制药设备清洁残留物的分析方法验证

制药设备清洁残留物的分析方法验证

张宏伟

天津市300450

摘要：制药设备在生产结束后，需按照规定的清洁程序进行清洁。设备表面的痕量残留物是清洁验证的目标分析物，清洁后设备上的残留物必须达到规定的清洁限度要求，才不会对将生产的产品造成交叉污染，因此必须对设备表面清洁后的残留物进行检验。残留物的检验方法应该在清洁验证开始之前，就完成其自身的分析方法验证，才能给设备清洁验证过程残留物的检验和结果的准确判定提供依据。

关键词：设备清洁残留物；残留物的分析方法；方法验证

1、验证方案起草前的准备阶段

1.1确定设备清洁后的目标残留物

应根据生产设备所生产的产品性质选定目标残留物。残留物的选定依据应是最难清洁的物质或活性最强的物质。

1.2确定残留物的取样方法

应根据清洁验证中规定的经过验证的取样方法确定样品的取样方式。通常取样方法有两种，一种是最终淋洗水取样，另一种是擦拭取样。

1.3确定残留物限度

根据生产设备和产品的实际情况，确定适当的方法检验的限度标准，如浓度限度10×10-6、正常治疗量的1/1000等。

1.4确定验证项目名称，申请验证项目编码，并成立验证小组。

2、验证方案的起草

验证方案由验证小组专业人员草拟，一般来说，设备清洁残留物的分析方法验证方案应当包括以下的内容：

2.1验证的目的

进行该残留物的分析方法验证，证明采用的分析方法科学、合理，符合检验要求，并为清洁验证中残留物的检验方法提供依据。

2.2验证的适用范围

应明确该残留物的分析方法适用于某一产品生产涉及的设备清洁验证残留物的检验。

2.3验证小组成员

列出参加验证人员的名单，说明参加者所属的部门及各自的职责，以及对相关人员的培训要求。

2.4仪器

应列出验证过程中使用的仪器，包括仪器的名称、型号、设备编码等。

2.5试剂与试液、对照品、样品

应列出验证过程中使用的试剂、试液、对照品的等级，来源，有效期、样品的信息等。

2.6验证实施条件确认

检查该验证涉及到的仪器、物料、试验环境是否符合该分析方法的要求。

2.7分析方法及验证项目

用于清洁验证的残留物的分析方法一般与杂质的实验相仿，其验证原理与一般的方法验证相同。但需根据残留物的分析方法和检验仪器的具体情况、取样方式等确定具体的验证项目。

2.8验证项目的可接受标准

按照验证项目及残留物的具体情况制定对应的可接受标准，如进样次数、RSD%的要求等。

3、取样方法验证包括

3.1棉签取样方法验证

取样过程需要验证，通过回收率实验验证取样过程的回收率和重现性，通常取样回收率和检验方法回收率结合进行，总回收率一般不低于70%，RSD不大于20%。

验证方法如下：

3.1.1准备一块与设备表面相同的材质。

3.1.2在钢板上划出10*10CM的区域。

3.1.3将20倍限度量的待检测物溶液，定量装入经校验注射器。

3.1.4其溶液均匀涂抹在10*10CM的区域内。

3.1.5自然干燥或电吹风温和干燥。

3.1.6用选定的擦拭溶剂润湿棉签左右或上下前进式进行擦拭。

3.1.7将擦拭棉签放入棉签管中，加入预定溶剂5ml，超声萃取。

3.1.8用经验证的检验方法，计算回收率和回收率的RSD。

3.2淋洗的取样方法根据管路设计，选择淋洗线路下游或最低点的几个取样口，分别按照微生物取样和化学取样规程在最后一步淋洗近结束时取样。淋洗法样品可对冲洗液直接检测也可以对冲洗液稀释后检测，无论是直接检测还是稀释后检测都应在接到样品后先将样品同空白溶剂做视觉检查，确定是否有颜色差异和异物存在。如果有上述现象发生，直接判为不合格。

通常淋洗液方法不做回收率验证，定量检查做回收率验证，可以用淋洗溶剂冲洗已知量的分析物回收率，回收率通常不低于95%。

4、清洁检验分析方法验证

用于清洁验证的分析方法，其验证的原理和一般的方法验证相同。清洁验证中的分析对象是残留物，验证中所用的分析方法一般与杂质的定量实验相仿，要求就专属性、检测限、定量限、线性和范围、精密度、准确度进行验证。

