简介：大豆是主要的油料作物，起源于中国，在我国种质资源十分丰富。大豆孢囊线虫（SCN）（HeteroderoglycinesIchinohe）是一种土传的定居性内寄生线虫，不易防治，常引起大豆黄萎病等病害，是大豆生产上危害最大的病害之一。大豆孢囊线虫病生理小种多达十几种，在我国，大豆孢囊线虫病病原主要为3、4号生理小种。大豆抗孢囊线虫的研究一直是世界上大豆抗病育种研究的热点之一。在本课题的前期研究中，根据已克隆的植物抗孢囊线虫病基因的保守序列设计引物，对经常规鉴定为抗（感）孢囊线虫3号生理小种的15个大豆品种基因组DNA进行PCR扩增，在大豆抗病品种中获得一条大豆抗孢囊线虫的特异条带。本研究在此基础上利用该对引物，对高抗孢囊线虫3号小种的北京小黑豆基因组DNA进行扩增，并克隆了特异扩增片段，命名为RSCN3，经测序及BLAST分析，发现其DNA序列与GenBank、EMBL、DDBJ、PDB中的大豆似受体激酶RHG4、水稻TMK（leucinerichprotein，receptor-likekinase）基因等均有80％以上的同源性。根据该DNA序列推测其氨基酸序列，在其序列中共找到21个亮氨酸，将该序列与蛋白质序列同源性进行比较，结果发现与植物中的受体激酶、富含亮氨酸重复的蛋白激酶有较高的同源性。因此推测RSCN3克隆片断为一个与受体激酶有类似作用的抗病相关基因的RGA，并将该序列登录到GenBank中，登录号为：AY580161。

简介：目的：克隆并表达caspase-8／10相关RING结构域蛋白1（CARP1）基因，检测其泛素连接酶活性。方法：提取结肠癌HCT116细胞总RNA，RT-PCR扩增CARP1基因，将其克隆到真核表达载体pcDNA3-Flag中，序列正确的阳性克隆进行扩增，提取质粒转染至293T细胞中进行瞬时表达，通过体内泛素化检测其泛素化酶活性，通过萤光素酶报告基因的方法检测其对NF-kB转录活性的影响，利用细胞生长曲线检测CARP1基因对结肠癌细胞生长的影响。结果：免疫印迹实验表明CARP1基因在293T细胞中获得有效表达；免疫共沉淀实验表明，当CARP1存在时，受体相互作用蛋白1（RIP1）被泛素化；萤光素酶实验结果表明CARP1抑制肿瘤坏死因子a（TNFa）引起的NF-kB报道基因的激活；通过生长曲线发现CARP1能促进结肠癌细胞系HCT116生长，并能部分抵抗顺铂抑制细胞生长的作用。结论：构建的人CARP1基因真核表达载体在293T细胞中获得表达，表达产物具有RIP1泛素连接酶的活性，可抑制TNFa引起的NF-kB报告基因的激活，并且促进结肠癌细胞的生长，为进一步的基因功能研究奠定了基础。

简介：基于菰黑粉菌全基因组测序结果及其酵母型和菌丝型转录组差异化表达数据库，结合RACE技术克隆获得一个长度为7625bp的基因，其中编码序列为5874bp，无内含子．结构及聚类分析结果表明该基因编码的MAPKKK蛋白激酶，属于Hogl信号途径，与大麦坚黑粉菌中的Ssk2亲缘关系最近．表达分析结果显示：UeSsk2在菌丝诱导形成过程中持续上调表达，而在生长受到抑制的菌丝细胞中其表达无显著变化或受到抑制，表明UeSsk2与菌丝形成具有相关性．同时，经生物传感器进行的蛋白互作检测结果表明，UeSsk2与前期发现的UeMkkl不存在蛋白互作关系，表明该蛋白参与其他MAPK途径来影响菌丝形成及生长．

简介：多胺是植物体内参与生长发育及各种逆境胁迫响应的一类重要化合物,其合成过程受多个基因的共同调控,S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosylmethioninedecarboxylase,SAMDC)基因参与多胺的合成过程并发挥关键作用,为研究该基因在红麻(HibiscuscannabinusL.)抗旱和耐盐过程中的作用,通过红麻转录组数据库筛选到SAMDC基因的核心片段,利用染色体步移技术获得了SAMDC基因cDNA全长,命名为HcSAMDC,生物信息学分析表明:HcSAMDC基因编码序列长1137bp,编码378个氨基酸,相对分子量为41.8kD,等电点为4.86。红麻HcSAMDC与其它植物的SAMDC同源性较高,其中与可可树氨基酸相似性为78%、与棉花SAMDC的氨基酸相似性为82%,该研究对下一步分析该基因功能、阐明麻类SAMDC基因的逆境调控机制和抗逆基因工程育种具有重要意义。

