简介:目的采用含有固定的肝细胞癌(HCC)细胞或组织碎片、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素-2(IL-2)的生物可降解缓释微球和结核菌素的肿瘤免疫激活剂进行皮内接种,观察对小鼠肝肿瘤的预防免疫作用和预防人HCC切除术后复发的效果.方法动物实验:C57BL/6J小鼠尾部皮内注射Hepa1-6肿瘤免疫激活剂两次,第2次免疫注射后7d,左后肢皮下注射1×107活Hepa1-6细胞,观察肿瘤的生长情况.临床研究:50例肝癌根治切除术后患者采用随机、对照的方法分为免疫激活剂接种组和对照组.结果Hepa1-6细胞注射同源性小鼠后,对照组(A组)18只小鼠全部发展成肝肿瘤;而接种含有固定Hepa1-6细胞的免疫激活剂(B组)的18只小鼠中有4只无肿瘤生长;接种含有IL-2/GM-CSF微球和结核菌素(C组)的18只小鼠中有3只无肿瘤生长:而接种含有固定Hepal-6细胞和IL-2/GM-CSF微球和结核菌素(Tuberculin)的肿瘤免疫激活剂(D组)的18只小鼠中12只无肿瘤的生长,67%的小鼠获得保护.在HCC肿瘤免疫激活剂的临床试验中未见副作用.24例患者中17例出现了抗HCC迟发型超敏反应.剂量-1、-2免疫激活剂组术后1、2、3年复发率分别为25%(25%)、37.5%(37.5%)和50%(37.5%);剂量-4免疫激活剂组术后1、2年复发率分别为O%、12.5%.而对照组HCC切除术后1、2、3年复发率分别为30.8%、53.8%和61.5%.接种剂量-2、-4HCC免疫激活剂患者的术后复发率明显低于对照组(P<0.05).结论这种细胞因子缓释微球的肝癌免疫激活剂具有较强的抗小鼠肝肿瘤的效果;可预防肝癌切除术后复发.
简介:摘要目的研究缺氧诱导的泛素羧基末端水解酶L5 (UCHL5)在调节宫颈癌Hela细胞辐射敏感性中的作用。方法以宫颈癌Hela细胞为研究对象,1% O2条件下培养观察UCHL5表达水平的变化。采用Western blot和实时定量聚合酶链反应(PCR)检测慢病毒载体感染Hela细胞后稳定调变UCHL5的效率,转录本分为空白对照组、过表达对照组、过表达UCHL5组转录本1~4和沉默对照组、沉默UCHL5组转录本1~2。将实验所用的细胞分为过表达对照组、过表达UCHL5组、沉默对照组和沉默UCHL5组。采用流式细胞术检测8 Gy γ射线照射48 h后细胞的凋亡率;采用细胞克隆形成实验检测0、2、4、6 Gy γ射线单次照射培养2周后4组细胞的克隆形成率;采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验检测4组细胞培养1周后的增殖率以及联合0、2、4、6、8、10 Gy γ射线照射后的增殖率。使用基因表达谱数据动态分析癌症基因组图谱数据库宫颈癌组织和正常组织中抗缺氧诱导因子1α(HIF-1α)与UCHL5表达的相关性。采用双荧光素酶报告基因实验观察HIF-1α对UCHL5的激活作用。组间比较采用单样本t检验,采用Pearson检验进行相关性分析。结果缺氧可诱导宫颈癌Hela细胞UCHL5的表达。Western blot和实时定量PCR结果显示,感染后的Hela细胞可显著上调或下调UCHL5的表达,其中,过表达UCHL5组转录本2和沉默UCHL5组转录本2的表达均较高,所以选择此2种转录本进行后续实验。克隆形成实验结果显示,与接受相同剂量照射的过表达对照组相比,上调UCHL5增加了Hela细胞的克隆形成率,在0、2、4、6 Gy剂量照射后克隆形成率的差异均有统计学意义(t=14.16、19.22、8.76、6.79,均P<0.05)。流式细胞术结果显示,与沉默对照组相比,沉默UCHL5促进了Hela细胞的凋亡(t=10.29,P<0.05),增加了γ射线诱导的细胞凋亡率(t=52.01, P<0.05)。