简介：胰岛素对于颅内动脉的影响尚无相关研究。PrasadVenkatesweraGurunathKatakam，etal研究通过聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）及免疫印迹的方法证实胰岛素受体在脑血管及培养的微血管内皮细胞中表达（cerebralmicrovascularendothelialcells，CMVECs），通过监测血管直径发现胰岛素作用的双相性：

简介：胰岛素对于颅内动脉的影响尚无相关研究。Katakam等研究通过聚合酶链反应（polymerasechainreaction,PCR）及免疫印迹的方法证实胰岛素受体在脑血管及培养的微血管内皮细胞中表达（cerebralmicrovascularendothelialcells,CMVECs），通过监测血管直径发现胰岛素作用的双相性：

简介：摘要目的探讨肌细胞增强因子2C（MEF2C）蛋白在胃癌中的表达情况，并研究与病理和预后的关系。方法使用生物信息学的方法，在TCGA数据库中分析MEF2C在胃癌患者中的表达量及与总生存的关系。选取66例胃癌患者为研究对象，通过对术后胃癌组织标本的免疫组织化学染色，分析MEF2C在胃癌中的表达，结合病理信息和术后随访信息，研究MEF2C对胃癌进展的影响。结果MEF2C在胃癌组织中的高表达与肿瘤大小和肿瘤复发相关（均P<0.05），而与肿瘤分级及淋巴结转移无关（均P>0.05）。结论MEF2C蛋白的高表达可作为胃癌预后不良的标志物。

简介：目的：探讨益心口服液对化学性缺氧心肌细胞的保护作用。方法：改良Simpson法培养新生大鼠心肌细胞，随机分为生理盐水对照组、缺氧模型组、复方丹参滴丸组及益心口服液大中小3个剂量组。采用二亚硫酸钠造心肌细胞化学性缺氧，并给予相应的药物干预。检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）和丙酮酸激酶（PK）含量，观察益心口服液对化学性缺氧心肌细胞的影响。结果：与对照组心肌细胞相比，缺氧模型组心肌细胞变大，折光性差，胞核暗淡，细胞LDH和PK含量降低，细胞MDA含量增加，SOD活性降低（P〈0．05）。复方丹参滴丸组细胞PK含量降低，细胞MDA含量增加，SOD活性降低（P〈0．05）。益心口服液各剂量组SOD活性增加，LDH和PK含量增加，而MDA含量降低（P〈0．05）。未见剂量依从性。结论：益心口服液通过抗氧自由基，稳定细胞膜；降低心肌耗氧量，增加氧供需比等来减少缺氧心肌细胞损伤。

简介：正常细胞在静息状态下,胞浆游离钙浓度维持在10-7mol/L水平。产生钙信号的激动剂作用于细胞时,引起胞浆游离钙浓度升高,进而影响细胞功能。文献报告细菌脂多糖在体内和体外影响细胞对钙的摄取和转运。本研究采用quin-2荧光指示剂法测定培养心肌细胞胞浆游离钙浓度,观察脂多糖对心肌细胞基础水平胞浆游离钙浓度的影响。

简介：对近年来大量的文献研究,运动训练是人体的重要的应激源,在运动应激下会诱发骨骼肌细胞的凋亡,并且随着运动形式与强度等改变而改变。骨骼肌中的细胞凋亡与运动能力的下降有着密切的联系,这有可能是诱发运动性疲劳的机制之一。因此,研究运动训练与细胞凋亡的关系及运动导致骨骼肌细胞凋亡的机制意义重大。运动可以诱导骨骼肌细胞凋亡,细胞凋亡发生的比率和程度与运动形式、运动强度和运动持续时间密切有关。这些问题的研究对于预防和处理运动导致的骨骼肌损伤以及缓解运动性疲劳、提高运动成绩提供了理论指导。

