DNA片段，再以显微注射的方法将转基因片段导人小鼠受精卵，经移植后得到小鼠。PCR法检测整合到小鼠基因组中的外源基因，提取F1代阳性小鼠原代成骨细胞RNA，RT-PCR检测h1-calponin在小鼠成骨细胞中的表达情况，并观察转基因小鼠表型及体重变化情况。结果PCR检测结果显示1只Go代转基因鼠中检测到阳性信号，RT-PCR显示F1代转基因小鼠成骨细胞中表达h1—calponin较野生对照小鼠明显增加，且转基因小鼠体重与野生小鼠相比有明显降低。结论成功构建了在成骨细胞特异性过表达h1—calponin的转基因小鼠，为深入研究h1—calponin在骨骼发育中的作用提供了良好的动物模型。

简介：目的：通过构建SARI慢病毒表达载体,探讨SARI基因过表达对K562细胞生物学功能的影响。方法：采用RT-PCR方法获得目的基因并重组pLOV.CMV.GFP质粒,构建pLOV.CMV.GFP-SARI表达载体。通过测序鉴定、病毒包装和滴度测定后,获得阳性病毒颗粒,并以病毒颗粒感染K562细胞系。采用Q-PCR及Westernblot方法验证感染后K562细胞SARI基因转录和蛋白水平的表达情况,同时采用CCK-8法检测K562细胞的增殖情况,以流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期变化。结果：利用RT-PCR方法获得SARI基因并成功构建了含SARI基因的慢病毒表达载体,从分子及蛋白水平验证了其在感染后K562细胞中的高表达;与空白组和感染空载体的Mock组相比,过表达SARI载体组的细胞增殖显著受抑、细胞凋亡率增加,而细胞周期无显著变化。结论：SARI基因过表达可抑制K562细胞的增殖并促进其凋亡,提示诱导SARI基因过表达可能对于抑制CML发生发展具有重要的作用。

简介：摘要目的探讨颈7神经切断后发生的脊髓中枢神经元逆行性退变中过磷酸化Tau蛋白的表达情况，为外周神经损伤后中枢神经元逆行性退变保护提供新思路。方法将成年雌性SD大鼠36只随机分为3组（假手术组、切断组、切断+药物干预组），其中切断组和干预组的动物施行双侧颈7神经切断造模，干预组予每天腹腔注射1 mmol/kg氯化锂。2周、4周后取大鼠颈7节段脊髓，通过HE染色、流式细胞技术来分析神经细胞的凋亡情况，Western Blot分析Tau蛋白及相关蛋白表达水平。结果HE染色及流式细胞学检测显示2周时切断组的细胞凋亡程度小于4周时的凋亡程度；Western Blot结果提示随着周数的增加，总Tau蛋白的量因颈7神经的切断而下降，磷酸化的Tau蛋白的量的比例上升，差异具有统计学意义。予氯化锂后，凋亡的程度及磷酸化的Tau蛋白的比例均发生下降，差异具有统计学意义。结论Tau蛋白的过磷酸化机制存在于颈7神经切断术后发生的脊髓中枢神经元逆行性退变的过程中；氯化锂能减轻逆行性退变的程度。

简介：目的:研究BCL6共抑制因子(BCOR)异构体(BCOR-short)对根尖牙乳头干细胞(SCAPs)成骨分化能力的影响。方法:利用HA-BCOR-short逆转录病毒载体在SCAPs中过表达BCOR-short,WesternBlot检测过表达效果;通过碱性磷酸酶(ALP)活性、茜素红染色及钙离子定量分析研究SCAPs体外成骨分化能力;实时定量RT-PCR检测SCAPs中骨涎蛋白(BSP)、骨钙素(OCN)和转录因子AP2A的表达。结果:WesternBlot结果显示HA-BCOR-short可以在SCAPs有效的过表达;ALP活性结果显示过表达HA-BCOR-short抑制SCAPs的ALP活性;茜素红染色及钙离子定量分析结果显示HA-BCOR-short明显抑制SCAPs体外矿化能力;实时定量RT-PCR结果显示过表达HA-BCOR-short明显抑制SCAPs中BSP、OCN和AP2A的表达。结论:过表达BCOR异构体BCOR-short可以抑制转录因子AP2A的表达,并且抑制SCAPs体外成骨分化功能。

