简介：摘要目的评价大鼠机械通气相关性肺损伤时蛋白激酶Cδ(PKCδ)与细胞焦亡的关系。方法清洁级健康成年雄性SD大鼠36只，体重200～250 g，采用随机数字表法分为3组(n＝12)：对照组(C组)、机械通气相关性肺损伤组(VILI组)和PKCδ特异性抑制剂KAI 9803组(K组)。气管插管术后VILI组气管内注射200 μl磷酸缓冲盐溶液，K组气管内注射KAI 9803 200 μg/kg，行机械通气4 h(潮气量40 ml/kg、通气频率60次/min，吸呼比1∶1，吸入氧浓度21%，呼气末正压为0)。于机械通气结束时采集股动脉血样，进行动脉血气分析，记录PaO2。通气结束后麻醉处死大鼠，取肺组织，制备支气管肺泡灌洗液(BALF)，光镜下观察肺组织病理学结果并行肺损伤评分，计算肺组织湿重/干重(W/D)比值，采用考马斯亮蓝法测定BALF总蛋白浓度，采用ELISA法测定BALF IL-18和IL-1β浓度，分别采用Western blot法和qRT-PCR法测定肺组织PKCδ、gasdermin D N端片段(GSDMD-N)及其mRNA的表达。结果与C组比较，VILI组和K组肺损伤评分和W/D比值升高，PaO2降低，BALF总蛋白、IL-18和IL-1β浓度升高，肺组织PKCδ、GSDMD-N及其mRNA表达上调(P<0.01)；与VILI组比较，K组肺损伤评分和W/D比值降低，PaO2升高，BALF总蛋白、IL-18和IL-1β浓度降低，肺组织PKCδ、GSDMD-N及其mRNA表达下调(P<0.05或0.01)。结论PKCδ可介导细胞焦亡，参与大鼠机械通气相关性肺损伤的病理生理过程。

简介：目的：探讨蛋白激酶C(PKC)抑制剂Bisindolylm—aleimidel对培养人肺腺癌细胞A549的端粒酶活性的影响，为体内端粒酶活性的调节机制的研究提供理论基础。方法：用不同浓度BisindolylmaleimideI处理培养人肺腺癌细胞A549不同时间后，用台盼蓝染色法检测细胞生存能力，用PCR-EIA(polymerasechainreaction-basedenzymeimmunoassay)法检测端粒酶活性。结果：PKC抑制剂Bisindolylm-aleimideI能特异地抑制培养人肺腺癌细胞A549端粒酶活性，且具有时间和剂量依赖性。该抑制剂不影响被处理细胞的生存能力，因为大多数被处理细胞能生存(>80％)，不同浓度BisindolylmaleimideI处理培养人肺腺癌细胞A549不同时间后细胞生存能力无统计学差异(F=2．44，P>0．05)。此外，PCR—EIA法具有较高的灵敏度(最低检出限为15ng／μL的细胞提取物蛋白浓度)和特异性。结论：Bisindolylma-leimideI抑制培养人肺腺癌细胞A549端粒酶活性可能是通过PKC而起作用，PKC可能参与体内端粒酶活性的调节。PCR-EIA法具有较好的灵敏度与重复性，无同位素污染，简便、快速，检测成本低，无需特殊仪器，适合于各级医院推广。

简介：AngⅡ组VSMC的PKCζ与ERK1/2表达明显增加,TMP对VSMC增殖活度、PKCζ与ERK1/2表达的影响（略）,中、高剂量川芎嗪组PKCζ与ERK1/2的表达显著降低