4.1专属性

专属性要求同条件下用空白溶剂、空白棉签溶液、空白棉签加待分析残留物样品溶液，待分析残留物样品溶液各进样证明本方法不存在干扰，或者干扰可用适当的方法消除掉。

4.2检测限（LOD）和定量限（LOQ）

在常规的原料药分析中，LOD值和LOQ值一般并不重要，因为被测物的量一般要远远大于LOQ。但在清洁验证中就不同了，因为其分析的目的就是要确定痕量的残留物，所以这两个值是清洁验证中非常关心的。

4.2.1检测限（LOD）

传统的方法是信噪比法，通常LOD是指信噪比为3：1时的被分析物浓度。其验证方法如下：

4.2.1.1仪器分析中的方法：

方法一：把已知低浓度供试品溶液和空白溶液分别重复测定六次，计算测得信号的平均值与信噪比，以信噪比为3：1时的相应浓度或注入仪器的量定为检出限。

方法二：平行测量空白六次，计算背景响应值的标准偏差，其3倍值在工作曲线上对应的待测物浓度即为估算的检出限。

4.2.1.2非仪器分析中的方法：

用已知浓度的被测物，试验出其能被可靠地检测出的最低浓度或量。

4.2.2定量限（LOQ）

LOQ是指信噪比为10：1时的被分析物浓度.LOQ是符合一定的精密度和线性要求的最低浓度。其验证方法如下：

4.2.2.1仪器分析中的方法：

方法一：把已知低浓度供试品溶液分别重复测定六次，计算测得信号的平均值与信噪比，以信噪比为10：1时的相应浓度或注入仪器的量定为检出限。

方法二：平行测量空白六次，计算背景响应值得标准偏差，其10倍值在工作曲线上对应的待测物浓度即为估算的定量限。

4.2.2.2非仪器分析中的方法：

用已知浓度的被测物，试验出其能以较好的准确度和精密度检测出的最低浓度或量。

4.3线性/范围

4.3.1线性

线性系指在设计范围内，测定结果与试样中被测物浓度呈正比关系的程度。测量方法简述：在规定的范围内，以系列样品测得的结果和被测物浓度进行函数作图，再用最小二乘法进行线性回归。必要时，测试结果可经数学转换，再进行线性回归计算，应列出回归方程、线性相关系数。线性的相关系数应不低于0.99，浓度范围应达到残留物限度的50%~150%。

4.3.2范围

范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。测量方法简述：通过实验验证来证明不论被测物浓度是在接近检测范围边缘还是在检测范围内，都能被准确、精密和线性良好地检测的浓度范围。定量检查应至少测试5个浓度的范围并且包含清洁的最低限和最高限度。

4.4精密度

精密度系指在规定的条件下，从同一个均匀样品中，经过多次取样测定所得结果之间的接近程度。通常用相对标准偏差（RSD）来表示。定量检查的RSD应不得大于10%。

淋洗法和棉签法用于限度检查通常不需要做精密度实验。

4.5准确度

准确度系指用该方法所获得的检验结果与真实值之间的接近程度，表征了每种分析方法的正确性，一般以回收率（％）表示。对于设备清洁分析方法验证，取清洁验证方案中确定的棉签法限度标准中的最低限度值（L值）为依据，以20倍的L值作为100%浓度标准点，分别配制120%，2.5%浓度溶液，平行制备及测定这三种溶液六次，计算回收率及相对标准偏差，即得。

5、结语

取样方法的验证，实际是对取样人员的操作方法及清洗干净设备残留物转移和溶出过程的全面考察。清洁分析方法验证是证明采用的方法适合于相应的检测要求，是保证分析结果真实可靠的前提条件。从而遵循GMP要求，有效的防止了交差污染。

参考文献：

[1]陈雯秋.清洁验证合格标准的制定[J].医药导报，2005，24（5）：452-453.

[2]国家食品药品监督管理局药品安全监管司药品认证管理中心.清洁方法的优化.药品生产验证指南[Z].北京：化学工业出版社，2003：205.

[3]陈雯秋.清洁验证中的分析方法验证[J].中国药业杂志，2005，14（4）：17-19.

作者简介：张宏伟（1985—），女，汉族，天津塘沽人，身份证号码12010719850710XXXX，XXXX称初级，本科专业应用化学