氨金黄敏颗粒中马来酸氯苯那敏有关物质方法学研究

氨金黄敏颗粒中马来酸氯苯那敏有关物质方法学研究

杨士聪 谢棋丽

康芝药业股份有限公司，海南 海口 570311

摘要目的：氨金黄敏颗粒是一种常用的儿童抗感冒药，主要成分是对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏和人工牛黄。现行药品标准的质控项目存在不全面的问题。本论文主要针对氨金黄敏颗粒有效成分之一马来酸氯苯那敏质量控制问题，建立有效的有关物质检测方法并验证，为升级药品标准提供方法基础。方法：采用HPLC法，流动相A为磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢铵11.5g，加水适量使溶解，加磷酸1ml，用水稀释至1000ml），流动相B为乙腈，梯度洗脱；流速1.2ml·/min；柱温30℃；波长225nm；进样量20μl。结果：马来酸氯苯那敏检测限浓度为0.045μg/ml；耐用性优；阴性样品、空白稀释剂均无干扰测定，系统适应性分离度大于1.5。本品经破坏实验（强酸、强碱、强氧化、高温60℃、高湿及强光照）破坏后，降解产物与主峰的分离度符合要求。破坏实验的空白均不干扰有关物质测定，专属性良好。结论：本方法简便、准确、灵敏，适用于氨金黄敏颗粒中马来酸氯苯那敏有关物质的测定。

关键词 氨金黄敏颗粒； 马来酸氯苯那敏； 有关物质；高效液相色谱法；方法学

氨金黄敏颗粒是由对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、盐酸金刚烷胺、人工牛黄等组成的复方制剂，是常用的小儿抗感冒药。本文参照国内外药典，并经方法优化，建立专属性强、灵敏度高且通过前处理有效去除其他有效成分及辅料干扰的马来酸氯苯那敏有关物质测定HPLC 法并对其进行方法学验证。经方法验证结果表明，该方法简便快速，稳定可靠，重现性良好，可用于氨金黄敏颗粒中马来酸氯苯那敏的有关物质测定，为该产品的质量控制提供实验依据。

1 仪器与试药

1.1仪器

安捷伦高效液相色谱仪Agilent 1260（紫外检测器），赛多利斯pH计（PB-10），安捷伦高效液相色谱仪Agilent1200（DAD检测器）,赛多利斯电子天平（CPA225D）。

1.2试药

氨金黄敏颗粒（康芝药业股份有限公司，批号：200704），马来酸氯苯那敏对照品（中检院 批号：100047-201507），杂质A（TLC批号：2377-092A3），杂质B（TLC批号：1376-040AL），杂质C（EP），杂质D（trc 批号：7-APD-59-4），杂质非尼那敏（trc 批号：1-JY-36-1）。乙腈（色谱纯），磷酸二氢铵、磷酸、盐酸、氢氧化钠、过氧化氢溶液均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件 照高效液相色谱法（通则 0512）试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢铵11.5g，加水适量使溶解，加磷酸1ml，用水稀释至1000ml），流动相B为乙腈，按下表进行梯度洗脱；流速为每分钟1.2ml；柱温为30℃；检测波长为225nm。

2.2系统适用性

取马来酸氯苯那敏对照品与杂质C对照品，用溶剂溶解并制成每1ml含马来酸氯苯那敏0.5mg与杂质C2.5μg的溶液，作为系统适用性溶液。杂质C峰与氯苯那敏峰的分离度应大于1.5，理论板数按氯苯那敏峰计算不低于4000。系统适用性溶液中杂质C与氯苯那敏峰的分离度3.83，理论塔板数85747，空白无干扰，系统适用性良好。

2.3供试品溶液的配制

取本品5g（约含马来酸氯苯那敏5mg），精密加入二氯甲烷10 ml，振摇使溶解，滤过，精密量取续滤液4ml，吹氮气使二氯甲烷挥尽，加溶剂[流动相A-乙腈（80:20)] 4ml，超声1分钟使溶解，滤过，作为供试品溶液。

2.4对照溶液的配制

取供试品溶液1.0ml至100ml量瓶中，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

2.5测定法

精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。杂质C与其他单杂按自身对照法计算含量。

2.6限度

杂质C峰面积不得大于对照溶液中氯苯那敏峰面积的0.2倍（0.2%），单个杂质峰面积不得大于对照溶液中氯苯那敏峰面积的0.2倍（0.2%），总杂质峰面积的和不得大于对照溶液中氯苯那敏峰面积（1.0%）。

3 方法学验证

3.1 检测波长的选择

由马来酸氯苯那敏原料药和各已知杂质的DAD检测器测得的光谱图可知，马来酸氯苯那敏及各已知杂质A,B,C,D和非尼那敏的较大吸收波长，同时结合《中国药典》2015年版及USP40、EP9.0、JP17中马来酸氯苯那敏（或马来酸右氯苯那敏）有关物质方法的检测波长，选择225nm为本品中马来酸氯苯那敏有关物质的检测波长。