简介：本研究旨在构建多发性骨髓瘤黏蛋白1（两串联）基因（rnuc1-2vntr）的真核表达载体及该重组体在COS-7细胞中的表达，为研制多发性骨髓瘤基因疫苗奠定基础。以MUC1—2VNTR蛋白的编码基因作为目的基因，在其前端加上KOZAK序列后，两端分别加上HindⅢ和XbaⅠ酶的酶切位点，将人工合成的全基因定向插入pcDNA3．1／myc—hisB载体中，转化E-coli感受态细胞获得重组菌株，经酶切及测序鉴定为pcDNA3．1-2vntr／myc—hisB重组质粒后，采用Lipofectimine脂质体介导法转染COS-7细胞，用荧光显微镜对荧光表达进行观察，然后用Westernblot检测重纽体在细胞内外的表达。结果表明：合成的MUC1-2VNTR基因全长约140bp，所构建的pcDNA3．1-2vntr／myc—hisB重组质粒经双酶切及测序鉴定后，与预期片段大小相符，并含有完整的阅读框架和目的基因。将其转入COS-7细胞后48小时，荧光显微镜和Westernblot检测均可证实黏蛋白1表达。结论：成功的构建了多发性骨髓瘤真核表达载体pcDNA3．1—2vntr／myc—hisB，并在COS-7细胞中成功地表达黏蛋白1，这为黏蛋白1的功能研究和多发性骨髓瘤基因疫苗的研制提供了实验基础。

简介：目的：建立基于Tet-on系统的可调控真核细胞表达小鼠尿激酶原激活剂（uPA）的诱导表达系统。方法：提取C57小鼠肾组织总RNA,RT-PCR扩增uPAcDNA序列;提取基因组DNA,扩增uPA编码区后最后一个外显子序列,构建pTRE2-uPAcDNA-700载体,将其与pTet-on瞬时共转染Huh7细胞系,24h后用强力霉素诱导表达,诱导后36h分别收集细胞和培养上清（诱导组）,提取细胞总RNA并进行细胞uPA转录水平的检测;采用溶圈法对细胞分泌至培养上清中uPA的生物活性进行检测,同时以转染但未诱导Hun7（未诱导组）和正常培养Huh7（正常对照组）细胞及培养上清作为对照。结果：与未诱导组和正常对照组相比较,仅诱导组在转录水平上扩增出目的条带;溶圈法证实转染的细胞不仅表达uPA,而且表达的蛋白具有一定的生物活性。结论：构建了可调控的uPA真核诱导表达系统,为进一步制备可调控肝细胞表达uPA转基因小鼠及进一步揭示uPA肝损伤机理奠定了基础。

简介：人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)是一种用于治疗血栓性心血管疾病的特效药物,它能激活血纤维蛋白酶原,后者使血块溶解,所以这种药物的开发为社会普遍重视。t-PA在人体血液中的含量极低,很难从天然材料中提取。如果应用转基因技术,将人t-PA基因转入动物体内,使其在乳腺中高效表达,从乳汁中提取大量的t-PA,将具有可观的经济效益和社会效益。转基因动物建立的前提条件是构建乳腺定位高效表达载体。为此,我们先将本所保存的t-

简介：目的：构建双特异性细胞因子融合基因表达载体及在肝细胞癌细胞中瞬时表达。方法：应用PCR方法对各目的基因进行扩增并经测序载体pGEM-T-Easy测序后，以逆转录病毒载体pLXSN中的多克隆位点将二者融合为融合基因TK-TNF-α，并将其亚克隆至pEGFP-N3的EcoRl和BamHl位点间，成功地构建表达载体pEGFP-TK-TNF-α仅，并在该载体转染人肝细胞癌细胞HCC9204后观察融合蛋白表达情况。结果：酶切鉴定证实TK-TNF-α融合基因片段已克隆到pEGFP-N3的EcoRl和BamHl位点问，并在转染人肝细胞癌细胞7901中观察到TK-TNF-α融合基因绿色荧光蛋白的表达。结论：pEGFP-TK-TNF-α表达载体便于观察转染细胞中融合蛋白的表达情况及蛋白定位，为双特异细胞因子基因疗法提供有利条件。

简介：长期以来．市场上的所谓“蓝底过背”泛滥．而其中能真正称得上的“蓝底”或“过背”的只是很小一部分．能二者兼具的则更是凤毛麟角。有人认为过背金相较于红龙辨认的难度较低，事实上挑准一只优质的蓝底过背是一件非常见功力和需要勇气与运气的事情。