简介：摘要目的探究死亡相关蛋白激酶3(death-associated protein kinases 3，DAPK3)缺乏是否通过抑制内质网应激而减轻血管钙化。方法采用前瞻性队列研究方法，通过体外细胞培养实验进行观察分析。人主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)采用F10K Kaighn′s改良培养基培养，根据培养基中是否添加β磷酸甘油(10 mmol/L)分为钙化组和非钙化组。钙化组细胞和非钙化组细胞又分别分为DAPK3抑制组及其对照组、内质网应激抑制组及其对照组、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)激活组及其对照组、DAPK3抑制＋腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein Kinase，AMPK)抑制以及空白对照组。测定各组的VSMC中DAPK3 mRNA以及蛋白浓度、钙含量、碱性磷酸酶、VSMC分化标志基因(SM22α、α-SMA)蛋白浓度、成骨分化转录因子[Runχ2、骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2，BMP-2)]蛋白表达浓度、内质网应激标志蛋白(AFT4、GRP78、GRP94以及CHOP)表达水平以及p-PAMK蛋白表达。结果钙化细胞DAPK3 mRNA(第14天达最高值15.24±0.72)以及蛋白(第14天达最高值11.31±0.38)显著高于非钙化细胞(5.63±0.62、2.59±0.33)，差异有统计学意义(P<0.001)。钙化细胞中，DAPK3缺乏组钙含量(86.54±8.21) mmol/g较对照组(194.63±8.54) mmol/g显著降低(t＝22.35，P<0.001)、碱性磷酸酶活性显著降低[(96.27±10.28) IU/g蛋白与(224.67±10.94) mmol/g蛋白，t＝20.951，P<0.001]、VSMC分化标志基因(SM22α、α-SMA)蛋白的表达显著上升[SM22α：(0.82±0.14)与(0.44±0.13)，t＝4.872，P＝0.001；α-SMA：(0.95±0.18)与(0.56±0.13)，t＝4.303，P＝0.002]、而骨分化转录因子(Runχ2、BMP2)蛋白表达显著降低[Runχ2：(1.12±0.28)与(2.21±0.35)，t＝5.957，P<0.001；BMP2：(0.82±0.12)与(1.26±0.16)，t＝5.39，P<0.001]、MAPK水平上调(DAPK3抑制组钙化细胞0.74±0.12、非钙化细胞1.04±0.14高于对照组钙化细胞0.44±0.10、非钙化细胞0.78±0.12，t＝4.704，P＝0.001；t＝3.454，P＝0.006)；抑制ESR钙化细胞的钙含量显著降低(细胞经AMPK通路抑制后转染shRNA组150.21±11.98、细胞转染shRNA组83.21±12.12低于转染空白对照组164.82±12.34，P<0.001)；碱性磷酸酶活性显著降低(细胞经MAPK通路抑制后转染shRNA组226.54±16.57、细胞转染shRNA组112.34±15.96低于转染空白对照组242.32±16.32，P<0.001)；激活MAPK钙化细胞的钙含量显著降低(P<0.001)、碱性磷酸酶活性显著降低(P<0.001)。结论DAPK3缺乏通过AMPK信号通路抑制内质网应激达到减缓VSMC钙化的作用。

简介：目的：探讨甘麦大枣汤加味方对抑郁症模型大鼠海马信号转导cAMP-蛋白激酶A（PKA）途径的影响。方法：以孤养加慢性不可预见性中等刺激所致抑郁症大鼠为模型，灌服甘麦大枣汤加味方，通过旷场行为测定、糖水消耗试验观察行为变化，放免法测定海马cAMP含量以及原位杂交法测定海马5-HT1A受体、PKAmRNA表达。结果：模型组大鼠垂直活动、水平运动及糖水消耗显著下降，海马cAMP、PKAmRNA表达显著上升（P〈0．01）。用药组与模型组比较，水平运动及垂直活动上升，糖水消耗增加，cAMP含量显著下降，PKAmRNA表达显著下降（P〈0．01）且呈量效关系。结论：甘麦大枣汤加味方下调抑郁症大鼠海马信号转导cAMP—PKA途径可能是该方纠正抑郁症模型大鼠行为学变化的环节之一。

