新冠肺炎核酸咽拭子采样的影响因素

新冠肺炎核酸咽拭子采样的影响因素

董红歌，,通讯作者：朱涛,上海

上海市真新社区卫生服务中心 市普陀区中心医院

【摘要】新冠肺炎核酸检测即通过检测取样的呼吸道分泌物并结合胸部CT、被检测者存在的乏力、发热、干咳等临床症状判定被检测者是否感染新冠病毒。新冠肺炎疫情爆发初期，采取高通量测序技术确定病原体。由于人体上呼吸道系统是新冠病毒主要感染部位，下呼吸道检测需采集患者深部分泌物，操作难度相对较大且患者接受程度偏低。咽拭子检测操作简单，高效，准确率和漏诊率低，所以广泛应用于新冠肺炎核酸检测。虽然该方式灵敏度高且快速，然而在临床检测中部分因素依旧影响检测结果，对此，本文则归纳阐述影响新冠肺炎核酸咽拭子采样因素，望给予相关研究人员提供参考。

【关键词】新冠肺炎；核酸检测；咽拭子采样；影响因素

新型冠状病毒肺炎（COVID-19）由新型冠状病毒引起，感染者普遍存在乏力、干咳、发热等临床症状。国家疾病预控中心宣布将新冠肺炎纳入国家乙类传染病并采取甲类传染病预防控制措施。相关研究指出，新冠肺炎流行期存在诸多问题，其中发病确诊难问题受到广泛关注。咽拭子采样是检测新冠病毒重要方式，在具体操作中，该检测方式阳性率偏低成为确诊难关键问题。通过关系新冠肺炎核酸咽拭子采样影响因素并提出相关改进建议，进一步提升核酸采样质量。

1 核酸检测咽拭子概述

咽拭子采样分为鼻咽拭子与口咽拭子两种，其中口咽拭子即采样人员运用棉签在被检测者咽喉部位擦拭数秒钟，提取咽喉部位上皮细胞标本。被检测者在检测过程中会可能会产生恶心且伴随呕吐不适感，片刻后即可缓解。鼻咽拭子采样即将一根细棉签深入被检测者鼻孔，沿下鼻道深入直至鼻咽后壁，再捻转棉签取样，棉签进入鼻腔深度约为鼻尖至耳垂距离。随后判断分析拭子细胞是否含有新冠病毒成分，便于早期发现感染者或在感染者出现症状前获取阳性结果。感染者经隔离治理治疗后，再经咽拭子检测结果呈阴性则说明清除体内新冠病毒，不具备传染性。目前新冠肺炎确诊病例与无症状感染者解除隔离的标准之一即两次咽拭子核酸检测阴性。

2新冠肺炎核酸咽拭子采样的影响因素

2 新冠肺炎核酸咽拭子采样的影响因素

2.1 标本质量

标本质量因素共涉及以下方面：①病毒载量；新冠肺炎患者在病毒感染中，其体内病毒载量会随病程变化而变化。例如甲型流感病毒患者在发病后24-72h，其鼻咽部病毒浓度会在达到高峰，再迅速降低。由于目前尚未明确新冠肺炎病程转归，所以无法确定患者排毒时期。特别在疾病晚期，若标本病毒载量浓度低于检测限则会出现假阴性检测结果。对此，需要医务人员对患者流行病学史进行详细调查并在病程不同阶段采集标本，必要时可重新检测，尽可能减少标本非合格现象。②标本类型；一般核酸检测使用涵盖咽拭子与鼻咽拭子在内的上呼吸道标本和肺泡灌洗液与深咳痰液在内的下呼吸道标本、血样标本、肛拭子标本等。不同标本类型有着不同病毒载量，由于感染可能会涉及全身，然而下呼吸道标本阳性率则高于其他方式。相关研究者认为，咽拭子核酸检测结果低于痰标本检测结果，说明不同类型标本会影响检测结果。每个病例可采集咽拭子、鼻咽拭子等多种类型标本，若患者病情严重则以下呼吸道标本采集为主，疑似病例可将采集的咽拭子与鼻拭子放置于同一病毒采样试剂盒中。③标本采集质量；1)采集部位：采样人员在采集咽拭子时，被检测者因受拭子刺激出现咳嗽等反应，咳出的飞沫会喷到采样人员面部，由于采样人员担心感染造成在采集中未能真正采集到核酸检测所需的咽上皮细胞。2）采集手势：取出无菌拭子，注意不要触碰污染拭子头部；采样人员标准采样后，快速将咽拭子插入测试管中折断的过程中，采样人员应避免所戴手套碰触拭子头部影像检测结果。从采样管开盖，收集咽拭子，到此管采样结束旋紧管盖过程中，避免手消毒液及消毒喷雾喷洒入采样管中，导致假阴性结果。3）采集管的选择：一次性病毒采样管中保存液分为3毫升、5毫升、10毫升等，针对单采、混采等不同采集要求，选择不同容量保存液的采样管。比如单采时使用10毫升保存液的采样管，如果采集的病毒载量浓度低，会出现假阴性检测结果；如1:10混采时使用3毫升保存液的采样管，保存液无法浸润所有拭子，也会影像病毒的检出。4）样本保存：采样后标本要低温保存，4小时内完成送检，避免日下暴晒，样本保存不当会导致假阴性结果产生。综上，核酸采样人员需接受专业培训，不断提升检测技能，从而准确采集不同类型标本，提升标本采集质量。标本转运及送检人员需严格按照规定时间，规范操作。