简介：目的探讨调控体外培养大鼠血管平滑肌中微小RNA-21(microRNA-21,miRNA-21)的表达水平对该类细胞迁移和侵袭能力的影响。方法0.1%Ⅱ型胶原酶消化分离血管平滑肌细胞并进行培养,用免疫组化染色法检测细胞胞浆内α-肌动蛋白的表达。试验分为6组:空白对照组(加DEPC水)、单纯转染试剂组(仅加lipofectamineTM2000)、阴性对照组(转染阴性对照序列)、上调miRNA-21组(转染miRNA-21拟似物)、下调miRNA-21组(转染miRNA-21阻遏物)、无关序列组(转染无关序列)。利用lipofectamineTM2000将miRNA-21转染到培养的血管平滑肌细胞中,采用real-timePCR分别检测各组细胞miRNA-21的表达水平。采用细胞划痕实验分别检测各组细胞体外迁移能力的变化和transwell侵袭小室模型分别检测各组细胞侵袭能力的变化。结果原代血管平滑肌细胞在相差显微镜下呈现‘谷和峰’的生长特点,胞浆内α-肌动蛋白染色阳性的细胞数占总细胞数的98%以上。与对照组相比,上调miRNA-21组的血管平滑肌细胞体外迁移和侵袭能力明显增强(P<0.05),下调miRNA-21组的血管平滑肌细胞体外迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论miRNA-21可以促进血管平滑肌细胞迁移和侵袭。

简介：用CFDA／AM荧光探针负载离体培养的大鼠心肌细胞，在激光扫描共聚仪显微镜下观察细胞内胞间通讯的变化。结果发现不同浓度和时间的FGF－2对原代的新生大鼠的心室肌细胞的胞间通讯的影响不同，1ng/ml组在FGF－2作用经1天和第4天对细胞的胞间通讯无明显变化影响；10ng/ml和100ng/ml在FGF－2作用的第1天的平均荧光恢复速率明显下降，在作用后的第4天，平均荧光恢复速率依然显著低于对照组。1000ng/ml的FGF－2作用于心肌细胞的第1天，平均荧光恢复速率无显著变化，第4天平均荧光恢复速率明显增加。

简介：目的肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导因子（TWEAK）作为一种多功能的细胞因子,在细胞生长、分化、迁移、修复中起重要作用。然而,TWEAK对新生大鼠心肌细胞增殖的影响,及其与转化生长因子-β1（TGF-β1）的关系尚不明确。方法通过培养新生SD大鼠的原代心肌细胞,应用TWEAK（20ng/ml）干预后培养24-48小时,应用CCK-8法检测心肌细胞增殖情况,以ELISA法检测细胞上清液的TGF-β1水平,同时分析二者相关性。结果心肌细胞培养24小时,TWEAK干预组的心肌细胞CCK-8法检测OD值显著高于对照组（0.71±0.08vs.0.42±0.08,P=0.012）;培养48小时,TWEAK组的心肌细胞增殖力仍高于对照组（1.18±0.04vs.0.92±0.03,P〈0.01）;同时,我们发现,TWEAK干预组,细胞上清液的TGF-β1水平显著高于对照组（24小时：133.1±4.3vs.64.8±10.5pg/ml,P〈0.01;48小时：187.3±7.9vs.66.8±8.4,P〈0.01）。通过Pearson相关性分析,我们还发现,CCK-8检测的细胞OD值与TGF-β1水平存在正相关,提示后者可能是TWEAK促进心肌细胞增殖的因素。结论TWEAK可以促进新生大鼠心肌细胞的增殖,该机制可能与TGF-β1表达增高有关。