简介：目的旨在探讨蛋白激酶C调节剂对原代培养人垂体腺瘤细胞分泌生长激素和催乳素作用的影响。方法经原代培养的人垂体腺瘤细胞与佛波醇酯共同培养，通过放射免疫学方法检测生长激素和催乳素水平．评价佛波醇酯对生长激素释放激素调节垂体腺瘤激素分泌作用的影响：同时应用DNA序列分析确定gsp癌基因突变率。结果gsp癌基因鉴定显示．18例垂体腺瘤组织标本中6例gsp癌基因表达阳性．5例突变位于201密码子，1例位于207密码子。佛波醇酯强烈刺激生长激素和催乳素的分泌并增强生长激素释放激素的刺激分泌作用．最大效应浓度为100nmol／L，使生长激素分泌水平增加2～30倍；Staurosporine作用则相反，大多数肿瘤细胞表现为明显的抑制效应，而且与gsp癌基因不相关；联合应用生长激素释放激素和佛波醇酯后使刺激分泌的作用增强，但与gsp癌基因亦无关。结论蛋白激酶C可能参与垂体腺瘤激素分泌的调控。

简介：摘要目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase, p38MAPK）-肌质网Ca2+-ATP酶2α（sarcoplasmic/endoplasmic reticulum Ca2+ ATPase 2α, SERCA2α）信号通路在大鼠心肌缺血/再灌注损伤（ischemia/reperfusion injury, I/RI）中的作用。方法采用随机数字表法将45只雄性SD大鼠（体重250~300 g）分为A组、B组和C组（每组15只），其中A组用于测定心肌梗死面积，B组用于检测心肌组织p38MAPK和SERCA2α蛋白量，C组用于检测心肌组织SERCA2α mRNA。分别将A组、B组和C组组内大鼠按随机数字表法分为3组（每组5只）：假手术组（Sham组）、缺血/再灌注（ischemia/reperfusion, I/R）组（I/R组）、I/R+SB203580组（I/R+S组）。I/R+S组于术前1 h腹腔注射p38MAPK抑制剂SB203580（2 mg/kg），其余两组于术前1 h仅注射等体积生理盐水。采用结扎冠状动脉左前降支（left anterior descending, LAD）30 min后再灌注10 min的方法建立大鼠心肌I/RI动物模型。再灌注结束后，动脉血气分析法监测大鼠内环境状态，Western blot法检测心肌组织磷酸化p38MAPK（phospho-p38MAPK, p-p38MAPK）、SERCA2α蛋白水平，实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR, RT-qPCR）法检测心肌组织SERCA2α mRNA水平，伊文蓝及2，3，5-氯化三苯基四氮唑（2, 3, 5-triphenyl tetrazolium chloride, TTC）双染色法测定心肌缺血和心肌梗死面积。结果各组大鼠血气分析结果差异无统计学意义（P>0.05）。与Sham组比较，I/R组与I/R+S组心肌梗死面积与心肌组织中p-p38MAPK蛋白水平明显增加（P<0.05）、SERCA2α蛋白及mRNA水平明显降低（P<0.05）。与I/R组比较，I/R+S组心肌梗死面积明显减少、p-p38MAPK蛋白水平明显降低（P<0.05），SERCA2α蛋白和mRNA水平明显升高（P<0.05）。结论p38MAPK可能通过介导SERCA2α参与大鼠心肌I/RI。

简介：摘要目的探讨受体相互作用蛋白激酶4(RIPK4)在乳腺癌发生、发展中的作用及其机制。方法收集郑州大学第一附属医院乳腺外科2017年10月至2018年7月手术切除的乳腺癌和癌旁正常组织96例，采用免疫组织化学方法检测RIPK4蛋白在96例乳腺癌和癌旁正常组织中的表达及其与乳腺癌临床病理特征间的关系；靶向RIPK4的小干扰RNA(siRNA)瞬时转染乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞，同时以转染阴性对照siRNA和空白细胞为对照，共分为3组：RIPK4 siRNA转染组、空白细胞组和阴性对照siRNA转染组。细胞计数试剂盒(CCK-8)试验和侵袭小室试验检测抑制RIPK4蛋白表达对MCF-7、MDA-MB-231细胞增殖和侵袭转移能力的影响，蛋白质印迹法(Western blot)检测抑制RIPK4蛋白表达对Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。采用方差分析进行组间比较，采用t检验进行两两比较。结果免疫组织化学结果显示RIPK4蛋白在乳腺癌组织中的表达明显增高(71.9%，69/96)，与癌旁正常组织比较(21.9%，21/96)，差异有统计学意义(χ2＝48.188，P<0.01)；且RIPK4蛋白异常高表达与乳腺癌患者的TNM分期、组织学类型及淋巴结转移明显相关(χ2＝17.524、40.697、9.458，P<0.05)；靶向RIPK4的siRNA瞬时转染MCF-7、MDA-MB-231细胞后，CCK-8试验和侵袭小室试验结果显示，MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖和侵袭转移能力降低；进一步试验表明RIPK4 siRNA抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞中RIPK4蛋白的表达后，Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin表达随之下降，上皮-间充质转化(EMT)的相关蛋白上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达增高而波形蛋白(Vimentin)表达下降。结论RIPK4蛋白在乳腺癌组织中异常高表达，抑制RIPK4蛋白的表达有可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路相关的EMT的发生降低乳腺癌细胞的增殖、侵袭转移能力。