3.2专属性试验

3.2.1强制破坏试验　空白溶剂及阴性样品对马来酸氯苯那敏有关物质测定不会造成干扰。样品在各破坏条件下（强酸、强碱、强氧化、强光照、高温等）,杂质峰和主峰完全分离，且基线平稳，峰纯度符合要求，各已知杂质之间分离度良好，降解产物峰之间能达到基线分离，各破坏条件下主峰纯度因子均大于990。通过比较试验前后总峰面积的变化，物料平衡在90% ～ 110%，方法专属性符合要求，结果详见表1。

表1强制破坏性试验结果

3.2.2杂质对照品外加法　取杂质A、B、C、D、非尼那敏适量，加溶剂[流动相A-乙腈（80:20)]溶解后加至经前处理的供试品溶液中，测定，已知杂质无干扰，结果见下表2。

表2 干扰试验结果

3.3线性及检测限和定量限

通配制一系列浓度的标准溶液（5份）对本方法的线性和范围进行验证。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归。将杂质对照品溶液稀释至相应的浓度，根据信噪比（10∶1），计算得各杂质的定量限；信噪比（3∶1），计算得各杂质的检测限。结果见表3，表明杂质A、B、C、D非尼那敏及马来酸氯苯那敏在相应范围内线性符合要求，方法灵敏度符合要求。

表3 线性方程、检测限和定量限结果

3.4准确度试验

配制相同浓度的供试品溶液12份，分别加入浓度为60％、100％和120％的杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质非尼那敏溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。结果见下表4，方法准确度良好。

表4 回收率试验结果

3.5精密度试验

3.5.1重复性试验

取同一批样品，平行配制6份样品供试液，测定6份供试液有关物质。结果见下表5

3.5.2中间精密度试验

于不同时间、设备、人员，取同一批样品，平行配制6份样品供试液，测定有关物质；与重复性试验共12份样品，计算12份供试液杂质含量的相对标准差。结果见下表5。本品12个供试液中杂质A、B、D、非尼那敏均未检出，杂质C含量的RSD值为3.65%，单杂的RSD值为6.87%，总杂的RSD值为5.40%，均小于10%， 证明本品供试液的精密度良好。

表5精密度试验结果

3.6溶液稳定性试验

3.6.1已知杂质溶液稳定性

取各已知杂质（A、B、C、D和非尼那敏）混合溶液，室温放置，于0-h、4-h、6-h、8-h、12-h考察杂质混合溶液的稳定情况。结果杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和非尼那敏对照品溶液的RSD值分别为0.59、0.74、0.73、2.85、3.06均小于10.0%，说明杂质对照品溶液在室温12小时内稳定。

3.6.2供试品溶液稳定性

取本品适量至锥形瓶中，精密加入二氯甲烷10ml，振摇使溶解，滤过，取续滤液2ml，用氮气吹干，加入2ml溶剂，超声溶解，作为供试品溶液，室温放置；于0-h、4-h、6-h、9-h、12-h考察样品溶液的稳定性。结果马来酸氯苯那敏及各杂质的RSD值均小于5.0%，说明本品供试液在室温下12小时内稳定。

3.7耐用性试验

用系统适用性溶液作为供试品溶液，改变流动相磷酸体积的比例、不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱、柱温、检测波长和流速等。在各耐用性条件下，系统适用性溶液中杂质C和主成分的分离度均大于1.5；流速的改变，杂质C峰面积与主峰峰面积差异较大，RSD分别为12.4%与11.7%，均大于5%，因此流速按1.2ml/min；其他条件下杂质C峰面积与主峰峰面积的差异不明显，RSD均小于5%。试验结果表明本品耐用性试验较好。

4讨论

本实验试过用溶剂溶解供试液直接进样，但因对乙酰氨基酚及辅料浓度较高，高浓度情况下对乙酰氨基酚的色谱峰及辅料峰太强，与杂质分离度达不到要求，所以采用前处理，在增强马来酸氯苯那敏溶解度同时降低对乙酰氨基酚及辅料的溶解度，消除对马来酸氯苯那敏有关物质测定的干扰。采用供试液前处理结果发现，各峰型较好，分离符合要求，不影响有关物质测定结果。经过方法学考察，表明本文方法具有良好的线性、精密度、稳定性和准确度，可对氨金黄敏颗粒中马来酸氯苯那敏的有关物质进行有效、准确测定，对产品质量进行控制，提高现行标准。

参考文献

[1] 国家药典委员会． 中华人民共和国药典(二部) ［S］． 北京: 中国医药科技出版社， 2015．

[2] 国家药典委员会． 中华人民共和国药典(四部) ［S］． 北京: 中国医药科技出版社， 2015．.