MTT实验结果显示,与过表达对照组相比,上调UCHL5可升高宫颈癌Hela细胞的增殖率,增殖率在第3天时差异有统计学意义(t=3.905,P<0.05);与过表达对照组相比,等剂量照射UCHL5上调组升高了受照细胞的增殖率,在剂量为6、8、10 Gy时,细胞的增殖率差异均有统计学意义(t=3.40、4.06、3.68,均P<0.05)。宫颈癌组织中HIF-1α表达水平和UCHL5表达水平呈正相关(R=0.31,P<0.01),双荧光素酶报告基因结果显示HIF-1α结合并激活UCHL5启动子的活性,其活性增加了2.5倍(t=30.47,P<0.05)。结论缺氧条件下,宫颈癌Hela细胞中UHCL5的诱导表达降低了细胞的辐射敏感性,其潜在的机制可能与HIF-1α转录激活UCHL5的表达有关。
简介:本文综述了在杀虫剂抗性中起重要作用的P450酶系研究的最新进展,内容包括:细胞色素P450酶系基因及其基因的表达与调控,P450介导抗性的分子基础。细胞色素P450表达表现出发育期,组织,品系特异性及可诱导性。P450表达的调控机制复杂,可能受顺式调控元件(如CYP6B1)或反式作用因子(如CYP6A1)或顺式,反式因子的共同调控(如CYP6D1),调控可能涉及转录增强的转录机制或mRNA稳定性增加的转录后机制。P450的超量表达是P450酶系介导抗性的主要机制,P450的氨基酸替换也可能在杀虫剂抗性中起作用。
简介:【摘要】目的探讨声导抗检测临床应用。方法选择收治的30例(56耳)分泌性中耳炎患儿为观察组,同时选择同期经鼓膜检查为正常的30例(60耳)健康婴儿为对照组,均行声导抗检测并对检测结果进行对比分析。结果观察组鼓室导抗图异常型所占比例明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组声反射阳性率明显低于对照组,差异有统计学意义(
简介:摘要目的观察抗性糊精对高脂饮食诱导的小鼠肝脏脂肪沉积及肝脏AMPK通路的影响。方法取4周龄雄性C57BL/6小鼠36只,随机分为3组,即正常对照组,高脂饮食组和高脂饮食+抗性糊精组(10 g·kg-1·d-1)。第12周末处死小鼠,留取血清测定三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)水平;留取肝脏组织,测定TG含量,并予HE和油红O染色,观察肝细胞脂肪变性和肝脏脂肪沉积;实时荧光定量PCR检测肝脏组织脂肪酸合成相关基因SREBP1、ACC、SCD1 mRNA的表达水平,Western印迹检测肝脏pAMPK、SREBP1、Fasn、ACC蛋白的表达。结果与正常对照组相比,高脂饮食组小鼠体重增加更显著,空腹血糖(FBG)、血清TC、LDL-C、HDL-C、ALT水平均升高(P<0.01),血清AST也升高(P<0.05);肝脏油红O染色可见肝脏组织脂肪沉积明显,肝脏TG含量增加(P<0.01);SREBP1、ACC mRNA水平升高;pAMPK蛋白水平表达下降(P<0.05)。与高脂饮食组相比,抗性糊精组小鼠体重增加较少,血清TG、TC、LDL-C、HDL-C、ALT水平较低(P<0.01),FBG降低(P<0.05);肝脏油红O染色可见肝脏脂肪沉积减少,肝脏TG含量降低(P<0.01);SREBP1、ACC、SCD1 mRNA水平下降;pAMPK水平增加,Fasn蛋白水平下降(P<0.01)。结论抗性糊精可以改善高脂饮食诱导的小鼠肝脏脂肪沉积,这一作用可能与激活AMPK通路有关。
简介:目的探讨3个抗性品系家蝇对5种杀虫剂的交互抗性,为合理使用杀虫剂提供依据.方法采用微量点滴法.结果抗DDVP品系达14.71倍的抗性,而对氯菊酯、巴沙的交互抗性分别为93.49倍和7.703倍,而对氯氰菊酯基本没有交互抗性,对DDT为0.16倍,呈负交互抗性.抗巴沙品系达5.05倍,对氯菊酯、DDVP的交互抗性为4.07倍和2.78倍,对DDT基本无交互抗性,对氯氰菊酯呈负交互抗性.抗氯菊酯品系达223.09倍的抗性,对氯氰菊酯、DDT的交互抗性为6.63倍及9.20倍,而对DDVP、巴沙基本无明显交互抗性.结论长期使用一种杀虫剂容易产生抗性,亦可能对其它杀虫剂产生交互抗性,用药时应注意种类的选择,合理使用杀虫剂.