简介：摘要目的探讨RA-成纤维样滑膜细胞（FLS）中双特异性磷酸酶8（DUSP8）DUSP8与促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）1之间的相互作用，及其对RA-FLSs增殖、凋亡的影响。方法培养RA-FLS和正常FLS，采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）、蛋白质印迹法检测两组细胞DUSP8 mRNA表达水平。采用细胞转染技术及RNA干扰技术，构建DUSP8过表达细胞系及DUSP8沉默细胞系。CCK-8法检测各组细胞增殖，流式细胞术检测各组细胞凋亡。蛋白质印迹法检测各组细胞DUSP8、MAPK1、p-MAPK1、ki-67、Bax蛋白表达水平。间接免疫荧光实验分析DUSP8与MAPK1的空间共定位，免疫共沉淀实验分析DUSP8与MAPK1蛋白之间是否存在相互作用。计量资料两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果DUSP8在RA-FLS mRNA[（2.4±0.6）和（11.2±0.8），t=21.63，P<0.001]和蛋白表达[（0.24±0.04）和（0.74±0.08），t=9.45，P<0.001]水平均显著低于FLS。与空白对照组和过表达对照组相比，在RA-FLS细胞转染pcDNA3.1-Myc-DUSP8可显著抑制RA-FLS细胞的增殖[（90.5±5.6），（92.5±1.8），（56.4±4.4），F=138.60，P<0.001]，增加细胞凋亡率[（12.7±1.4）%和（12.6±1.3）%和（27.5±3.0）%，F=16.98，P<0.001]，上调细胞的DUSP8'[（0.49±0.05），（0.45±0.04）和（0.73±0.07）]、Bax[（0.39±0.06），（0.36±0.05）和（0.89±0.10）]蛋白表达水平，下调ki-67[（1.07±0.12）和（1.11±0.16）和（0.70±0.08）]、p-MAPK1/MAPK1[（0.59±0.06）和（0.65±0.07）和（0.39±0.03）]蛋白表达水平（均P<0.001）；与空白对照组和沉默对照组相比，在RA-FLS细胞转染siRNA-DUSP8可显著促进RA-FLS细胞的增殖[（90.5±5.6）和（91.1±2.9）和（128.3±4.6），F=137.50，P<0.001]，降低细胞凋亡率[（12.7±1.4）%和（13.2±1.2）%和（5.4±0.7）%，F=16.98，P<0.001]，下调细胞中的DUSP8[（0.492±0.048）和（0.432±0.051）和（0.102±0.024）]、Bax[（0.391±0.062）和（0.411±0.058）和（0.090±0.011）]蛋白表达水平，上调ki-67[（1.07±0.12）和（1.11±0.15）和（1.93±0.22）]、p-MAPK1/MAPK1[（0.59±0.06）和（0.68±0.06）和（0.93±0.11）]蛋白表达水平（均P<0.05）。间接免疫荧光实验结果表明DUSP8与MAPK1均可在RA-FLS细胞质和细胞核中表达，免疫共沉淀实验验证DUSP8与MAPK1蛋白具有相互作用。结论DUSP8通过与MAPK1相互作用调节MAPK1磷酸化，抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖，并促进凋亡。

