简介:摘要目的探讨巨噬细胞胱天蛋白酶募集域蛋白9(card9)在胰腺腺泡细胞导管组织转化中的作用。方法构建3条靶向card9的小分子干扰RNA(siRNA-card9),荧光显微镜下观察转染巨噬细胞的荧光强度,采用实时定量PCR法检测巨噬细胞card9 mRNA表达量,筛选巨噬细胞的最佳转染效率。将5×105巨噬细胞和100 μg/ml β葡聚糖体外常规培养12、24 h后,分成阳性细胞组(巨噬细胞)、β葡聚糖刺激阳性细胞组、阴性细胞组(card9-/-巨噬细胞)、β葡聚糖刺激阴性细胞组,采用蛋白质免疫印迹法检测各组巨噬细胞card9蛋白表达水平。取1×105巨噬细胞、1×105胰腺腺泡细胞加入Transwell小室上下层共培养120 h后,分为阳性细胞组(巨噬细胞+腺泡细胞)、100和500 μg/ml β葡聚糖刺激阳性细胞组、阴性细胞组(card9-/-巨噬细胞+腺泡细胞)、100和500 μg/ml β葡聚糖刺激阴性细胞组,取下室的胰腺腺泡细胞,采用免疫荧光化学染色法检测腺泡细胞导管组织转化标志物CK19蛋白表达。结果siRNA-card9转染巨噬细胞24 h荧光强度最强,浓度为200 nmol/L时抑制效率最高。阳性细胞组、β葡聚糖刺激阳性细胞组、阴性细胞组、β葡聚糖刺激阴性细胞组培养24 h后,巨噬细胞card9蛋白表达量分别为0.81±0.05、1.46±0.05、0.42±0.06、0.46±0.06,β葡聚糖刺激阳性细胞组较阳性细胞组显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。100和500 μg/ml β葡聚糖刺激阳性细胞组腺泡细胞内CK19绿色荧光较阳性细胞组明显增强,且呈β葡聚糖剂量依赖性;而阴性细胞组、100和500 μg/ml β葡聚糖刺激阴性细胞组腺泡细胞内CK19绿色荧光强度均较阳性细胞组显著降低。结论巨噬细胞card9表达水平升高可诱导腺泡细胞导管组织转化,提示可能存在card9介导的胰腺癌发病机制。
简介:首先采用饱和硫酸氨分步沉淀和SephadexG-200凝胶层析的方法,获得了非免疫状态下中华鲟(AcipensersinensisGray)和达氏鳇(HusodauricusGeorgi)的血清免疫球蛋白(Ig),在此基础上使用木瓜蛋白酶水解对所获得的免疫球蛋白片段进行了酶解,并采用SDS-PAGE和Western-blot等方法分析了所获得的水解片段。结果显示,2种鲟鱼的免疫球蛋白均可被木瓜蛋白酶水解蛋白,通过SephadexG-100凝胶层析后均可得到两个完全分离的、均一的蛋白峰。SDS-PAGE检测两个水解片段的相对分子量分别为44KD和66KD,West-ern-blot检测结果显示,66KD的片段可以在硝酸纤维素杂交膜上被各自的兔抗鲟IgM多克隆抗体所识别,而44KD片段的检测结果为阴性。这表明,2种鲟科鱼类的木瓜蛋白酶水解特性相同,提示鲟科鱼类的免疫球蛋白在免疫学及生化方面具有较大的相似性。
简介:目的:探讨腺苷脱氨酶(ADA)、C反应蛋白(CRP)检测在胸腔积液鉴别诊断中的临床意义。方法:回顾性分析2006年01月至2009年09月我院收治的76例胸腔积液患者(其中结核性积液32例,癌性积液20例,炎性积液24例)ADA、CRP检测结果,并对各组积液ADA、CRP检测结果作对比分析。结果:ADA水平结核性积液明显高于癌性积液和炎性积液(P〈0.05),而癌性积液和炎性积液ADA水平无明显差异(P〉0.05);CRP水平结核性积液和炎性积液均明显高于癌性积液(P〈0.05),而结核性积液和炎性积液CRP水平无明显差异(P〉0.05)。结论:ADA、CRP检测对胸腔积液鉴别诊断有重要临床价值。
简介:[目的]探讨10%西甲硅油联合糜蛋白酶配制成胃镜消泡剂做术前预处理后的祛泡效果.[方法]将300例无痛胃镜检查病人随机分为西甲硅油+糜蛋白酶组和西甲硅油组.检查前20min,西甲硅油+糜蛋白酶组给予0.9%氯化钠溶液27mL+西甲硅油3mL+糜蛋白酶200U的稀释溶液30mL口服;西甲硅油组给予0.9%氯化钠溶液27mL+西甲硅油3mL的稀释溶液30mL口服.比较两组病人胃镜检查视野清晰度、检查时间、医生满意度、麻醉药用量,对两组胃镜检查消泡剂的祛泡效果进行分析.[结果]西甲硅油+糜蛋白酶组胃镜检查视野清晰度、医生满意度高于西甲硅油组(P〈0.01),胃镜检查时间短于西甲硅油组(P〈0.01),麻醉药用量低于西甲硅油组(P〈0.01).[结论]西甲硅油联合糜蛋白酶作为无痛胃镜检查消泡剂比单独使用西甲硅油祛泡效果更好,能够缩短胃镜检查时间,提高医生满意度,减少麻醉药用量,降低麻醉风险.
简介:摘要目的探讨尿蛋白结合尿酶(NAG)检测在早期药源性肾损害临床诊断中的意义。方法收集近年来在我院检验科进行尿蛋白和尿酶(NAG)测定的89例临床资料,其中发生药源性肾损害的46例为A组,健康体检者43例为正常对照B组。尿蛋白检测采用干化法,尿酶(NAG)检测采用终点比色法。结果肾损害A组中尿白蛋白检出阳性率71.7%,尿酶(NAG)检出阳性率78.3%,两项指标联合检测中至少有一项及以上阳性的检出阳性率91.3%,肾损害A组阳性检出率远高于健康对照B组(P<0.01)。结论尿蛋白检测简单、实用,尿酶(NAG)检测可靠性高,二者结合对于诊断早期药源性肾损害非常有价值。
简介:目的:通过在大肠杆菌中分段表达禽流感病毒聚合酶酸性蛋白(PA蛋白),探索PA基因中可能影响表达的区域。方法:构建分段缺失的PA蛋白突变体,用IPTG在大肠杆菌RosettaGamiB(DE3)中诱导表达,比较各突变体的表达效率。结果:N端缺失长度在143~408个氨基酸残基之间的9个突变体在大肠杆菌中的表达水平较高;而突变体PA/K(Δ1-40aa)、PA/M(Δ1-56aa)、PA/N(Δ41-56aa)和PA/P(Δ57-75aa)的表达水平很低;全长PA蛋白和缺失N端20个氨基酸残基的突变体PA/L则检测不到表达。结论:PA基因的61~225bp和325~426bp可能是影响PA蛋白表达的2个重要区域,为下一步表达全长PA蛋白奠定了基础。