简介：为探索草莓果实中短链脱氢酶还原酶基因FaSDR在草莓果实发育中的作用,以‘北农香’不同发育时期的果实为试验材料,从克隆、生物信息学及表达分析草莓果实FaSDR特性。结果表明,FaSDR基因含有804bp开放阅读框,编码267个氨基酸的多肽,含有典型的脱氢酶保守功能结构域。半定量RT-PCR分析证实,在草莓果实发育过程中,FaSDR基因的表达量随着果实的着色快速升高,揭示该基因可能参与草莓果实成熟调控。

简介：目的探讨人骨形成蛋白-2（BMP-2）全长基因的克隆，及其真核表达重组子构建方法。方法采用Trizol法从人髁状突骨组织中提取制备总RNA，利用逆转录技术转录出BMP-2cDNA，以其为模版，PCR扩增出BMP-2全长基因，与真核表达载体pcDNA3．1（＋）连接．构建真核表达重组子pcDNA3．1（＋）／BMP-2．经酶切和序列分析鉴定重组子的构建情况。结果PCR扩增产物在1200000处有扩增条带．与目的基因大小相符．重组质粒经限制性内切酶HindⅢ和XbaⅠ双酶切后。得到5400000和1200000的BMP-2条带，BMP-2基因已成功克隆且成功与pcDNA3．1（＋）连接。结论成功克隆出人BMP-2基因，并构建其真核表达重组子pcDNA3．1／BMP-2，为进一步研究BMP-2的功能、BMP-2基因在骨髓间充质细胞（hMSCs）中表达以及在骨组织工程中的应用研究奠定了基础．

简介：

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简介：对营养期高活性杀虫菌株进行筛选，得到高效菌株BtLS1，对其营养期杀虫蛋白活性及发酵特性进行了系统研究，克隆了该菌株的vip3A新基因。测定了31株v驴3A基因阳性菌株营养期杀虫蛋白的活性，发现BtLS1和BtLS8菌株对甜菜夜蛾Spodopteraexigrua生长的抑制作用明显高于其他菌株。进一步研究表明，BtLS0菌株营养期杀虫蛋白对初孵和2龄甜菜夜蛾幼虫的体重增长抑制率分别为95．3％±2．1％和90．7％±6．6％；对棉铃虫Helicoverpaarmigera初孵幼虫的校正死亡率为22．1％，对2龄幼虫的体重增长抑制率为78．7％±6．6％。发酵液中以胞内可溶性物质为主。设计vip3A全长基因特异引物PCR扩增，插入质粒pBluescriptsK（＋），克隆测序证实该菌株中存在vip3A新基因，命名为Vip3A—LS1，GenBank登录号为DQ016968。按该序列推断的蛋白与同类蛋白的8个氨基酸之间存在差异。

简介：利用对表达序列标签（expressedsequencetag，EST）数据库进行比对和搜索分析，并通过RT-PCR的方法从烟草中克隆到一个包含1218bp开放阅读框的新基因NtDSK2。NtDSK2编码了具有典型的双特异性激酶特征的蛋白。此蛋白与花生的STY激酶属于双特异性激酶的同一个亚家族。基于EST的数字化组织表达特征分析推测NtDSK2在烟草组织中广泛表达。运用半定量RT-PCR方法检测了烟草受烟草花叶病毒（tobaccomosaicvirus，TMV）侵染后的表达特征。结果表明NtDSK2的表达量在TMV处理后随时间稳步上升，并在48h达到最大。推测NtDSK2是参与烟草抗胁迫调控的重要激酶基因。

简介：摘要克隆性造血（CH）指部分血液学指标正常的人体内有造血干/祖细胞的克隆性扩增。CH的发生随年龄增长而增加，一定程度反映出造血系统机能的衰退和潜在的克隆性演变。近年来越来越多的研究显示供者CH是影响异基因造血干细胞移植后移植物植入、移植物抗宿主病及供者细胞白血病发生等的不利因素。对供者CH的重视和鉴别可优化供者选择，使移植患者获益更多。文章结合第63届美国血液学会年会的内容对相关研究进展进行介绍。