简介：摘要人类乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是最常见的性传播病毒，全球范围内正常人群的HPV感染率平均为10%，HPV感染人类皮肤和黏膜上皮细胞后可引起多种良恶性疾病。磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylin-ositol-3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，Akt/PKB）信号通路是人体散发性肿瘤中最常见的信号通路，与细胞增殖密切相关，HPV感染后导致基因突变、细胞周围环境改变以及产生的各种癌蛋白对该信号通路中的关键调节因子产生激活或抑制效应，从而使细胞的生长不再受养分等环境条件的限制；信号通路下游分子的改变也能对HPV基因的复制、转录和表达产生影响，二者相互作用共同导致HPV相关疾病的发生和发展。本文综合国内外文献，简述PI3K/Akt信号途径在HPV感染相关疾病中的作用以及与通路相关的药物治疗进展，为此类疾病提供更为广阔的治疗前景。

简介：

简介：【摘要】目的 探讨治疗心衰患者给予环磷酸腺苷葡胺的疗效。方法 选取2021年8月-2022年8月本院98例心衰患者，采用随机数字表法，分为参照组（常规治疗法）与观察组（环磷酸腺苷葡胺治疗），对比临床疗效。结果 患者治疗疗效方面，观察组治疗有效率明显要比参照组高（P

简介：摘要目的探讨小分子干扰RNA（siRNA）对人食管癌EC9706细胞蛋白激酶CK2β基因表达的影响。方法体外转录合成CK2βsiRNA，转染EC9706细胞，采用RT-PCR及免疫细胞化学技术检测转染前后CK2β的表达水平。结果各实验组CK2β表达量均较对照组降低（p<0.05）。结论特异性siRNA能有效抑制EC9706细胞中CK2β基因的表达。

简介：摘要目的探讨丝裂原和应激激活蛋白激酶1(MSK1)在丙泊酚保护小鼠缺血脑组织中的作用。方法50只健康成年雄性BALB/c小鼠采用随机数字表法分为5组，分别为假手术组(Sham)；大脑中动脉阻塞(MCAO)+生理盐水组；MCAO+25 mg/kg丙泊酚组(小剂量组)；MCAO+50 mg/kg丙泊酚组(中剂量组)；MCAO+100 mg/kg丙泊酚组(大剂量组)，每组10只，各组术后30 min经腹腔注射0.2 ml生理盐水或是等体积生理盐水稀释的丙泊酚。双盲断头收集缺血核心区(Ic)；半影区(P)；C，对侧皮层(C)皮层组织，利用小鼠大脑中动脉阻塞模型，结合神经行为学评分表观察(n＝10)不同剂量丙泊酚对小鼠神经缺陷的影响，利用蛋白印迹(Western blot)(n＝6)检测小鼠脑皮层不同缺血区域磷酸化MSK1(P-MSK1)和总MSK(T-MSK1)的表达；利用免疫荧光染色、共聚焦显微镜等技术(n＝4)明确小鼠MCAO 6 h缺血皮层P-MSK1阳性细胞类型及数目的改变。组间比较进行单因素方差、t检验。结果各实验组行为学评分差异有统计学意义(MCAO：7.90±0.35，MCAO+Propofol 25组：7.10±0.28，MCAO+Propofol 50组：6.40±0.27，MCAO+Propofol 100组：5.70±0.26，F＝10.56，P<0.05)。各实验组皮层半影区P-MSK1差异有统计学意义(F＝15.22，P<0.05)。与MCAO比较，MCAO+Propofol 25组差异无统计学意义(53.06±3.09比48.65±2.86，t＝0.99，P>0.05)；MCAO+Propofol 50组差异有统计学意义(5.40±0.27比7.60±0.27，t＝-5.83，P<0.05)；MCAO+Propofol 100组差异有统计学意义(78.13±3.28比48.65±2.86，t＝8.053，P<0.05)。而MSK1总蛋白表达量在缺血核心区和半影区对侧皮层均无明显改变。缺血皮层P-MSK1阳性细胞和神经元核特异性标记物NeuN共定位，不同实验组小鼠皮层缺血半影区高倍镜视野下NeuN阳性和P-MSK1阳性共定位细胞数差异有统计学意义(MCAO：18.53±1.31，MCAO+Propofol 25组：21.57±1.66，MCAO+Propofol 50：36.72±3.13，MCAO+100 mg/kg组：48.3±3.86，F＝26.39，P<0.05)，MCAO+Propofol 25组与MCAO组比较(21.57±1.66比18.53±1.31，t＝1.44，P>0.05)，MCAO+Propofol 50组与MCAO组比较(36.72±3.13比18.53±1.31，t＝5.36，P<0.05)，MCAO+Propofol 100组与MCAO组比较(48.30±3.86比18.53±1.31，t＝7.31，P<0.05)。结论丙泊酚可通过提高小鼠缺血皮层半影区内MSK1磷酸化水平，提高神经元存活数来减轻小鼠缺血性脑损伤。