简介:摘要目的初步探究原花青素在体外对胃癌细胞株SNU-1增殖、凋亡、活性氧(ROS)水平的影响和分子机制。方法SNU-1细胞分为对照组和12.5、50.0、200.0 μg/ml原花青素组,使用CCK-8实验检测原花青素对SNU-1细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞的凋亡水平和ROS阳性率,并向加入200.0 μg/ml原花青素的SNU-1细胞中加入2 mmol/L谷胱甘肽,检测细胞的凋亡水平和ROS阳性率;采用蛋白质印迹法检测细胞中凋亡相关蛋白的表达水平。结果CCK-8实验结果显示对照组和12.5、50.0、200.0 μg/ml原花青素组的SNU-1细胞增殖活力分别为3.69±0.30、3.29±0.41、0.91±0.39、0.45±0.22,差异有统计学意义(F=279.84,P<0.001);与对照组比较,3个原青花素组SNU-1细胞的增殖被显著抑制(P=0.006,P<0.001,P<0.001)。流式细胞术结果显示,对照组和12.5、50.0、200.0 μg/ml原花青素组的SNU-1细胞早期凋亡率分别为(0.00±0.00)%、(0.00±0.00)%、(0.09±0.07)%、(0.45±0.22)%,差异有统计学意义(F=7.14,P=0.003);50.0和200.0 μg/ml原青花素组较对照组显著增加(P=0.003,P=0.007)。4组SNU-1细胞晚期凋亡率分别为(0.00±0.00)%、(0.01±0.00)%、(6.98±0.77)%、(33.32±2.78)%,差异有统计学意义(F=654.28,P=0.003);50.0和200.0 μg/ml原青花素组较对照组显著增加(P<0.001,P<0.001)。4组SNU-1细胞ROS阳性率分别为(0.02±0.01)%、(0.10±0.05)%、(1.15±0.26)%、(1.58±0.22)%,差异有统计学意义(F=162.24,P<0.001);50.0和200.0 μg/ml原青花素组较对照组显著增加(P<0.001,P<0.001)。200.0 μg/ml原花青素组和谷胱甘肽干预组SNU-1细胞的ROS阳性率分别为(1.25±0.63)%、(0.13±0.02)%,差异具有统计学意义(t=5.39,P=0.001);2组细胞早期凋亡率分别为(10.56±3.24)%、(2.09±0.24)%,晚期凋亡率分别为(29.65±6.01)%、(23.63±1.52)%,差异均具有统计学意义(t=2.61,P=0.048;t=3.97,P=0.012)。对照组和12.5、50.0、200.0 μg/ml原花青素组SNU-1细胞Bcl-2蛋白表达水平分别为1.00±0.00、0.83±0.05、0.60±0.14、0.41±0.23,差异有统计学意义(F=10.63,P=0.004);50.0和200.0 μg/ml原青花素组较对照组显著减少(P<0.001,P<0.001)。结论原花青素在体外对胃癌SNU-1细胞具有抑制增殖和促进凋亡的作用,可能是通过升高细胞内的ROS水平和减少Bcl-2蛋白表达实现的。
简介:摘要目的探寻SARS-CoV-2膜蛋白(membrane protein, M protein)引起的免疫特征,尤其是其引发抗体依赖性增强效应(antibody-dependent enhancement, ADE)的可能性。方法利用原核表达系统制备纯化的SARS-CoV-2全长M蛋白,并经皮下途径3次(第1、14和21天)免疫BALB/c小鼠,获得血清。Western blot鉴定血清特异性,ELISA法和中和试验对血清抗体的效价进行验证。体外培养检测在抗M蛋白血清存在的情况下SARS-CoV-2在树突状细胞、自然杀伤细胞、T和B细胞中的增殖情况。结果SARS-CoV-2全长M蛋白免疫BALB/c小鼠后获得的免疫血清能够特异地识别病毒M蛋白,且免疫血清中抗全病毒抗体效价约为1∶400,但该抗体没有中和活病毒的能力。此外,这种抗体不能够辅助病毒感染各种类型具有Fc受体(Fc receptor,FcR)的免疫细胞并在其中增殖。结论由M蛋白诱导的非中和抗体不能以FcR途径诱导ADE效应。
简介:为探讨猪殃殃Galiumaparine抗药性生物型(R)对苯磺隆的抗性机制,测定了苯磺隆对猪殃殃抗性、敏感(S)生物型体内靶标酶[乙酰乳酸合成酶(ALS)]、代谢酶[谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)]及抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)]影响的差异。离体试验结果表明,苯磺隆对R、S生物型猪殃殃ALS的抑制中量(IC50)分别为0.682、0.718μg/L(有效剂量),R、S生物型猪殃殃ALS对苯磺隆的敏感性不存在差异。活体试验结果表明,苯磺隆茎叶喷雾处理后,R、S生物型ALS活力均表现为先上升,但S生物型上升幅度小,且随后快速下降,第3d即回落至对照之下,并维持在低于对照的水平,而R生物型ALS活力在第2d可达对照的4.10倍,第5d基本回落至对照水平,之后基本维持在对照水平;R生物型GSTs活力在第1d即开始上升,最高可达对照的2.40倍,而S生物型则表现为先下降,然后小幅回升,最高为对照的1.61倍,两者在10d左右均回落至对照水平;R生物型SOD活力与对照基本相同,而S生物型虽略有下降,但R、S间不存在显著差异;两者POD活力虽均有大幅提高,但亦不存在显著差异。结果表明,低水平抗药性生物型猪殃殃对苯磺隆产生抗性的原因可能是ALS过量表达及GSTs对苯磺隆的代谢作用加强,而不是由于ALS的敏感性下降,同时POD、SOD在减轻药害中也具有一定作用。