简介：或许在不久的将来，人们不用打针吃药，喝牛奶就可能治好病。这种“药奶”，不是产自车间，而是牛群。因此，一头牛就是一个制药厂。目前，中国农业大学已经获得一批高效表达的奶牛乳房生物反应器。

简介：乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒（HCV）的慢性感染，与慢性病毒性肝炎、肝硬化、肝细胞癌（HCC）的发病密切相关，其发病机理涉及到很多基因的共同参与．病毒基因的复制和表达受到肝细胞中蛋白质因子的调节，肝炎病毒基因编码的蛋白与肝细胞中的蛋白能够结合，肝炎病毒蛋白在肝细胞中的表达对于肝细胞的基因表达谱产生影响，也可能是病毒性肝炎、肝硬化、肝细胞癌发病机制的重要机制．酵母单杂交技术、酵母双杂交技术、基因芯片技术、抑制性消减杂交技术、噬菌体展示技术、蛋白质分离纯化与基因克隆化的反向遗传学技术等，在肝炎病毒基因调控、肝炎病毒蛋白结合蛋白的研究、肝炎病毒蛋白反式激活靶基因的研究中都有重要的应用，是促进慢性病毒性肝炎发病机理研究，探索病毒性肝炎新型治疗技术和治疗方法的有效途径．

简介：目的了解临床分离大肠埃希菌Ayfy2926中TEM型β内酰胺酶的基因型。方法采用聚合酶链反应（PCR）扩增大肠埃希菌Ayfy2926中TEM型β内酰胺酶的全编码基因并对PCR产物进行序列分析;PCR产物克隆入pHSG398质粒并在感受态细胞大肠埃希菌JM109中进行表达,琼脂稀释法测定转化子菌株对β内酰胺类抗菌药的敏感性。结果大肠埃希菌Ayfy2926中TEM型β内酰胺酶的基因型为一种新亚型,TEM-166（GenBank注册号FJ197316）;与TEM-1相比,仅有1个氨基酸差异（Arg120→Gly）;与TEM-1转化子菌株相同,TEM-166转化子菌株对哌拉西林高度耐药,对第三代头孢菌素、亚胺培南敏感,β内酰胺酶抑制剂可显著降低克隆表达菌株的耐药性。结论TEM-166为TEM型β内酰胺酶的新亚型,是一种非超广谱β内酰胺酶。

简介：本研究以菠萝叶片为材料,从中克隆到一个可能与菠萝叶刺形成相关的基因AcSPL14(Ananascomosussquamosapromoter-binding-likeprotein14)。该基因cDNA全长为1330bp,开放阅读框为1086bp,编码362个氨基酸。结构域分析结果显示AcSPL14蛋白序列具有SPL蛋白家族共有的功能结构域--SBP(SQUAMOSApromoterbindingprotein-like)结构域,且与石刁柏(Asparagusofficinalis)、铁皮石斛(Dendrobiumcatenatum)、月季(Rosachinensis)和麻风树(Jatrophacurcas)的SBP序列相似性分别为53%、51%、47%和46%。在此基础上,本研究进一步构建了pBI121-AcSPL14过表达载体,获得了工程菌。本研究为AcSPL14在菠萝中的生物学功能鉴定提供了理论依据,对深入研究菠萝叶刺发生的分子机理具有重要意义。

简介：CIPK蛋白激酶家族（CBL-interactingproteinkinase）是一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族,与类钙调磷酸酶B亚基CBL（calcineurinB-likeprotein）蛋白共同形成CBL-CIPK网络,在植物的生长发育和逆境胁迫响应过程中发挥重要作用。烟草中该家族的研究还比较少,本研究从林烟草（Nicotianasylvestris）中获得一个CIPK家族基因,该基因与拟南芥和杨树中的CIPK3同源性分别为68.4%和87.5%,将其命名为NsylCIPK3。氨基酸序列分析表明,NsylCIPK3具有CIPK蛋白家族的典型结构特征,在N端和C端分别具有典型的激活环结构域和NAF结构域。进化树分析显示,NsylCIPK3属于CIPK蛋白亚家族Ⅱ。表达模式研究表明,该基因在林烟草的叶和腋芽中的表达量相对较高,在主根中的表达量次之,在侧根、茎、花瓣和萼片中的表达量相对较低,并且在烟草成熟期的叶中表达量明显升高。在高盐、紫外光和低钾胁迫下该基因的表达发生不同程度的上调。酵母双杂交结果显示,NsylCIPK3可与NsylCBL9互作。推测NsylCIPK3可能通过与NsylCBL9互作形成信号通路,激活下游靶蛋白,参与烟草响应非生物逆境胁迫的信号转导过程。