简介：目的探讨一种可溶性的外分泌因子midkine-a在斑马鱼胚胎心脏发育过程中的功能.方法在整体胚胎上做midkine-aRNA的原位杂交实验;利用原有的转基因斑马鱼系Tg（pmidkine-a：EGFP）,动态观察胚胎从出生到心脏发育成形这一段时间心脏荧光表达情况;将原有的转基因斑马鱼体系Tg（phsp：midkine-a：EGFP）胚胎进行热休克而过表达midkine-a,观察胚胎心脏表型;利用Tg（pcmlc2：dsRed）鱼系胚胎的心肌细胞核带有红色荧光,能进行单个心脏心肌细胞计数这一特点,将杂合的Tg（phsp：midkine-a：EGFP）鱼系与纯合的Tg（pcmlc2：dsRed）鱼系交配,以得到Tg（phsp：midkine-a：EGFP/pcmlc2：dsRed）的杂合胚胎,对其进行热休克而过表达midkine-a,计算每个胚胎心脏内心肌细胞的总数;用吗啉寡聚核苷酸（morphonino,MO）阻碍新生胚胎内的midkine-amRNA表达,观察胚胎心脏表型.结果原位杂交试验证实midkine-a在胚胎48hpf（hourpostfertilization,受精后,用来标记斑马鱼胚胎年龄）大时表达于心脏;转基因Tg（pmidkine-a：EGFP）胚胎在72hpf时其EGFP表达于心脏;Tg（phsp：midkine-a：EGFP）胚胎在过表达midkine-a后心脏变小;吗啉寡聚核苷酸敲除midkine-a对胚胎心脏发育无影响;最后在Tg（phsp：midkine-a：EGFP/pcmlc2：dsRed）鱼系胚胎内过表达midkine-a导致其单个心脏内心肌细胞数目变少,与其小心脏外形吻合.结论midkine-a在斑马鱼胚胎发育过程中表达于胚胎心脏;过表达midkine-a导致胚胎心脏内心肌细胞总数减少及心脏变小;敲除midkine-a则对胚胎心脏发育无影响.

简介：目的探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对心肌细胞凋亡的影响以及与内质网应激的关系。方法培养的心肌细胞分别加入不同浓度的AngⅡ并给予不同时间段的刺激后，采用流式细胞仪检测细胞凋亡率，并甄选出最佳AngⅡ刺激浓度及刺激时间。将培养的心肌细胞给予最佳浓度及时间的AngⅡ刺激后收集，分别用免疫组化法及免疫印迹检测GRP78、caspase-12蛋白的表达水平。结果AngⅡ诱导心肌细胞GRP78、Caspase-12表达升高。结论AngⅡ通过ERS相关的Caspase-12通路介导心肌细胞凋亡。

简介：摘要目的探讨苯那普利对缺氧/复氧(HR)诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法采用纯化的乳鼠心肌细胞复制缺血再灌注模型。实验分3组正常对照组，单纯缺氧复氧组（HR），缺氧复氧+苯那普利组(1×10-6mol/L)。细胞缺氧1h复氧2h后取细胞培养液测定乳酸脱氢酶（LDH）的活性，取细胞测定超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量，并用流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率。结果HR组SOD活性低于对照组,LDH、MDA含量、细胞凋亡率均高于对照组,与对照组相比均有显著差异(Ｐ<0.05)；在苯那普利用药组,ＳＯＤ活性高于HR组,ＭＤＡ含量、细胞凋亡率均显著低于HR组,Ｐ<0.05。结论苯那普利对HR损伤诱导的乳鼠心肌细胞凋亡有抑制作用。

简介：目的：观察小檗碱（Berberine）对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖影响及对核因子-κB（NF-κB）的影响。方法：采用一次性腹腔注射链脲佐菌素55mg.kg-1诱发糖尿病大鼠模型,取建模成功大鼠胸主动脉中膜血管平滑肌细胞进行培养,倒置显微镜下观察细胞形态,SMA免疫组化染色鉴定细胞,计数法观察细胞的生长曲线,CCK-8法测定小檗碱IC50,共聚焦显微镜下观察小檗碱对VSMC中NF-κB核转移的影响。结果：与正常组对比,糖尿病组VSMC生长速度快,小檗碱能明显抑制糖尿病血管平滑肌细胞增殖,IC50为6.001±0.853μmol.L-1,而对正常大鼠VSMC增殖的IC50为18.229±0.434μmol.L-1（P〈0.05）有剂量依赖性;小檗碱能抑制糖尿病VSMC中NF-κB从胞浆转移到胞核。结论：小檗碱呈剂量依赖性能抑制糖尿病VSMC增殖与NF-κB的核转移。揭示小檗碱可能有抑制糖尿病大血管病变作用,而此作用可能与抑制NF-κB激活有关。