简介：摘要目的探讨Fat1对食管鳞癌(ESCC)细胞增殖能力的影响及其机制。方法以Plko.1-puro-GFP-shRNA-Fat1质粒转染KYSE450细胞，应用实时定量PCR检测Fat1敲低效率。采用四甲基偶氮唑蓝法检测Fat1和细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路抑制剂U0126对KYSE450细胞增殖能力的影响，平板克隆实验观察Fat1对ESCC细胞克隆形成能力的影响，活细胞动态观察细胞周期，Western blot方法检测相关靶蛋白的表达。通过裸鼠体内成瘤实验检测KYSE450细胞敲低Fat1后对移植瘤生长的影响，免疫组化方法检测肿瘤组织中相关蛋白的表达。结果Fat1sh1组和Fat1sh2组细胞中Fat1敲低效率分别为(77.1±6.9)%和(77.7±7.1)%。与对照组相比，Fat1sh1组和Fat1sh2组细胞增殖明显加快(P<0.05)，细胞中p-ERK1/2的表达明显增加。经U0126处理后，Fat1敲低促进KYSE450细胞增殖的作用消失，细胞中p-ERK1/2的表达下降到与对照组相近的水平。对照组的细胞克隆数为(72±8)个，Fat1sh1组和Fat1sh2组分别为(155±28)个和(193±9)个，均高于对照组(均P<0.05)。对照组细胞分裂1次的时间为(1 622±32)min，Fat1sh1组细胞分裂1次的时间为(1 408±29)min，比对照组明显缩短(P<0.05)。裸鼠成瘤实验显示，Fat1敲低组比对照组裸鼠移植瘤增长速度快，接种后4周，对照组和Fat1敲低组瘤体重量分别为(0.224±0.028)g和(1.532±0.196)g，差异有统计学意义(P<0.05)。结论Fat1可通过抑制ERK信号通路进而抑制ESCC细胞增殖。