简介：大麦黄花叶病是我国长江中下游地区大麦种植区域的主要病毒病害,由大麦黄花叶病毒(BaYMV,Barleyyellowmosaicvirus)及大麦和性花叶病毒(BaMMV,Barleymildmosaicvirus)引起,自然条件下病毒寄生于禾谷多黏菌中,通过感染大麦根部导致病害发生。本研究通过分析RNA-seq数据,获得感染BaMMV后上调表达的基因HORVU1Hr1G069640(WRKY55)。荧光定量PCR分析发现WRKY55在感病品种中的表达水平极显著高于抗病材料,说明WRKY55参与到大麦感染黄花叶病的过程。WRKY55全长870bp,在415~594位核苷酸之间含有WRKY保守结构域,系统进化分析显示该基因位于独立的进化分枝。组织表达分析发现该基因主要在根部和幼嫩组织中表达,而其他成熟部位表达较少甚至没有。农杆菌介导的烟草亚细胞定位实验发现WRKY55位于整个细胞。酵母转录因子活性分析实验未检测到转录激活活性,酵母双杂交实验未检测到WRKY55与感病基因编码蛋白eIF4E和PDIL5-1存在物理相互作用。这些结果显示WRKY55参与到大麦黄花叶病感染。

简介：摘要目的应用cDNA分子克隆测序方法，鉴定中国南方汉族1个KIR3DL3新等位基因。方法采集1例KIR3DL3基因测序结果异常的无偿志愿捐血者的外周血样，提取mRNA并逆转录为cDNA。设计1对具有KIR3DL3基因特异性的PCR引物对cDNA进行扩增，扩增产物纯化后进行分子克隆测序。结果经分子克隆测序，检出1个正常的KIR3DL3*00802等位基因和1个KIR3DL3*064新变异等位基因。KIR3DL3*064与KIR3DL3*00601等位基因的序列最为接近，仅有编码区存在nt1184 C>T错义变异，导致第9外显子中的第374密码子由ACT变为ATT，所编码的苏氨酸(Thr)变为异亮氨酸(Ile)。该等位基因被世界卫生组织HLA因子命名委员会KIR分委会正式命名为KIR3DL3*064。结论cDNA分子克隆测序法能够鉴别常规测序分型中的异常结果，可用于鉴定KIR3DL3新等位基因。

简介：本研究获取主要组织相容性复合体（MHC）Ⅰ类分子的轻链部分,即β2-微球蛋白（β2m）以制备MHCⅠ类分子-肽四聚体.根据已报道的序列设计特异引物,利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法从人白细胞中克隆β2m的基因,并构建β2m的原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达.结果显示：构建的编码成熟β2m的pET-β2m可在大肠杆菌BL21（DE3）中高效表达β2m,表达量占菌体总蛋白的32%,β2m以包涵体的形式表达,经洗涤、变性后,以SephacrylS-200HR（S-200）柱层析纯化,纯度可达95%以上,纯化产物采用稀释法复性.Westernblot分析表明,该蛋白具有与抗人天然β2m抗体反应的特性.结论：获得了高效表达人β2m的大肠杆菌工程菌株,建立了简便有效的β2m包涵体纯化、复性方法,为制备MHCⅠ类分子-肽四聚体奠定了基础.

简介：真核生物起始因子(eIF)种类多且复杂,广泛参与真核生物翻译起始进程,并在植物生长发育调控过程中发挥重要的功能。本研究前期通过酵母双杂交从水稻cDNA文库筛选到一个可能调控根系生长发育的起始因子,CDS全长为828bp,该基因编码水稻eIF3g亚基,命名为OseIF3g1。利用RT-PCR技术进行克隆,将该基因全长CDS通过BamHⅠ和SmaⅠ酶切位点连接至植物表达载体pBI121,经双酶切验证后确认已成功构建转基因过表达载体,为该基因后续的遗传转化及相关功能研究提供基础。