简介：去甲肾上腺素（noradrenaline，NA）在心肌缺血缺氧预适应过程中的作用已经被公认，但是其具体的作用机制，尤其对细胞的能量代谢变化的分子水平研究不足，而线粒体能量代谢是一个非常重要的环节。据此，特设计此实验用微量NA对培养心肌细胞进行预处理，研究NA预处理后早时相心肌细胞在缺血缺氧损伤中线粒体跨膜电位和培养液中乳酸脱氢酶（1actatedehydrogenase，LDH）浓度的变化，为临床治疗提供新的思考和药物选择。

简介：目的观察15-酮基二十碳四烯酸（15-ketoeicosatetraenoicacid,15-KETE）对大鼠肺动脉平滑肌细胞（pulmonaryarterialsmoothmusclecells,PASMCs）膜电压门控钾离子通道（Kv）的作用,探讨其收缩肺动脉的离子通道机制.方法采用急性酶分离法（胶原酶Ⅰ型和弹性酶）获得健康成年SD大鼠单个PASMC,应用全细胞膜片钳记录方法,研究15-KETE对膜电位（Em）、膜电容（Cm）、电压门控钾电流（Ikv）的影响.结果①高浓度15-KETE（1×10-7mol/L、1×10-6mol/L）可引起PASMCs去极化,并且在细胞内钙被BAPTA缓冲后,15-KETE仍可引起PASMCs去极化,15-KETE对PASMC的膜电容无影响;②15-KETE（1×10-8～1×10-6mol/L）对Ikv的影响呈浓度依赖性和可逆性;③细胞内钙离子在生理浓度时（[Ca2＋]i=75nmol/L）,15-KETE（1×10-6mol/L）对Ikv峰电流的抑制率显著高于细胞内无钙离子时.结论15-KETE可浓度依赖性的抑制Ikv,使常氧大鼠PASMCs去极化;细胞内钙离子加强了15-KETE对Ikv峰电流的抑制作用.

简介：摘要目的探究外泌体在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMC）钙化中的调节作用。方法体外培养VSMC（A7r5细胞），随机分为正常磷组（0.9 mmol/L）、高磷组（2.6 mmol/L）及高磷外泌体诱导组（即高磷组细胞提取的外泌体加入正常培养的VSMC中）。至培养第7天，收集正常磷组、高磷组细胞培养换液过程中获得的培养液，通过超速离心法得到沉淀物，BCA蛋白定量法测定所得沉淀物蛋白含量，分别对所得沉淀物用透射电镜观察沉淀物形态及大小，Western印迹法检测外泌体标志蛋白肿瘤易感基因101蛋白（tumor susceptibility gene 101 protein，TSG101）、CD9；并对外泌体微RNA（microRNA，miRNA，miR）进行提取，实时定量PCR法检测miR-30b、miR-204、miR-211含量。分别培养7 d后，观察高磷外泌体诱导组VSMC对外泌体的摄取过程，观察3组细胞形态，茜素红染色检测细胞钙盐沉积水平，邻甲苯酚络合铜检测细胞钙离子含量，比色法检测细胞碱性磷酸酶含量，Western印迹法检测成骨特异性转录因子（Runx2）蛋白表达情况。结果（1）VSMC培养液经超速离心法所获沉淀物，经电镜形态学鉴定为外泌体，Western印迹法证实外泌体标志蛋白TSG101、CD9表达阳性。（2）外泌体内富含miRNA，经测定，高磷组外泌体中负向调控Runx2转录的miR-30b、miR-204、miR-211表达较正常磷组明显下调（均P<0.05）。（3）高磷培养VSMC 7 d后，钙盐沉积明显，与正常磷组相比，钙含量、碱性磷酸酶活性明显增高（均P<0.05），Runx2表达也明显增高（P<0.05）。（4）将所得高磷组外泌体加入正常培养的VSMC中，外泌体可被VSMC摄取并成功诱导VSMC发生钙化，VSMC钙化指标及Runx2表达水平均明显增高。结论高磷诱导VSMC发生钙化，促进Runx2表达增高，其机制可能是借由VSMC释放外泌体传递细胞信号而实现。