简介：摘要目的研究小檗碱对白血病耐药细胞株K562/A02阿霉素耐药性及蛋白激酶C-α（PRKCA）的影响，探讨其作用机制。方法体外培养人慢性粒细胞白血病K562细胞、阿霉素耐药株K562/A02，使用2.5~50.0 μmol/L的阿霉素处理，检测K562、K562/A02对阿霉素的耐药性，计算药物半抑制浓度（IC50）；采用终浓度5 μmol/L的阿霉素溶液处理K562/A02细胞，并将K562/A02细胞分为对照组、抑制剂组（50 μmol/L PRKCA抑制剂）及小檗碱低、中、高剂量组，采用细胞计数（CCK-8）法检测各组细胞增殖抑制率，通过流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况，实时荧光定量PCR法检测PRKCA、多药耐药相关基因（MDR1）水平，Western blot法检测PRKCA、多药耐药相关蛋白（MRP）、P-糖蛋白（P-gp）表达情况。结果与K562比较，K562/A02对阿霉素的IC50升高（P<0.05）；与对照组比较，抑制剂组及小檗碱低、中、高剂量组细胞增殖抑制率、凋亡率升高（P<0.05），PRKCA mRNA［（0.45±0.08）、（0.92±0.10）、（0.57±0.05）、（0.35±0.04）比（1.00±0.12）］、MDR1 mRNA［（0.73±0.08）、（0.87±0.09）、（0.65±0.07）、（0.41±0.05）比（1.00±0.11）］及PRKCA蛋白［（0.59±0.09）、（0.78±0.12）、（0.61±0.11）、（0.42±0.07）比（0.96±0.14）］、MRP蛋白［（0.62±0.08）、（0.79±0.13）、（0.62±0.10）、（0.41±0.06）比（0.98±0.14）］、P-gp［（0.55±0.08）、（0.75±0.12）、（0.59±0.09）、（0.35±0.06）比（0.92±0.15）］表达降低（P<0.05），且小檗碱呈药物剂量依赖性（P<0.05）；过表达PRKCA可显著抑制小檗碱逆转K562/A02细胞耐药的作用。结论小檗碱可能通过下调PRKCA逆转人白血病耐药株K562/A02对阿霉素的耐药性。

简介：摘要目的通过分析网络生物数据探讨丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3(RIPK3)基因在胶质瘤中的表达及分子调控机制。方法应用Gepia2数据库对进行TCGA肿瘤数据和GTEx正常数据联合分析，筛选差异表达基因，进一步对RIPK3基因的调控机制进行分析。荧光实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测20例胶质瘤组织及正常组织中RIPK3 mRNA、FGD5-AS1、微小RNA(miR)-223-3p的表达，对其关系进行分析。结果Gepia2分析显示，胶质瘤和正常组织中存在7 659个差异表达基因。差异表达结果发现RIPK3 mRNA在胶质瘤组织中表达水平(1.862±1.621)显著高于正常组织(0.693±0.801，Z＝9.067，P<0.01)。应用STRING数据库分析RIPK3的PPI网络进行富集分析，结果显示RIPK3互相作用的蛋白参与半胱氨酸型内肽酶(cysteine-type endopeptidase)活性、核因子-κB(NF-κB)信号通路等的调控。长非编码RNA FGD5-AS1在胶质瘤中表达水平(6.401±0.683)高于正常组织(5.406±0.796，t＝12.697，P<0.01)，并与RIPK3呈正相关(rs＝0.402，P<0.01)；数据库分析显示RIPK3与FGD5-AS1互为内源性竞争RNA(ceRNA)，通过miR-223-3p发挥作用。对FGD5-AS1、miR-223-3p、RIPK3 mRNA在胶质瘤及正常组织中表达检测的RT-qPCR结果显示，FGD5-AS1、RIPK3 mRNA在胶质瘤组织中表达水平(1.942±0.695、1.392±0.360)均高于正常组织(0.533±0.208、0.293±0.144，t＝8.686、12.676，P<0.01)，而miR-223-3p在胶质瘤组织中表达水平(0.843±0.213)低于正常组织(2.334±0.758，t＝－8.469，P<0.01)。在胶质瘤组织中RIPK3 mRNA与FGD5-AS1表达呈正相关(rs＝0.840，P<0.01)，RIPK3 mRNA、FGD5-AS1与miR-223-3p表达呈负相关(rs＝－0.914、－0.872，P<0.01)。结论RIPK3在胶质瘤组织中呈高表达，与胶质瘤进展有关。FGD5-AS1可能通过内源性竞争机制通过抑制miR-223-3p而调控RIPK3的表达。