2.2病毒采样试剂盒

不同类型、批次、品牌、形式病毒采样试剂盒均会影响后续检测结果，所以，在核酸检测中应尽可能选取相同品牌且具有医疗器械注册证的病毒采样试剂盒，保证核酸咽拭子采样结果稳定与准确。与此同时，采集咽拭子时需运用植绒化纤拭子。棉拭子不易洗脱刮拭细胞，导致标本浓度低。拭子棉丝混入标本中会对扩增反应形成抑制，导致出现假阴性结果与难以判断结果。植绒化纤拭子与棉拭子相比，其表面积更大且需要刮取更多的咽部细胞，较易将采集咽拭子细胞悬浮于病毒保存液当中。此外，病毒保存液也会影响咽拭子采样；病毒采样试剂盒中病毒保存液核酸抑制酶成分有效避免采集标本中的RNA降解。如果病毒保存液颜色接近于仪器配套加样板颜色则有可能出现加样错误。所以，购买病毒采样试剂盒应具有医疗器械注册证编号和生产许可证编号以及成分明确。

2.2 检测环境

干净实验室环境是保证检测结果准确性关键所在，若大量RNA酶存在于核酸提取环境中，那么病毒核酸会因失去细胞保护被降解，造成假阴性结果，所以，需按照新冠肺炎防控方案与生物安全对实验室消毒，做完一次实验运用消毒剂擦拭或浸泡生物转运箱、生物安全柜以及试管架。

2.3 其他影响因素

①采样者及被检测者心理因素因；新冠肺炎疫情爆发，医学工作者面临较大感染风险和工作压力，导致负责采样医护人员与标本采样人员即使遵循相关标准实施个人防护，也会出现焦虑、紧张等不良心理情绪，对标本采集与检测产生影响。所以，需合理安排医护人员并采取轮休制度，及时做好心理辅导及干预。②被检测者在检测前因进食、注射新冠病毒疫苗或其他因素造成检测标本假性结果，需做好民众核酸检测知识科普，提升检测结果准确性。

3结语

总之，核酸检测阳性结果为诊断新冠肺炎感染金标准，但受多因素影响会出现假阴性结果，影响新冠肺炎诊治。目前临床多采取口咽拭子采样，多和该采样操作方式便利简单有关。需要操作者在采样中规范操作，提升核酸采样准确率。

参考文献：

[1]薛智丰,王超,董阳超,段甜,袁若栋,雷迎峰,岳昌武.纳米孔测序技术检测正常人群咽拭子微生物本底的初步分析[J/OL].微生物学免疫学进展,2022(03):1-7[2022-05-26].l

[2]李波,张浩,李伯安,陈竹.新型冠状病毒肺炎病例粪便及咽拭子核酸平行检测结果比对分析[J].中华实验和临床病毒学杂志,2022,36(02):236-238.

[3]颜微微,夏俊,邓可斌,李辉,雷西熙,姜锐.新冠肺炎核酸咽拭子采样影响因素分析[J].中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志,2021,29(06):401-403.

[4]蒋立立,潘献民,刘颖,龙虎,王宁,李立巍,刘志冰,黄杨,郭昕,王彦文,李剑军.新型冠状病毒肺炎病例不同标本核酸检测结果分析[J].中国热带医学,2020,20(12):1193-1196.