简介：摘要心肌细胞自噬对维持正常心脏结构和功能起重要作用。近年来的研究结果表明老年人心肌细胞自噬功能降低，老年人心肌自噬基因Atg5、Atg7和Beclin1表达降低；心肌细胞自噬下调与磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸-苏氨酸激酶/雷帕霉素靶蛋白和单磷酸腺苷激活的蛋白激酶及SIRT1信号通路失调有关；此外，活性氧及一些神经内分泌因子也可介导老年人心肌细胞自噬下调。调控心肌细胞自噬将为老年人心肌病的预防和治疗提供新的途径。

简介：目的探讨银杏叶提取物(Egb761)对SD乳鼠心肌细胞外钙内流的影响.方法选择三天鼠龄的雄性SD乳鼠心肌,按Hoffman法行心肌细胞培养10-12天.实验分二组:对照组和实验组(Egb761分成三种浓度10-3mol、10-5mol、10-7mol).应用Fufa-2荧光探针的方法,观察各组静息状态和加氯化钾(浓度为20mmol)后的心肌细胞游离钙浓度的改变.结果(1)基础状态下,氯化钾能促进心肌细胞外钙内流,使心肌细胞内游离钙浓度增高(P《0.001);(2)Egb761对氯化钾激发的细胞外钙内流的增加有抑制作用(P《0.05).结论Egb761具有抑制SD乳鼠心肌细胞外钙内流的作用,提示Egb761可能对钙超载所致的心肌细胞损伤具有防治作用.

简介：目的：研究过氧化物酶体增值物激活受体-α（Peroxisomeproliferator-activatedreceptor，PPAR-α）信号转导通路在高糖高胰岛素诱导心肌细胞肥大中的作用。方法：利用乳鼠心肌细胞培养，以细胞表面积、蛋白含量和心房利钠因子（atrialnatriureticfactor，ANF）mRNA表达为心肌肥大反应指标，观察PPAR-α激动剂非诺贝特及其相应阻断剂MK886对高糖高胰岛素致心肌肥大作用的影响。利用Realtime—PCR方法和westemblot方法分别检测PPAR—α及其下游因子环氧化酶-2（Cyclooxygenase2，Cox-2）mRNA及蛋白的表达。结果：在高糖高胰岛素模型组（25．5mmol／L葡萄糖与0．1gmol／L胰岛素），心肌细胞表面积、总蛋白含量和ANFmRNA表达明显增加（P〈0．01）；但PPAR-αmRNA和蛋白的表达明显降低（P〈0．05）；同时，Cox-2mRNA和蛋白的表达增加，明显高于对照组（P〈0．05）。然而PPAR-α的选择性激动剂非诺贝特（10^-6、3×10^-6和10^-5mol／L）呈浓度依赖性地抑制高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大（P〈0．01）。非诺贝特3×10^-6mol／L明显上调高糖高胰岛素模型组PPAR-αmRNA和蛋白的表达（P〈0．05），并阻遏其下游损伤性炎性因子Cox-2mRNA和蛋白的表达（P〈0．05）。同时，MK886可完全阻断非诺贝特对高糖高胰岛素诱导心肌细胞肥大模型组的上述改善作用（P〈0．05）。结论：PPAR-α及其下游炎症因子Cox-2参与了高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大。

简介：目的：观察灯盏花素对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞（vascularsmoothmusclecells,VSMCs）增殖及核转录因子-κB（NF-κB）的影响。方法：建立链脲佐菌素糖尿病大鼠模型,用组织贴壁法体外培养糖尿病及正常VSMCs,通过细胞计数试剂盒（cellcountingkit-8,CCK-8）测定灯盏花素对糖尿病及正常VSMCs的50%抑制率浓度（IC50）,采用免疫荧光-共聚焦显微镜检测灯盏花素对糖尿病VSMCs中NF-κB核转运影响。结果：灯盏花素能抑制糖尿病及正常VSMCs的增殖,其IC50分别为8.63±0.69mg/L、31.61±3.90mg/L;不同浓度的灯盏花素干预糖尿病VSMCs24h后明显抑制NF-κB的激活,减少核转运。结论：灯盏花素对糖尿病VSMCs增殖抑制作用强于正常VSMCs,其机制可能与下调糖尿病VSMCs的NF-κB核转运有关。