简介：本研究通过对急性白血病病人及体外肿瘤细胞株的DNA甲基化及基因表达的实验,探讨死亡相关蛋白激酶（death-associatedproteinkinase,DAPK）基因在急性白血病中的表达情况及其启动子区域甲基化的状态,并分析两者之间的相关程度.应用RT-PCR检测DAPK基因在白血病细胞及正常骨髓细胞中的表达;用巢式甲基化特异性PCR（n-MSP）法检测急性白血病患者及细胞株DAPK基因启动子甲基化状况;从第二轮巢式MSP扩增出的随机产物中挑选2个随机引物,交予专业机构克隆后进行序列分析.结果表明：DAPK基因在10例正常对照者骨髓标本中均有表达,DAPKmRNA在急性白血病病人骨髓标本中表达平均值为0.61±0.40,低于正常对照者,差异有显著性（P＜0.05）,其中52.94％（9/17例）的急性淋巴细胞白血病病人骨髓标本DAPKmRNA表达降低或缺失,急性髓系白血病病人数据为41.18％（42/102）;细胞株U-937显示基因表达正常,HL-60表达缺失;102例急性髓系白血病病人骨髓标本中33例存在DAPK启动子区甲基化,甲基化率为32.4％（33/102）;17例急性淋巴细胞白血病病人骨髓标本中8例存在DAPK启动子区甲基化,甲基化率为47％（8/17）;7例正常人骨髓标本DAPK启动子区均为非甲基化;细胞株U-937DAPK启动子区非甲基化,HL-60DAPK启动子区甲基化.ALL组与AML组患者骨髓细胞DAPKmRNA表达与其启动子甲基化均呈显著负相关（ALL组r=-0.855,P＜0.05;AML组r=-0.343,P＜0.05）,提示两者有密切的关联.结论：急性白血病患者中DAPK基因启动区甲基化与其mRNA的异常表达或失表达有关.

简介：摘要目的探讨Fat1对食管鳞癌(ESCC)细胞增殖能力的影响及其机制。方法以Plko.1-puro-GFP-shRNA-Fat1质粒转染KYSE450细胞，应用实时定量PCR检测Fat1敲低效率。采用四甲基偶氮唑蓝法检测Fat1和细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路抑制剂U0126对KYSE450细胞增殖能力的影响，平板克隆实验观察Fat1对ESCC细胞克隆形成能力的影响，活细胞动态观察细胞周期，Western blot方法检测相关靶蛋白的表达。通过裸鼠体内成瘤实验检测KYSE450细胞敲低Fat1后对移植瘤生长的影响，免疫组化方法检测肿瘤组织中相关蛋白的表达。结果Fat1sh1组和Fat1sh2组细胞中Fat1敲低效率分别为(77.1±6.9)%和(77.7±7.1)%。与对照组相比，Fat1sh1组和Fat1sh2组细胞增殖明显加快(P<0.05)，细胞中p-ERK1/2的表达明显增加。经U0126处理后，Fat1敲低促进KYSE450细胞增殖的作用消失，细胞中p-ERK1/2的表达下降到与对照组相近的水平。对照组的细胞克隆数为(72±8)个，Fat1sh1组和Fat1sh2组分别为(155±28)个和(193±9)个，均高于对照组(均P<0.05)。对照组细胞分裂1次的时间为(1 622±32)min，Fat1sh1组细胞分裂1次的时间为(1 408±29)min，比对照组明显缩短(P<0.05)。裸鼠成瘤实验显示，Fat1敲低组比对照组裸鼠移植瘤增长速度快，接种后4周，对照组和Fat1敲低组瘤体重量分别为(0.224±0.028)g和(1.532±0.196)g，差异有统计学意义(P<0.05)。结论Fat1可通过抑制ERK信号通路进而抑制ESCC细胞增殖。

简介：摘要目的探索快速上浮脱险致减压病大鼠肺组织炎性反应机制，观察快速上浮脱险致减压病大鼠发病早期肺组织细胞外调节蛋白激酶(ERK)活性变化。方法18只大鼠被分为对照组、快速上浮脱险存活组和快速上浮脱险死亡组，每组6只。快速上浮脱险大鼠在不安全的"快速上浮脱险"8 min后麻醉处死取材。所取肺组织应用Western blotting实验检测p-ERK蛋白表达量。结果快速上浮脱险死亡组大鼠肺组织p-ERK表达量较对照组有显著增高，快速上浮脱险存活组大鼠肺组织p-ERK表达量较对照组无显著增高。结论快速上浮脱险导致减压病大鼠肺组织发生炎性反应可能与ERK激活有关。