中药材淫羊藿的DNA分子鉴定研究

中药材淫羊藿的DNA分子鉴定研究

胡娅婷，谢金凤，胡娅婷

湖北恩施学院医学部，湖北 恩施 445000

【摘要】淫羊藿是重要的中药材之一，自古以来在我国众多中药典籍中都有所记载。然而淫羊藿种类较多，在全国范围内的分布较为广阔，中国黔东南、中部、西北、东北以及安徽浙江等地都有着广泛的分布。而分布在不同地区、在不同地域环境下生长的淫羊藿在性状、理化性质等多方面有所差异。而为了有效针对中药材淫羊藿进行鉴定，采用DNA分子鉴定技术能够有效规避淫羊藿在鉴定过程中受自然环境和生物体生长所产生的不确定性而带来的影响，本研究将结合中药材淫羊藿的DNA分子鉴定技术进行总结，综述DNA分子鉴定技术鉴定中药材淫羊藿的方法。

【关键词】淫羊藿；DNA分子鉴定；序列比对；PCR扩增

引言：在《神农本草经》中对于淫羊藿就有记载，将淫羊藿列为中性，认为淫羊藿具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的重要功效，以此为基础使得淫羊藿在我国中药应用领域得到广泛发展，在中药中的用药历史也非常悠久。而我国是淫羊藿这一植物的重要地理分布中心，在我国已经发现的淫羊藿种类达到40多个，而现阶段通过研究与鉴定将其应用于中药领域的淫羊藿种类已经有15个[1]。例如在仙灵骨葆系列、益肾宁颗粒、益肾壮骨颗粒等相关药物系统中对于淫羊藿都有充分应用。而基于淫羊藿众多的种类，进一步对淫羊藿进行DNA分子鉴定，从遗传学角度确定淫羊藿的生物学特性，将有利于促进淫羊藿这一重要中药材的开发与应用。一直以来对于中药材在鉴定的过程中所应用到的技术方法较多[2]，传统的中药材鉴定技术主要包括原植物鉴定、性状鉴定、显微镜检定、理化鉴定，这四大方法组成了我国中药材鉴定的基础，也仍然是我国中药材研究生产与监管过程中应用到的主体方法。而现阶段随着科学技术的不断进步，对于生物医疗的研究更加深入，DNA分子研究水平的不断突破，使DNA分子鉴定技术在中药材鉴定过程中发挥了重要的作用。基于DNA分子鉴定技术进行中药材淫羊藿的鉴定，将开启中药材淫羊藿鉴定的新领域。

采用DNA分子鉴定技术针对中药材淫羊藿进行鉴定，是基于遗传学研究，探索淫羊藿这一中药材的DNA多形态，进一步基于DNA序列分析淫羊藿的物种变异情况，以此为基础基于DNA分子特征对淫羊藿物种进行鉴定[3]。主要包括以下三种鉴定方法：

1 直接进行DNA测序

随着DNA分子技术的研究深入，我们在对中药材淫羊藿进行鉴定的过程中，可以直接进行淫羊藿植株的DNA分子测序，基于DNA序列分析淫羊藿植株的基本特性。直接进行DNA分子测序，以核苷酸系列为基础分析淫羊藿植株的遗传信息，进而准确反映出淫羊藿到遗传特征，同时通过DNA序列信息，对于淫羊藿这一物种在进行研究过程中也能够贡献大量的信息，通过比较DNA序列的变异率，能够有效分析所鉴定的淫羊藿植株种类进化情况[4]。现阶段对于该方法应用于中药材鉴定过程中的应用非常广泛，例如对于人参、杜仲、冬虫夏草、石斛等等种类较多或容易混淆的中药材在进行鉴定时多采用DNA直接测序法。

2  PCR-RFLP

在DNA序列分析和PCR扩增基础之上衍生出的PCR-RFLP技术，能够对所鉴定物种淫羊藿的基因片段进行准确测序，并给予该物种的DNA序列寻找出限制性内切酶位置，然后针对限制性内切酶长度的多态性进行深入研究，以此为基础进行淫羊藿植株特性的鉴定。采用该方法进行鉴定的过程中，获得的鉴定结果非常准确，而且能够重复应用，在药材鉴定过程中具有广泛的使用价值[5]。但是采用该方法在进行鉴的过程中首先要求被鉴定物种的DNA序列中药能够具有合适的限制性内切酶未点，同时相应的限制性内切酶长度应能够满足鉴定要求，否则会影响到鉴定结果，而淫羊藿具备这些条件，可用该方法鉴定。

3  位点特异性PCR扩增

位点特异性PCR扩增就是特异性聚合酶链式反应鉴定方法，该方法是在DNA序列分析基础之上，通过PCR扩增，找DNA序列中稳定而又相互区别的变异位点，结合这一变异位点针对性的设计特异性扩增引物，基于引物的应用针对变异位点形成互补碱基，通常情况下我们在DNA系列上所寻找到的变异位点就是碱基异位点，例如SNP[6]。在基于引物的应用产生互补碱基之后，使引物在淫羊藿植株中的专属性得到扩增，达到对淫羊藿进行鉴定的目的[7]。

4 小结

综上所论，对于中药淫羊藿在进行DNA分子鉴定的过程中，不同的DNA分子鉴定技术有不同的优缺点，DNA分子的直接测序是其他方法开展的基础，该方法应用价值高，适用广阔，是基础方法。PCR-RFLP基于DNA序列分析技术的应用能够充分实现鉴定研究过程中的重现性和可重复性，而所获得的序列信息可以组成基因数据库，为淫羊藿的鉴定奠定良好基础。而PCR扩增技术在应用过程中则有简单、便捷、直观的重要优势，它以也淫羊藿DNA序列中的异性碱基位点可特异性多态性使得实际推广应用价值更高。因此对于淫羊藿在采用DNA分子鉴定技术应用时，各有优缺点，在实践过程中应充分结合淫羊藿植株的特点和鉴定目标选择性运用。

参考文献

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[2]谢琦敏,方哲,叶忠伟.分子生物技术在现代中药发展中的应用[J].北京中医药,2010,29(03):234-236.

[3]王川易,梁云,郭宝林,等.药用淫羊藿品种的分子鉴定研究——朝鲜淫羊藿的位点特异性PCR鉴定[J].中国中药杂志,2010,35(14):1799-1802.

[4]张靖,徐文,宫璐,等.叶类药材淫羊藿精准煮散饮片的质量研究[J].世界科学技术-中医药现代化,2017,19(01):101-107.

[5]严福林,孙庆文,任得强,等.DNA条形码技术在淫羊藿属植物分类鉴定中的可行性分析[J].中华中医药学刊,2021,39(03):69-72+261-262.

[6]张建新,牛宪立.贵州地道药材淫羊藿rDNA ITS序列的分析研究[J].安徽农业科学,2013,41(23):9544-9545+9547.

[7]赵云峰,石磊,蔡敏,等.DNA分子遗传标记技术在药用植物学中的应用[J].曲阜师范大学学报(自然科学版),2001(02):87-90.